Quantitative trait loci (QTLs), which were related to the ability of callus induction and plant regeneration in seed culture of rice, were analyzed using a mapping population from a cross between the rice cultivars 'Samgang' (tongil type) and 'Nagdong' (japonica). A tongil type rice cultivar, 'Samgang' showed lower frequency (20%) of plant regeneration than that (35%) of japonica rice, 'Nagdong'. Transgressive segregations were observed for the ability of callus induction and plant regeneration from the seed-derived calli of 58 doubled haploid (DH) lines. The ability of plant regeneration of 58 doubled haploid lines showed a continuous distribution with comparatively wide range (10.0 to 66.7%) of variation. Composite interval mapping analysis was used to identify the QTLs controlling callus induction and plant regeneration ability. Four significant QTLs, qCWS6, qCWS8, qCWS9 and qCWS11, associated with callus weight per seed were detected on chromosomes 6, 8, 9, and 11 with LOD values of 3.30, 2.60, 2.70 and 2.43, explaining 36% of the total phenotypic variation. Three significant QTLs, qPR1, qPR6, and qPR11, for the ability of plant regeneration were located on chromosome 1, 6, and 11 at LOD score of 2.25, 2.15 and 2.55, accounting for 24 % of the total phenotypic variation. The present study should be useful for improving the efficiency of plant regeneration in tissue culture of indica rice by means of marker-assisted selection.
The identification of genes involved in true hypha formation is important in the study of mechanisms underlying the morphogenetic switch in yeast. We isolated a gene responsible for the morphogenetic switch in Yarrowia lipolytica, which forms true hyphae in response to serum or N-acetylglucosamine. The isolated gene, encoding 847 amino acids, had sequence identities of 27% and 25% with the Bud6 (Aip3) proteins of Saccharomyces cerevisiae and Schizosaccharomyces pombe, respectively. Disruption of this gene, designated YIBUD6, in haploid and diploid strains significantly reduced the ability of Y. lipolytica to switch from the yeast form to the hyphal form in hypha-inducing media. It was also found that YIBud6$\Delta$ mutants were rounder than the wild type when grown in the yeast form. These results indicate that the YIBud6 protein is necessary for hyphal growth and cell polarity in both haploid and diploid Y. lipolytica cells.
To investigate the effect of EDTA on the in vitro development of parthenogenetic eggs of ICR strain mice, those were cultured in 35mm culture dishes containing NaHCO3-BMOC-3 medium supplemented with 10, 50, 100, or 500$\mu$M of EDTA at 37$^{\circ}C$ for 96hrs. under the atmosphere of 5% CO2 and 95% air. EDTA supplementation of 10, 50, or 100$\mu$M to medium significantly(P<0.01) increase morula and blastocyst formation rate compared with controls in haploid(19.8, 25.9, 39.0% vs. 0.0%). And compared with 10, or 50$\mu$M of EDTA supplementation, significantly(P<0.01) higher morula and blastocyst formation rate resulted from EDTA supplementatin of 100$\mu$M. Both the nuclear number and diameter of blastocysts developed from parthenogenetic eggs were not affected by the morphological types when they were cultured, or the supplementary concentrations of EDTA. The nuclear number of blastocysts developed from haploid, diploid, and immediately cleavaged eggs was 44.8$\pm$1.2, 45.2$\pm$1.5, and 45.4$\pm$1.8, respectively. And the diameter of those eggs ranged 104.4$\pm$1.8, 104.3$\pm$1.2, and 103.8 1.3$\mu$m, respectively.
The significance of cell ploidy and repair ability for the radioprotective efficiency of cysteamine was studied in DNA repair - proficient and repair - deficient yeast cells irradiated $^{60}C0\;\gamma-rays.$ Results have been obtained for the cell survival of two groups of yeasts-diplont and haplont cells, both in haploid and diploid states. For diploid Saccharomyces cerevisiae yeast cells, the correlation between the radio-protective action of cysteamine and the cell repair capacity was demonstrated. Such a correlation was not clearly expressed for haploid yeast cells. In addition, evidence was obtained indicating that the degree of the radioprotective action was independent of the number of chromosome sets in haplont yeast Pichia guilliermondii cells and in some radiosensitive mutants defective in the diploid-specific recovery. It is concluded on this basis that the radioprotective action may involve the cellular recovery process, which may be mediated by a recombination-like mechanism, for which the diploid state is required. The results obtained clearly show that the radioprotective effect was dependent on DNA repair status and indicate that the mechanism of the radioprotective action may be realized on the level of primary radiation damage production as well as on the level of postradiation recovery from potentially lethal radiation damage.
We have constructed an AFLP-based linkage map of Japanese red pine (Pinus densiflora Siebold et Zucc.) using haploid DNA samples of 96 megagametophytes from a single maternal tree, selection clone Kyungbuk 4. Twenty-eight primer pairs generated a total of 5,780 AFLP fragments. Five hundreds and thirteen fragments were verified as genetic markers with two alleles by their Mendelian segregation. At the linkage criteria LOD 4.0 and maximum recombination fraction 0.25(${\theta}$), a total of 152 markers constituted 25 framework maps for 19 major linkage groups. The maps spanned a total length of 2,341 cM with an average framework marker spacing of 18.4 cM. The estimated genome size was 2,662 cM. With an assumption of equal marker density, 82.2% of the estimated genome would be within 10 cM of one of the 230 linked markers, and 68.1% would be within 10 cM of one of the 152 framework markers. We evaluated map completeness in terms of LOD value, marker density, genome length, and map coverage. The resulting map will provide crucial information for future genomic studies of the Japanese red pine, in particular for QTL mapping of economically important breeding target traits.
