• 한국어류학회지
• /
• 제12권3호
• /
• pp.180-185
• /
• 2000

플라스틱의 원재료로 이용되는 bisphenol-A (BPA)가 vitellogenin (VTG)의 합성에 미치는 영향을 넙치의 간세포를 초대 배양하여 조사하였다. 간세포는 2일간 사전 배양을 하였으며, estradiol-$17\beta(E_2)$ 및 BPA를 배양액에 동시 첨가하였다. 간세포는 6일간 배양한 후 배양액을 회수하여 SDS-PAGE로 분석하였다. BPA는 농도 의존적으로 총 단백질에 대한 VTG 비율은 증가하였으며, $10^{-6}M$과 $10^{-5}M$의 농도에서 유의한 차이를 나타내었다(P<0.05). 특히, BPA $10^{-5}M$의 농도에서의 총 단백질에 대한 VTG 비율은 26.36%로 $E_2$만을 첨가한 대조군과 유의한 차이를 나타내지 않았다. $E_2$와 BPA를 단독 또는 동시에 첨가하여 유도된 VTG합성은 배양액에 tamoxifen$(10^{-6}M)$을 첨가함으로서 $E_2$를 첨가한 대조군의 약 80%로 유의하게 억제되었다. 그리고, in vivo에서 $E_2$에 의해 유도된 VTG합성은 in vitro에서 간세포를 6일간 배양함에 따라 $E_2$를 첨가한 대조군의 약 22%까지 억제되었다. 이러한 감소효과는 BPA의 농도 의존적으로 지연되는 결과를 나타내었다. 따라서 넙치에서의 BPA는 $E_2$ receptor와의 반응을 통한 에스트로겐 작용에 의해 VTG합성을 유도하고, 난황형성기에서의 VTG 합성을 장시간 지속시킬 가능성이 있는 것으로 추측된다.

• Preventive Nutrition and Food Science
• /
• 제8권1호
• /
• pp.61-65
• /
• 2003

This study was investigated to identify the regulatory mechanism of ACC gene expression by hormones and nutrition. The fragment of ACC promoter I (PI) -220 bp region was recombined to pGL3-Basic vector with luciferase as a reporter gene. The primary hepatocyte from the rat was used to investigate the regulation of ACC PI activity. ACC PI (-220 bp)/luciferase chimeric plasmid was transfected into primary rat hepatocyte by using lipofectin. ACC PI activity was shown by measuring luciferase activity. The addition of insulin, dexamethasone, and triiodothyronine to the culture medium increased the activity of ACC PI by 2.5-, 2.3- and 1.8-fold, respectively. In the presence of 1 $\mu$M dexamethasone, the effects of insulin was amplified about 1.2-fold showing the additional effects of dexamethasone. Moreover the activity of luciferase was increased by insulin, dexamethasone, and triiodothyronine treatment approximately 4-fold. These results indicated that insulin, dexamethasone and thyroid hormone coordinately regulate ACC gene expression via regulation of promoter I activity. On the -220 to ＋21 region of ACC PI, the addition of the glucose to the culture medium increased the activity of ACC PI. With 25 mM glucose, luciferase activity increased by 7-fold. On the other hand, on the -220 bp region, ACC PI activity was not changed by polyunsaturated fatty acids. Therefore, it can be postulated that there are response elements for insulin, triiodothyronine, dexamethasone, and glucose, but not PUFAs on the -220 bp region of ACC PI.

• 한국환경농학회지
• /
• 제22권2호
• /
• pp.94-99
• /
• 2003

본 연구의 목적은 랫드 간세포 일차배양에서 카드뮴에 의해 유발된 세포독성 및 지질과산화에 대한 셀레늄의 항산화 및 간보호 효과를 조사하기 위함이다. 이를 위해 2개의 실험을 수행하였다. 실험 1에서는, 1, 10, 50, 100 및 $50\;{\mu}M$의 다양한 농도의 카드뮴으로 6시간 동안 간세포를 일차 배양하였다. 간세포 생존율과 지질과산화는 각각 MTT 방법과 TBARS 방법으로 측정하였다. 항산화 효과와 간보호 효과는 각각 GOT와 GSH-Px 활성을 측정함으로써 결정하였다. 카드뮴은 농도 의존적으로 세포 생존율을 감소시켰으며 지질과산화는 증가시켰다. 세포 생존율과 지질과산화 간에 유의적인 음의 상관관계(r=-0.943, p<0.01)가 관찰되었다. 카드뮴은 $50\;{\mu}M$ 농도에서 GOT의 활성을 증가시켰으나 GSH-Px의 활성은 감소시켰다. 실험 2에서는 셀레늄이 카드뮴에 의해 유발된 독성 및 지질과산화에 대한 효과를 연구하기 위해 $100\;{\mu}M$의 카드뮴과 0.01, 0.1 및 1 ppm의 다양한 농도의 셀레늄으로 6시간 동안 간세포 일차 배양하였다. 세포 생존율과 GSH-Px의 활성은 1 ppm의 셀레늄에 의해 증가되었다. 반면에, 지질과산화와 GOT의 활성은 0.1 ppm의 셀레늄에 의해 감소되었다. 이러한 연구 결과는 셀레늄이 카드뮴에 대한 항산화 및 보호 효과를 나타내 보이고 있다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
• /
• 제1권1호
• /
• pp.19-23
• /
• 1998

