• KSBB Journal
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• 제13권5호
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• pp.502-510
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• 1998

Stabilization of antibody, which is specific to Salmonella typhimurium antigens, present in dry states on membranes was accomplished, and its shelf-life, i.e., duration for maintaining minimum 90% of the initial activity, under optimal conditions was determined. To prepare two major components of an immuno-strip, the antibody was not only immobilized on nitrocellulose membrane surfaces but also placed within the pores of glass fiber membrane after conjugating it with old colloids as signal generator. Among potential stabilizers of the immuno-components, a disaccharide, trehalose, showed a significant protection effect of immunoglobulin structure from thermal energy. Optimal concentrations of trehalose for the respective component were significantly different (8-fold higher for the antibody-gold conjugate than for the immobilized antibody), which probably resulted from distinct densities and configurations of antibody present on the membranes. An additional requirement for the gold conjugate was freeze-drying of this substance such that the conjugate can be readily resolubilized upon contact with aqueous medium. By using the components prepared under optimal conditions, immuno-strips were constructed and exposed to thermal energy. Signals with less than 10% decrease in the intensity were maintained for approximately 21 days at 60$^{\circ}C$. Compared to previous reports, this result represented a 2-year shelf-life at room temperature. it was, however, two times longer if determined from thermal acceleration tests based on the theory of inactivation rate of protein. Such discrepancy between the two estimates could be mainly attributed to errors in accurately controlling temperatures and also to changes in the physical properties of membranes due to a high thermal energy.

• 한국축산식품학회지
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• 제34권3호
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• pp.339-345
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• 2014

This study was performed to develop a rapid immuno-assay kit, by using a specific antigen to detect Hanwoo brand meat. We selected a synthetic antigen specific to our target antibody, named BIO-TAG (Tyr-D-Ala-Phe), by utilizing a computer-based analysis and literature review. BIO-TAG tagged with adjuvant was subcutaneously injected in sheep and Hanwoo. The serum and meat juice of the immunized or non-immunized animal were then analyzed, to measure the titer of antibody by ELISA and Western blot. The amount of antibodies against the BIO-TAG increased (p<0.05) in serum by vaccination. Furthermore, meat juice from the immunized Hanwoo showed greater (p<0.05) antibody titer, compared with those from non-immunized groups. To optimze the dilution factor, we performed dot-ELISA, with various combination levels of BIO-TAG. Results from dot-ELISA showed that 2 mg/mL BIO-TAG was sufficient to distinguish the immunized meat from non-immunized groups. These results support our hypothesis that simple immunization of Hanwoo generates a sufficient amount of antibodies to be detectable in the meat juice by means of the immune-assay. Therefore, specific Hanwoo brand meat can be more precisely identified by our rapid diagnostic kit. This technology can deter possible fraud of counterfeit meat brands in the Korean domestic market with ease and rapidity; and offers a new tool that guarantees consumers high quality Hanwoo brand beef.

• 대한의생명과학회지
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• 제3권2호
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• pp.107-114
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• 1997

전립선특이 항원 (PSA: Prostate Specific Antigen)은 전립선 세포에서 분비되는 단백질로서 장기 특이성이 높아 전립선암의 조기진단 및 치료의 예후를 판단하기 위해 임상에서 널리 사용되고 있는 혈청 종양표지검사의 대상항원이다. 그러나 혈청 PSA치는 전립선암 뿐 아니라 양성 전립선질환인 전립선비대증 (BPH), 전립선 경색, 전립선 염증 등에서도 상승될 수 있다. 혈청 내의 PSA는 여러 가지 분자형태로 이루어져 있으며 대표적으로 ${alpha}_1$-antichymotrypsin과 결합된 결합형 PSA(PSA-ACT)와 유리형 PSA (free PSA)로 나눌 수 있다. 전립선 암 환자의 혈청에는 결합형 PSA가 95% 이상으로 매우 높고 유리형 PSA의 분포는 매우 작은 반면 전립성비대증에서는 유리형 PSA의 농도가 높아지므로, 결합형 PSA와 동시에 유리형 PSA를 측정하면 종양표지검사로서의 특이성과 예민도를 높일 수 있다는 보고가 있어, 최근 혈청내의 유리형 PSA의 측정의 중요성이 임상적으로 대두되고 있다. 이에 본 연구에서는 sandwich 원리로 유리형 PSA 효소면역 측정법 (EIA) kit를 개발하고 그 유용성을 검토한 결과, 고, 저 농도에서의 일내, 일간 변이 계수 (CV)는 4% 이하였으며 상품화된 free PSA kit와 비교하였을 때 두 방법간의 상관계수는 0.9965으로 매우 양호하였다. 또한 농도가 높은 세 환자의 검체를 희석하여 직선성 검사를 하였을 때 상관계수가 모두 0.995이상으로 나타났다. 또한 microplate 법에서 문제될 수 있는 hook effect는 유리형 PSA농도가 40 ng/mL까지 나타나지 않았으며, 98.9%~104.1%의 회수율을 나타내었다. 따라서 본 연구에서 개발한 면역측정법 kit는 혈청 중의 유리형 PSA를 정확하고 간편하게 분석할 수 있으므로 임상 실험실에서 전립선암이나 전립선질환의 진단 및 치료효과의 판정에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제39권1호
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• pp.67-76
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• 2001