A novel strategy was developed for isolating suppressors from sporulation-deficient mutants. The mutation in the BCY1 gene, which codes for the regulatory subunit of cAMP-dependent protein kinase, when homozygous, results in diploids being meiosis and sporulation deficient. Two plasmids, YCp-MAT.alpha. and YEp-SPOT7-lacZ, were introduced into MAT.alpha. BCY1$\^$+/ or MAT.alpha. bcy1 haploid cells. The transformant of the BCY1$\^$+/ haploid cell produced .betha.-galactosidase under nutrient starvation, but the bcy1 transformant did not. Using this system, the mutagenesis experiment performed on the bcy1 transformant strain resulted in a number of sporulation mutants that produced .betha.-galactosidase under nutrient starvation. One complementation group, sob1, was identified from the isoalted suppressor mutants and characterized as a single recessive mutation by tetrad analysis. Genetic analysis revealed that the sob1 mutation suppressed the sporulation deficiency, the failure to arrest at the G1 phase of the cell cecle, and the sensitivity to heat or nitrogen starvation caused by the bcy1 mutation. However, the sob1 mutation did not suppress the sporulation deficiency of ime1 and of ime2 diploids. These results suggest that the sob1 mutation affects a gene which functions as a downstream regulator in both meiosis and cell cycle regulation.
Haploid system by anther culture allows the development of homozygous lines when doubled. The response of anther culture to Basta (glufosinate) resistance was investigated on transgenic plants (cv. Anjungbyeo) in order to identify inheritance of bar gene associated with Basta. Most of the regenerated transgenic plants were sterile, and only a few plants produced viable seeds ($A_1$) in the greenhouse. The bar gene was analysis by PCR in basta resistant transgenic plant ($TA_0$). The transgenic seeds ($A_1$) were significantly germinated in Basta solution compared with non-transformed seeds. As a result of anther culture, in regenerated haploid plants, segregation ratio was 1:1 in five of eight cross combinations. In diploid plants, segregation ratio was 1:1 in seven of eight cross combinations. Although there was some differences in the cross combinations, most of the combinations had 1:1 segregation ratio which supports the theory. The difference may be a result of the small sample size or the difference of anther culture response caused by genotypic difference. Hence, when many cross combinations were anther-cultured the results would support the theory.
The experiments were conducted to establish the effective barley haploid production system using interspecific crosses. Three spring barley cultivars. Bruce. Klages and Rodeo were used for this experiment. 1, 687 florets of three barley cultivars were crossed with bulbosum pollens. 1, 079 seeds were harvested and obtained 834 embryos so that seed set rate and embryo production rate were 64% and 77%, respectively. IAA effect was superior to NAA for root development and 1 ppm concentration of IAA gave the best result among five concentrations; 0ppm, 1ppm., 5ppm, 10ppm and 30ppm.
A linkage map for Japanese red pine (Pinus densiflora) was constructed on the basis of two DNA marker systems of random amplified polymorphic DNAs (RAPDs) and inter-simple sequence repeats (I-SSR). Haploid genomic DNAs were extracted from megagametophyte tissues of 96 individual seeds in a single tree. A total of 98 DNA markers including 52 RAPD markers amplified by 25 primers and 46 I-SSR markers amplified by 18 primers were verified as Mendelian loci showing 1 : 1 segregation in 96 megagametophytes which were ${\chi}^2$-tested at 5% significance level. Of them, 63 segregating loci turned out to be linked into 20 linkage groups by the two-point analysis. However, 35 loci (17 RAPD and 18 I-SSR) of the 98 segregating loci did not coalesced into any linkage groups at a LOD of 3.0. The linked 63 loci were separated by an average distance of about 25.5 cM, which were spanned 1097.8 cM as a whole. The minimum and maximum map distances of the linkage groups were 4.3 cM and 54.9 cM, respectively. Incorporation of I-SSR loi into linkage map of RAPD loci resulted in extended and partially more saturated linkage blocks.
As a series of systematic classification of paramphistomes, the worms in the rumen and reticulum of 310 Korean cattle slaughtered at Chonju abattoir were collected from February 1986 to June 1987 and were classified by morphology of the worms. Afterwards, the karyotype of Fischoederius cobboldi (Poirier, 1883), which is a very rare species in Korean cattle, was studied with germ cells of the worm by means of modified air-drying method. The chromosome numbers in the haploid and diploid cells of 315 F. cobboldi were n=9 and 2n=18, respectively. The meiotic divisions were observed frequently; 1,904 haploid and 49 diploid cells were recognized. Nine pairs of mitotic chromosomes were homologous in the metaphase stage and the chromosomes were composed of seven medium-sized metacentrics (m) or submetacentrics (sm) and two small-sized submetacentrics (sm). While, meiotic metaphases were composed of seven medium and two small·sized chromosomes. The 3rd, 4th, 2nd and 5th pairs of chromosomes was metacentric having centromere indices of 40.4%, 40.0%, 39.7% and 38.9%, respectively, and the remaining ones were submetacentric with centromere indices from 32,4% to 36.2%. As a series of C-banding method, C-band was shown in centromeric region from all of the haploid germ cells, except chromosome No. 1 which included heterochromatin at the tip region. Chromosomes No, 4, 6 and 9 showed remarkable C-band distinguished from others.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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