Effects of pituitary and thyroid hormones on estradiol-induced vitellogenin (VTG) induction were electrophoretically examined in primary hepatocyte cultures of rainbow trout. Hepatocytes were precultured for 2 days and then estradiol-17 $\beta$ $(E_2,\;2 \times 10^{-6}M)$>, triiodothyronine $(T_3,\;10^{-8}-10^{-6}M)$, bovine growth hormone (bGH, 10-100 ng/ml), ovine prolactin (oPRL, 100-500 ng/ml), and pituitary extract (PE) of rainbow trout (0.75PE/dish) were added to the incubation medium. The hepatocytes were cultured for 7 more days. The addition of oPRL to the incubation medium was not effective in increasing VTG production at any concentrations. The addition of PE to the incubation medium with $E_2$ was not effective in increasing VTG production. The addition of bGH to the incubation medium with $E_2$ was not effective in increasing the rate of VTG production at concentrations of 10-50 ng/ml. However, a higher concentration of bGH, 100 ng/ml, increased VTG production. The various concentrations of $T_3$ were ineffective in stimulating VTG production. These results suggest that GH could be one of stimulus factors for VTG production in rainbow trout.

• Archives of Pharmacal Research
• /
• 제21권6호
• /
• pp.718-722
• /
• 1998

Scopoletin (7-hydroxy-6-methoxycoumarin), a coumarin, was isolated from the aerial part of Solanum lyratum Thunb. by the activity-guided fractionation employing carbon te trachloride-intoxicated primary cultured rat hepatocytes as a screening system. Its hepatoprotective activity was first evaluated by measuring the release of glutamic pyruvic transaminase and sorbitol dehydrogenase from carbon tetrachloride-intoxicated rat hepatocytes into the culture medium. Scopoletin significantly reduced the releases of glutamic pyruvic transaminase and sorbitol dehydrogenase from the carbon tetrachloride-intoxicated primary cultured rat hepatocytes by 53% and 58%, respectively, from the toxicity in a dose-dependent manner over concentration ranges of 1mcM to 50mcM. Further studies revealed that at the concentration of 10mcM, scopoletin significantly preserved glutathione content by 50% and the activity of superoxide dismutase by 36% and also inhibited the production of malondialdehyde to the degree as seen in the control.

• Toxicological Research
• /
• 제15권1호
• /
• pp.89-93
• /
• 1999

2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin(TCDD) is known to induce cytochrome p450 1A1 and to activate c-Src kinase and p21 Ras. This study examined the molecular interactions of adaptor proteins including Shc, Grb2, and Sos in rat primary hepatocytes and their relationship to the induction of CYP1A1 by TCDD. TCDD induced CYP1A1 level and EROD activity in a dose-dependent mode. Sos/Grb2 association isincreased by TCDDㅑㅜ a dose dependent mode. Tyrosine phosphorylated Shc, mainly p152, onloads to Grb2/Sos complex upon TCDD stimulation. The electrophoretic mobility shift of Sos is showed by TCDD. These results indicate that TCDD modulated the molecular interaction features of adaptor compoes proteins including Shc, Grb2, and Cnl in early signaling pathway of TCDD-mediated CYP 1A1 induction of rat primary hepatocyte.

• 한국환경과학회:학술대회논문집
• /
• 한국환경과학회 2003년도 International Symposium on Clean Environment
• /
• pp.159-164
• /
• 2003

Effects of Al on vitellogenin (VTG) and VTG mRNA induction by estradiol-17 $\beta$($E_2$) were examined in primary hepatocyte culture of rainbow trout. Hepatocytes were precultured for 2 days and then E2 ($2{\times}10^{-6}$M) and Al ($10^{-6}-10^{-4}$M) were simultaneously added to the incubation medium. Hepatocytes were cultured for 5 more days. Media and hepatocytes were then analyzed by SDS-PAGE and Northern blotting for VTG and VTG mRNA, respectively. These metal had no appreciable effect on the viability of hepatocytes in culture. However, Al interfered with VTG production and VTG mRNA expression. Al reduced VTG production in a concentration-dependent way and a significant reduction accurred at Al concentrations greater than $5{\times}10^{-5}$M. VTG mRNA expression also decreased with a negative correlation with Al concentration (r＝-0.98). These results suggest that Al inhibit VTG production at the transcriptional level to reduce VTG mRNA expression.

