• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권3호
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• pp.209-212
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• 1986

YEp 13 plasmid에 B. amyloliquefaciens의 $\alpha$-amylase gene을 cloning시켜서 얻은 hybrid plasmid를 E. coli C 600으로 형질전환시켜서 amylase 활성을 나타내는 균주를 선별하였다. 선별된 E. coli C 600균주를 plasmid추출하여 전기영동해 본 결과 plasmid가 매우 불안정하였으며, 그중 가장 단순한 plasmid band를 지니고 있으며 amylase활성이 강한 E. coli균주를 선별하였다. 선별된 균주의 균체내에 있는 2개의 plasmid DNA를 분리하여 각각의 plasmid를 pTG 17-1, pTG 17-2로 명명하였으며 S. cerevisiae MC 16에서 형질전환이 가능한 pTG 17-2 DNA를 제한효소 EcoRI과 Pst I으로 restriction한 결과 EcoRI으로 처리한 경우는 7.3, 4.8, 2.4 kb인 3개의 분획으로 나타났으며 Pst I으로 처리한 경우는 linear로 14.5kb임을 알았으며 이로써 pTG 17-2 plasmid의 size가 약 14kb임을 알았다. 또한 E.coli균체내에서의 ampicillin sensitive로써 이 plasmid의 ampicillin resistance site가 결실되었음을 알았고 효모의 형진전환체로 부터의 $\alpha$-amylase는 균체외로 분비되지 않았고 효모균체내의 $\alpha$-amylase는 Somogyi-Nelson방법과 Agar diffusion 방법으로 확인하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권2호
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• pp.155-160
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• 1986

E. coli-Yeast shuttle vector YEp 13에 B. amyloliquefaciens의 $\alpha$-amylase gene을 cloning하여 얻은 hybrid plasnidlasmid를 E. coli를 숙주세포로 하여 형질을 발현시켰다. 형질전환주의 $\alpha$-amylase 활성 측정 결과, B. amyloliquefaciens에 대해 20-30%의 상대 활성도를 나타내었다. 형질전환주의 경우 생성된 $\alpha$-amylase의 60-65%가 periplasm에 축적되었으며 세포 외부로의 분비는 없었다. Hybrid DNA를 agarose-gel 전기영동으로 조사한 결과 그 크기가 다른 다수의 hybrid DNA가 확인되었으며 pHA28의 plasmid (a)(Fig.3)에서만 $\alpha$-amylase 활성을 나타내는 것으로 밝혀졌다 pHA28의 plasmid(a)의 크기가 YEp 13 plasmid DNA보다 작은 것은 YEp13 plasmid에서 yeast gene부분이 deletion된 결과로 추측되었다.

• Journal of Microbiology
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• 제38권2호
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• pp.113-116
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• 2000

Escherichia coli F plasmid partition apparatus is composed of two trans-acting proteins (SopA and SopB) and one cis-acting DNA sequence (sopC). The SopB-sopC complex has been suggested to serve a centromere-like function through its interaction with chromosomally encoded proteins which remain to be identified. In this paper, we are introducing a new yeast 1.5-hybrid system which assembles the two-hybrid and one-hybrid system as a mean to find and additional component of the F plasmid partition system, interacting with DNA (sopC)-bound SopB protein. The results indicates that this system is a promising one, capable of selecting an interacting component.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제13권5호
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• pp.819-822
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• 2003

Polyketides are an extensive class of secondary metabolites with diverse molecular structures and biological activities. A plasmid-based minimal polyketide synthase (PKS) expression cassette was constructed using a subset of actinorhodin (act) biosynthetic genes (actI-orfl, actI-orf2, actI-orf3, actIII, actⅦ, and actIV) from Streptomyces coelicolor, which specify the construction of an orange-fluorescent anthraquinone product aloesaponarin II, a type II polyketide compound derived from one acetyl coenzyme A and 7 malonyl coenzyme A extender units. This system was designed as an indicator pathway in S. parvulus to generate a hybrid type II polyketide compound via gene-specific replacement. The act ${\beta}-ketoacyl$ synthase unit (actI-orfl and actI-orf2) in the expression cassette was specifically replaced with oxytetracycline ${\beta}-ketoacyl$ synthase otcY-orfl and otcY-orf2). This plasmid-based hybrid PKS cassette generated a novel orange-fluorescent compound structurally different from aloesaponarin II in both S. lividans and S. parvulus. In addition, several additional distinctive blue-fluorescent compounds were detected, when this hybrid PKS cassette was expressed in S. coelicolor B78 (actI-orf2 mutant), implying that the expression of plasmid-based hybrid PKS cassette in Streptomyces species should be an efficient way of generating hybrid type II polyketide compounds.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제19권1호
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• pp.31-36
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• 1991

Tn5의 kanamycin 저항성 유전자를 가진 pBEL1 plasmid와 C.glutamicum cryptic plasmid인 pSR1으로 7.5kb의 새로운 plasmid를 만든 후, 이를 pCE1301이라 명명하였다. 이 pCE1301은 PEG1301은 PEG-protoplast법으로 C.glutamicum을 형질전환하였을 때 효율이 약 $3.0\times 10^3$형질전환제/$\mu g$이었으며 SalI과 EcoRI 제한효소 절단부위가 1개씩이었다. 또 Km이 없는 배지에서 25세대까지 안정하게 유지되었으며 B.flavum, E.coli에서 복제되었다. 이 pCE1301을 이용하여 C.glutamicum 의 homoserine dehydrogenase 유전자를 cloning하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제27권5호
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• pp.364-369
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• 1999

