We investigated factors affecting primary cultures of Pacific abalone Haliotis discus hannai ovary-dissociated cells to identify general aspects of their early-phase culture. Ninety-seven cell populations derived from 30 individuals were cultured in different media with varying compositions of medium supplements, and initial attachment, subculture, and survival for ${\geq}10$ weeks were assessed according to medium composition and individual. We also examined the time required for subculture and the rate of cell death according to both culturing period and passage number within 10 weeks. A lack of fetal bovine serum (FBS) and hemolymph significantly inhibited the growth of cultured cells, while we detected no significant effect of medium composition on initial cell attachment. Through data reallocation, with the omission of data from cell populations cultured in FBS-free and hemolymph-free media, we showed that growth inhibition was also affected by individual differences among the abalones used. During the culture, we observed four different types of cell morphology. Moreover, considerable time was required for subculture-18.4 and 19.5 days for first and second subcultures, respectively-and cell death did not occur within 30 days or for passage 0. Our results will provide valuable information for developing universal cell culturing guidelines in abalone species and suggest the feasibility of culturing abalone ovary-dissociated cells.
Krishnan, N.;Chaudhuri, A.;Sengupta, A.K.;Chandra, A.K.;Sen, S.K.;Saratchandra, B.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제2권2호
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pp.149-153
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2001
The influence of baculovirus Bombyx mori Nuclear Polyhedrosis virus (BmNPV) infection on intermediary metabolic pathways in silkworm Bombyx mori L. was investigated. Studies revealed that NADP-linked malate dehydrogenase activity in hemolymph of infected silkworms at 96 hrs post infection (p.i.) with visible symptoms of infection was enhanced in comparison to healthy larvae of the same age. Also, NADP-dependent MDH activity was significantly lower in fat body cytosol of infected larvae at 96 hrs p.i. when compared to healthy larvae. Similarly, some biometabolic parameters like growth, protein content and cholesterol titer were observed to be influenced by baculovirus infection. While the growth of infected larvae was significantly retardedi protein content was also drastically reduced in both hemolymph and fat body tissues. Cholesterol titers however, was enhanced in infected larvae. The results observed herein point to a significant change in the normal biochemical and biometabolic pathways required for growth and development following BmNPV infection.
Ovarian development and yolk protein (YP) of mushroom fly, Coboldia fuscipes, were characterized. C. fuscipes has a pair of ovaries, composed of 130∼140 ovarioles, respectively. Ovarian development begins at 1 day of pupa, and growth of the ovaries continued to become a matured shape at 1 day after emergence. The YP of C. fuscipes identified by SDS-PAGE analysis revealed that the protein is composed of three subunits, designated YP1 (61 kDa), YPS(50 kDa), and YP3 (47 kDa). These three subunits of YP gradually decreased during embryogenesis. The YP was first detected in the 3 day-old pupal ovary and was continually detected up to 2 day-old adult, but not in the hemolymph. Furthermore, Western blot analysis of male and female adult hemolymph and ovary revealed that the antibodies against YP1, YP2, and YP3 reacted with three YP bands in ovary and egg extract, respectively. However, this reactivity was not observed in the male and female hemolymps. Therefore, it is assumed that the UP of C. fuscipes is synthesized in the ovary at 3 days after pupation.
이산화탄소($CO_2$) 해양격리처리 방안의 실효성을 검토하기 위해서는 해양에 처리된 $CO_2$가 해양생태계 및 해양생물에 미칠 수 있는 영향에 대해서 광범위하게 정보를 축적할 필요가 있다. 본 연구에서는 두족류인 참문어 Octopus vulgaris를 대상으로 고농도 $CO_2$ 환경(1, 2, 3%-$CO_2$)에서의 폐사율 및 1%-$CO_2$ 환경에서의 생리학적 반응에 대해서 조사하였다. 참문어는 혈액채취를 위하여 복부대동맥에 케뉴레이션을 행한 후 호흡실에서 회복시켰다. 회복된 개체에 대하여 헤모림프의 산염기 조절인자에 대한 측정을 행하였다. 참문어는 3%-$CO_2$ 환경에서 72시간 안에 100% 폐사하였다. 헤모림프의 pH는 1%-$CO_2$ 노출 30분 후 유의하게 감소하였으나 실험종료 때까지 회복되지 않았으며, $[HCO_3^-]$는 $CO_2$ 노출 후 유의하게 증가하여 8시간에 7.8 mM를 나타내었으나 그 후 점차 감소하는 경향이었다. 헤모림프 이온$([Cl^-],\;[Na^+],\;[K^+])$들은 유의한 변화를 보이지 않았다. 본 연구 결과 참문어는 방어, 넙치와 같은 경골어류 및 별상어와 같은 판새류보다 $CO_2$에 민감한 것으로 사료된다.