• Journal of Yeungnam Medical Science
• /
• 제6권2호
• /
• pp.133-140
• /
• 1989

초기배양과정에서 일어나는 간세포의 회복, 성장, 활동상황등을 추적하기 위하여 세포의 생존과 기능에 꼭 필요하고 서로 깊은 연관관계를 가진 골지체, 사립체, 생체막의 표지효소를 일령별로 추적 하였다. 골지체의 표지효소인 thiamine pyrophosphatase는 배양 4일경부터 장기 배양시의 강도에 접근하였으며 사립체의 표지효소인 succinate dehydrogenase는 시일이 지나며 강도가 감소하여 4일부터는 일정한 강도를 유지하였다. 형질막의 표지효소인 alkaline phosphatase은 2일째부터 반응강도가 강해져 5일째 이후로는 아주 강한반응을 보였다. 이같은 결과를 종합해볼때 1차 배양에 있어 간세포는 세포 분리후 4일경이 지나면서 안정상태에 접어들고 제 기능을 수행하나 배양 상태에서는 분비세포로서의 고유기능은 감소되는 것으로 사료된다.

• 한국잠사곤충학회지
• /
• 제50권2호
• /
• pp.93-100
• /
• 2012

본 연구는 사염화탄소에 의하여 유발되는 지질과산화에 의한 간독성에 대한 흰점박이꽃무지 추출물의 보호효과를 일차배양한 간세포와 간독성 흰쥐에서 GPT, bile acid, bilirubin 등의 활성 지표를 통해 간독성 회복효과를 알아보고자 하였다. 사염화탄소로 유발시킨 일차배양 간세포에 대한 흰점박이꽃무지와 장수하늘소 추출물의 간독성 회복효과는 각각 41.2%와 8.4%로 흰점박이꽃무지 유충 추출물이 간독성 회복 효과가 높게 나타났으며, 용매 추출별로는 흰점박이꽃무지 메탄올 추출물보다는 물 추출물이 농도의존적으로 간독성 회복효과가 있음을 확인하였다. 사염화탄소에 의해 간독성이 유도된 흰쥐에 흰점박이꽃무지 물추출물 분획별로 처리하였을 때, 분자량 낮을수록 효과적이었으며, 분자량이 1,000이하의 분획물에서 32.1%로 간독성 회복 효과가 우수하였다. 또한 흰쥐에 사염화탄소를 복강투여로 간독성을 유발한 후 흰점박이꽃무지 물분획물을 경구투여할 경우에 혈청 GPT, bile acid와 bilirubin의 활성이 정상군보다는 높았지만 사염화탄소군보다 유의적으로 감소하였고, 간섬유화와 관련된 hydroxyproline의 생성 억제에서는 분자량이 1000이하의 분획물에서 사염화탄소군보다 유의성 있게 생성을 억제하여 간섬유화를 예방하는 것으로 확인하였다. 중심정맥 쪽에 아주 경미한 허혈성 변성 이외에는 다른 병변을 찾을 수 없었고 세포내에 organelle이 유지된 편이고 콜라겐 형성이 매우 많이 줄어들어 병리조직학적으로도 간보호 효과가 있었음을 확인하였다. 이에 간독성 지표 활성을 긍정적으로 결과를 확인한 흰점박이꽃무지 추출물의 간질환 치료보조제나 건강기능성식품 소재 개발 가능성을 확인하였다.

• 한국환경성돌연변이발암원학회지
• /
• 제7권2호
• /
• pp.59-64
• /
• 1987

조미료로 널리 사용되고 있는 monosodium glutamate(MSG)의 세포독성 및 돌연변이 유발성을 일차 배양 간세포에서 조사하였다. MSG를 세포 배양액에 첨가하여 24시간 동안 간세포에 처리한 결과 0.5% 농도까지는 간세포에 아무런 독성을 나타내지 않았으며 비주기성 DNA합성이나 DNA 단사 절단도 유발시키지 않았다. 1% MSG에서는 간세포의 생존율이 약간 저하되었으나 이 농도에서도 돌연변이 유발성이 전혀 없는 것으로 판명되었으며, aflatoxin B$_1$과 동시 처리시에도 aflatoxin B$_1$에 의한 DNA 손상을 증가 또는 감소시키지 않았다.