In order to obtain the suitable plasmids for constructing plasmid vectors of Bacillus species, endogeneous plasmid DNAs were screended from thermo-tolerant soil bacteria. Based on agarose gel electrophoresis patterns of the isolated plasmid DNAs, two strains harboring small-size plasmids were selected. The isolated were identified to belong to the genus Bacillus on the basis of their morphological and biochemical properties, and named Bacillus sp. 3-3 and 77-8, respectively. The restriction endonuclease maps were determined for four plasmids including two plasmids from each Bacillus isolates. It is interesting that Bacillus sp. 3-3 and 77-8 have an identical plasmid according to the restriction maps. The three kinds of hybrid plasmids constructed by introducing each plasmid of two isolates into a Escherichia coli plasmid vector. pUCCm18 containing chloramplenicol resistance gene active in Bacillus strains, could be replicated in B. subtilis and B. licheniformis. These plasmids are very stable in B. subtilis, suggesting that the Bacillus plasmids identified in this work would be useful for development of new cloning vectors for Bacillus strains.

• 미생물학회지
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• 제29권4호
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• pp.226-229
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• 1991

In our laboratory a R plasmid pKU10 was isolated from Pseudomonas and its characteristics were investigated. In this study, as a basic work to improve its utility as a cloning vehicle, restriction patterns of pKU10 were analyzed for other various restriction enzymes in addition to restriction evdonucleases previously examined. As a result, pKU10 DNA has two cleavage sites for ClaI and HpaI, and three sites for AvaI. The restriction map of pKU10 was supplemented with AvaI, ClaI, and HpaI. From the result of this experiment, the usefulness of PKU10 as a cloning vector in Pseudomonas will be enhanced by constructions of mini-plasmid or hybrid plasmids.

• 미생물학회지
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• 제28권3호
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• pp.236-242
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• 1990

여러가지 난분해성 방향족 화합물을 분해하는 균주들을 개발하기 위해 2,4-D 분해 유전자를 갖는 재조합 플라스미드 pKG2. 나프탈렌 분해 유전자를 갖는 재조합 플라스미드 pKG3 그리고 TOL 플라스미드를 합성세제 분해능을 갖는 P p pulida KUD12와 프탈산에스테르를 분해하는 P.pUlida KUPlO에 각각 형질전환 또는 접합시켰다. P.pulida KUD12로부터 KUDIOl(pKG2), KUDI02(pKG3). KUDI03(TOL), KUD202(pKG3, TOL) 균주판, 또 P.pulida KUPlO으로부터 KUD 106(pKG2). KUD107(pKG3), KUD108(TOL) 균주을 각각 개발하였다. 개발균주의 분해능은 KUD101과 KUD102 그리고 KUD107이 원분해 균주와 비솟하였고, KUDI03과 KUD106 그리고 K KUD202는 원분해 균주보다 분해능이 떨어졌고 KUD108의 분해능은 원균주보다 우수하였다. 개발균주들의 혼합배양 에서는 KUD 107과 KUD108의 혼합배양이 다른 혼합배양틀보다 분해능이 우수한 것으로 나타났다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제15권5호
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• pp.319-327
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• 1987

알코올 생산성이 높은 Zymomonas 균주의 기질 이용성을 넓히기 위한 목적으로 natural replicon을 포함하며 적당한 항생제 저항표지를 갖는 plasmid vector의 제조를 시도하였다. Z. mobilis ATCC10988에서 분리된 몇 개의 plasmid중 3.9kb의 적당한 크기를 갖는 pZM3를 선정하여 수종의 제한효소로 처리하여 절편의 크기에 따라 유전자 지도를 작성하였다. pZM 3의 replicon과 pBR 325의 chloramphenicol 저항유전자를 포함한 재조합 plasmid인 pHZ22를 개발하고 이 plasmid vector가 숙주세포인 Z. mobilis ATCC31821에서 독립적으로 replication됨을 확인하였다. 또 하나의 항생제 저항표지로서 RP4의 tetracycline 저항유전자를 분리하여 pHZ22에 도입함으로써 pHZT224를 제조하였는데 이 plasmid vector도 Zymomonas로 conjugation에 의해 전이되어 안정하게 유지 되었다. 본 연구를 통하여 개발된 plasmid vector는 Z. mobilis와 E. coli에 공히 작용하는 shuttle vector 로서 외부 유전자를 Zymomonas에 도입시킬 수 있는 유용한 유전자 운반체임이 확인되었다.

• 한국미생물생명공학회:학술대회논문집
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• 한국미생물생명공학회 1986년도 추계학술대회
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• pp.519.2-519
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• 1986

고온 호알카리성 Bacillus K-17의 xylanase유전자의 구조해명과 대량 생산 균주를 개발하기 위채 Bacillus K-17의 염색체를 pER 322를 사용하여 E. coli에 형질전환시켜 xylanase 활성을 나타내는 형질전환체를 얻었다. 이 형질전환체에서 hybrid plasmid를 분리하여 제한효소로 mapping하였고 이 유전자가 Bacillus K-17유래인가를 hybridization에 의해 확인하였다. Recombinant plasmid pAX 1113은 5.1kb HindIII 절편을 가졌으며 BgIII site가 두곳, ECoRI과 pst site가 한곳이었으며 효소를 정제한 결과 Bacillus K-17이 생산하는 두 가지 xylanase중에서 xylanase I과 동일하였다.