This experiment was focused on the characterization of anti- Toxoplasma monoclonal antibodies (mAbs) and the effect of mAbs on the parasite invasion of mouse peritoneal macrophages. Twenty eight mAbs including M110, M556, R7A6 and M62l were characterized by Ab titer, immunoglobulin isotyping and western blot pattern. Antibody titer (optical density) of 4 mAbs. Ml 10. M556. R7A6 and M62l. were 0.53,0.67, 0.45 and 0.39 (normal mouse serum; 0.19) with the same IgGl isotypes shown by Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Western blot analysis showed that Ml 10. M556. R7A6 and M62l reacted with the 33 kDa (p30),31 kDa (p28),43 kDa and 36 kDa protein. Immuno-gold labelling of mAbs M110, M556, R7A6 and M621 reacted with the surface membrane, dense granules and parasitophorous vacuolar membrane (PVM) , rhoptries and cytoplasm of tachyzoite, respectively. For in vitro assay, preincubation of tachyzoties with four mAbs, Ml 10, M556, R7A6 and M62l resulted in the decrease of the number of infected macrophages (p < 0.05) and the suppression of parasite multiplication at 18 h post-infection. Four monoclonal antibodies including Ml 10 (SAGI) were found to have an important role in the inhibition of macrophage invasion and T. gondii multiplication in vitro, and these mAbs may be suitable for vaccine candidates, diagnostic kit and for chemotherapy.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제33권2호
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• pp.107-116
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• 1995

국내 마우스에서 분리된 작은와포자충(Cwptospoyidinpown)을 마우스에서 증식시킨 다음 오오시스트만을 순수 분리하여 BAIB/c 마우스에 면역시켰다. 면역된 마우스의 비장에서 림프구를 분리하여 PEG 1500을 융합촉진제로 사용하여 Sp2/0 myeloma cell과 세포융합을 실시하였으며, 융합된 세포중 작은와포자충에 특이항체를 생산하는 hybridomacell을 선발하였다 한계희석법으로 제작된 2주의 단세포군항체는 IgG2b class(lE7.2)와 IgM class(C6)에 속했으며. SDS-PAGE와 Westernblotting한 결과 (IE7.2)는 원충의 단백항원중 36 kDa과 반응하였고, C6는 67 kDa 및 70 kDa과 반응하였다 생산된 단세포군항체를 간접 형광항체법으로 작은와포자충과 반응시킨 결과 오오시스트 외막체 특이적으로 반응하였던 반면, Tomplasma gondii의 tachyzoite, Eimeria zuernii E. bouis, E. conodensis의 오오시스트와는 반응을 나타내지 않았다. 단세포군항체 C6을 이용한 간접 형광항체법은 분변의 이물들의 데조염색을 위해 Inns blue를 사용하였으며, 관찰소견으로는 $3-5{\mu\textrm{m}}$의 등근 오오시스트가 9.l은 형광을 띄고 있었고 그외의 주변이물들은 대조염색에 의하여 검붉게 염색되었다 또한 그의 진단율은 현재 일반적으로 사용되고 있는 수입진단킷트(Merifluor, Meridian diagnostic Ins.)와 거의 일치하고 있었다. 이상의 결과를 종합해보면 이번에 생산된 단세포군항체 들은 작은와포자충에 특이적으로 반응하고 있었으며, 이를 이용한 형광항체 진단법은 작은와포자충을 진단하는데 유용하게 사용될 수 있을 것으로 판단된다.

• Pediatric Infection and Vaccine
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• 제7권2호
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• pp.193-200
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• 2000

목 적 : 호흡기 감염증으로 입원한 생후 2세 이하의 어린이에서 RSV 항원 검사에서 양성인 어린이의 임상소견을 분석하고자 하였다. 방 법 : 1999년 10월부터 2000년 3월까지 호흡기 감염증으로 입원한 2세 이하의 어린이에서 VIDAS $^{(R)}RSV$ kit를 이용하여 enzyme-linked fluorescent immunoassay(ELFA) 방법으로 비강 삼출액에서 RSV 항원을 검출하고 양성인 환아에 대하여 흉부 X-선 소견, 검사 소견을 분석하고 임상양상을 검토하였다. 결 과 : ELFA법에 의한 RSV 항원 검출율은 총 대상 환아 102명 중 48례로 47%였다. 48례의 환아에서 남녀비는 1.2 : 1이었고 대상 환아의 평균 월령은 $10.2{\pm}5.9$개월이었다. RSV 항원 검사를 시작한 10월에 12례 25%, 11월에 21례 44%로 11월에 최고의 발생을 보였다. 가장 흔한 증상은 기침으로 전례에서 관찰되었고 30례(60%)에서 청진시 rale을 들을 수 있었으나 호흡곤란과 천명, 늑간 함몰은 각각 11례(23%), 15례(31%), 및 10례(21%)에서 관찰되었다. 말초혈 검사에서 대상 환아의 총 백혈구 수는 평균 $12,608{\pm}4,686/mm^3$이었고 IgA 및 IgE는 각각 $50.8{\pm}20.9$, $72.1{\pm}98.3mg/dL$, CRP는 $16{\pm}18.5mg/L$이었으나 33례에서 정상범위인 5mg/L 이상이었다. 총 5례에서 호흡기 치료를 시행하였으며 입원기간은 36례(75%)에서 7일 미만이었다. 결 론 : RSV 항원 검사는 10월과 11월에 양성율이 높았으며, RSV 항원이 양성인 다수의 어린이에 비해 입원기간이 다소 길었던 예와 호흡기치료가 필요했던 예가 적지 않아서 상당한 비율의 어린이가 심한 경과를 취하는 것을 알 수 있었다.