누에체액 성분 중의 30K 단백질은 Q-Sepharose FF를 이용한 단계별 농도구배 이온교환 크로마토그래피로 0.16 M NaCl 용출 조건에서 쉽게 얻을 수 있었다. 얻어진 단백질을 인간유래 정상세포에 처리하여 세포 증식 향상이 확인되었고, 이는 30K 단백질이 인간을 위한 세포치료제에 이용되는 세포의 증식을 위한 첨가물로 사용될 수 있음으로써 의료 분야에의 적용 가능성을 확인하였다. 또한 본 연구를 통해 확립된 30K 단백질의 간단한 정제 공정은 향후 대량 생산 공정으로 scale-up이 용이하게 이루어질 것으로 기대된다. 이 결과들은 동물세포를 생산 숙주로 사용할 때 생산 물질 자체의 생산량 증대에도 효과적으로 이용될 수 있으며 세포치료제를 위한 세포의 증식에도 효과를 보일 수 있으므로 세포배양을 이용한 생산 공정 전반에 큰 영향을 미칠 수 있을 것이다.
세리신 잠의 발육, 실샘 성장, 세리신 량, 혈액 아미노산 조성 등 세리신 잠의 특성을 알아보기 위하여 잠 120 과 같은 조건으로 사육하여 얻은 결과는 다음과 같다. 1. 부화율에 있어서 세리신 잠은 85%이며 잠 120 은 95%이었다. 특히 세리신 잠은 부화가 고르지 않았다. 2. 유충 기간에 있어서 세리신은 20 일 23 시간이었고, 잠 120 은 21 일 22시간이었다. 3. 실샘에 있어서 세리신 잠은 중부실샘이 대부분이며 후부 실샘의 길이는 약 2~3cm 이었고 굴곡은 없었다. 4. 세리신 잠에 있어서 상족후 나방까지의 기간은 약 12 일이었으며, 화용후 화아까지는 7 일로 대단히 짧은 특성을 보였다. 5. 고치에 있어서 세리신 잠은 이주 얇고 가벼웠으며 견충중은 2.7cg 이며 견충 비율은 3.65%이였다. 6. 세리신 (sericin protein)양에 있어서, 세리신 잠의 견충이 sericin 만 으로 구성되어 있고 잠 120 은 28%가 sericin 이었다. 세리신 잠의 견충 당 sericin 율은 잠 120 의 34.6%정도였다. 7. 혈액 아미노산의 양에 있어서 세리신 잠은 histidine, lysine, glutamic acid 가 많았으며 5 령 발육에 따른 조성의 변화에 있어서 대부분의 혈액 아미노산들은 증가하였다.
세크로핀(cecropin)은 곤충의 체액성 면역에 있어서 효과적인 방어인자로 작용하는 항균 펩타이드로 잘 알려져 있다. 본 연구에서는 면역 유도된 천잠, Antheraea yamamai 유충 혈림프로부터 세크로핀 항균 펩타이드 분리 및 정제를 실시하였다. 먼저 항균 펩타이드를 분리하기 위해서, 면역 유도된 유충 및 정상 유충으로부터 추출된 혈림프 단백질 시료에 대한 단백질 전기영동(SDS-PAGE)를 통하여 비교분석하였다. 정상누에 혈림프 시료에 비해 면역 유도된 혈림프 추출물에서만 특이적으로 발현되는 분자량 4,223.01 Da의 펩타이드 밴드를 검출하였다. 선발된 면역유도 특이적 발현 펩타이드의 특성 분석을 위해서 이온교환 크로마토그래피 및 gel permeation 크래마토그래피을 수행하여 특이적으로 발현되는 펩타이드를 성공적으로 순수 정제하였다. 정제된 펩타이드는 Edman degradation법으로 N말단 아미노산 서열을 결정하였고 다른 나비목곤충의 세크로핀과 매우 높은 상동성을 나타내어 세크로핀으로 동정하였다. 또한 정제된 천잠 세크로핀 항균 펩타이드는 그람음성세균, 그람양성세균 및 곰팡이에 대해 폭 넓은 항균 스펙트럼을 나타냈었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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