This study was conducted to enhance the storage stability of fermented shrimp with different salt contents using a high hydrostatic pressure. The effects of the magnitude of pressure and treatment time on the microorganisms of the fermented shrimp were investigated. The highest microbial counts with respect to the salt levels were observed at 18% salt, showing $3.4{\times}10^5\;CFU/g$ for general bacteria, $6.4{\times}10^4\;CFU/g$ for halophilic bacteria, $4.2{\times}10^5\;CFU/g$ for yeast and $3.0{\times}10^4\;CFU/g$ for halophilic yeast. The degree of sterilization increased with the magnitude of pressure and treatment time, and the sterilization could be analyzed by the first order reaction kinetics. The sterilization rate constants $(k_p)$ of the halophilic bacteria was lower than that of general bacteria. The $log(k_p)$ increased linearly with pressure and the slope of the regression line of the halophilic bacteria was greater than that of general bacteria, indicating that the sterilization of the halophilic bacteria was more dependent on the pressure. High hydrostatic pressure treatment was an effective non-thermal sterilization method for the salted and fermented shrimp, and the optimum treatment condition was for 10 min at 6,500 atm.
In this study, we determined the changes in microbial numbers in solar salts according to the manufacturing process and storage duration. The salt samples were harvested from salt farms in Shinan (area 2) and Yeonggwang (area 1). They were serially diluted ten-fold and then placed on 4 kinds of cultivable media (mannitol salt agar, eosin methylene blue, plate count agar, and trypticase soy agar). After incubation, we obtained 62 halophilic isolates from the salt samples. Coliform and general bacteria were not detected in all salt samples. By 16S rRNA sequencing analysis, we found 12 kinds of halophilic bacteria belonging to the genera Halobacillus, Halomonas, Bacillus, Idiomarina, Marinobacter, Pseudoalteromonas, Vibrio, Salinivibrio, Virgibacillus, Alteromonas, Staphylococcus and some un-known stains. In our study, we discovered two novel species that have a 16S rDNA sequence similarity below 97%.
Extremely halophilic bacteria isolated from salterns at Mado, Kyunggido, Korea, were identified and investigated on their salt requirements. The results have shown that six strains were identified to be belonged to the genus Halobacterium and three strains identified as the fenus Halococcus. Among them, the optimal NaCl concentration for growth of Halobacterium sp. EH10 was at 4.2M and no growth occurs below 2.0M NaCl. The strain, EH10, is nonmotile and showed acid production from glucose, fructose and maltose while H. salinarum is motile and does not produce acid from any carbohydrates. On the other hand, the strain EH10 does not utilize readily glucose while a number of sugars are readily utilized for growth with acid production by H. saccharovorum. Thus, the isolate, EH10, was classified into the genus Halobacterium and could be a novel species of the genus by its main morphological and physiological features including G+C content. The optimal temperature for growth of the isolate, EH10, was 50.deg.C. But this strain did not grow when NaCl was replaced with KCl.
We isolated and cultured bacteria inhabiting solar saltern ponds in Taean-Gun, Chungnam Province, Korea. All of the isolated 64 strains were found to be moderately halophilic bacteria, growing in a salt range of 2-20 %, with an optimal concentration of 5% salt. Bacterial diversity among the isolated halophiles was evaluated via RFLP analyses of PCR-amplified 16S rDNAs, followed by phylogenetic analysis of the partial 16S rDNA sequences. The combination of restriction enzyme digestions with HaeIII, CfoI, MspI and RsaI generated 54 distinct patterns. A neighbor-joining tree of the partial 16S rDNA sequences resulted in the division of the 64 strains into 2 major groups, 45 strains of ${\gamma}-Proteobacteria$ (70.3%) and 19 strains of Firmicutes (29.7%). The ${\alpha}-Proteobacteria$ and Cytophaga-Flavobacterium-Bacterioides groups, which were repeatedly found to exist in thalassohaline environments, were not represented in our isolates. The ${\gamma}-Proteobacteria$ group consisted of several subgroups of the Vibrionaceae (37.5%), Pseudoalteromonadaceae (10.9%), Halomonadaceae (7.8%), Alteromonadaceae (7.8%), and Idiomarinaceae (6.3%). Members of Salinivibrio costicola (29.7%) were the most predominant species among all of the isolates, followed by Halobacillus treperi (12.5%). Additionally, three new species candidates were found, based on similarities of the 16S rDNA sequences to those of previously published species.
The effect of cryoprotectants and suspending solutions on the preservation of marine heterotophic bacteria was investigated. Six halotolerant and four halophilic bacterial isolates suspended in either distilled water or artificial seawater were preserved in glycerol and dimethylsulfoxide at -70$\^{C}$, respectively. After one year of preservation, the recovery rates on the appropriate agar plates were estimated. The survival rate was found to be dependent on the strain tested, regardless of the preservation conditions tested.
Three protease-producing halophilic bacteria were isolated from fermenting anchovy. Isolated FAM 10, FAM 114, and FAM 115 were found to grow optimally at salt concentrations of 2-4%, 10%, and 6%, respectively, and could grow in salinity of up to 18-22%. The salinity conditions for optimum protease production were 6% in FAM 10 and 10% in FAM 114 and FAM 115. The protease activity of FAM 10 was gradually inhibited by the addition of NaCl up to 10%, and was not evident at 14%, whereas FAM 114 and FAM 115 displayed protease activity at 14% NaCl and could not be measured at 18%. These results demonstrated that the three isolated strains belong to protease-producing, moderately halophilic bacteria. Strain FAM 10, FAM 114, and FAM 115 were identified as Salinivibrio sp., Halobacillus sp., and Halobacillus sp. respectively, based on comparative analyses of the 16S rRNA gene and the 16S-23S intergenic space sequence (IGS), biochemical testing, and Gram staining. Salinivibrio sp. FAM 10 had two 16S rDNAs containing different sequences at position 191 and four IGSs that harbored no tRNA gene and tRNA genes for isoleucine, alanine, glutamate, lysine, and/or valine. Halobacillus sp. FAM 114 and FAM 115 had completely identical 16S rRNA gene sequences and showed 99% identity to the sequences of various Halobacillus strains. The three IGSs found in the genome of both strains displayed 99% sequence identity with Halobacillus aidingensis and Halobacillus sp. JM-Hb, and had $IGS^0$ with no tRNA gene and $IGS^{IA}$ with tRNA genes for isoleucine and alanine.
The microbial changes during the fermentation of salted and fermented shrimp at different salt levels $(3{\sim}30%)$ were investigated to elucidate the effect of salt on the microflora of the fermented shrimp. During 22 weeks of fermentation, the numbers of total bacteria and yeasts of the fermented shrimp with 3, 8, 30% salt generally decreased with fermentation time, while those in the fermented shrimp of 18% salt increased. Halophilic bacteria were found only in the late stage of the fermentation at 18% salt. The greatest number of the halophilic yeasts was observed also at 18% salt level. The results indicated that 18% salt provided the most favorable environment for the microorganisms related to the shrimp fermentation.
Two species of halophilic bacteria were isolated from five salted seafoods and identified by 16S rDNA sequencing homology. One was identified as Halomonas subglaciescola and other four strains were belong to Halomonas marina. The identity of all isolates with standard organisms was above $95\%.$ H. subglaciescola, H. marina IN, and H. marina SH-2 grew in salinity condition from $3%\;to\;18\%$ NaCl but growth of H. marina SQ and H. marina SH-l grew in salinity environment from $8\%\;to\;17\%.$ Maximum biomass of H. subglaciescola, H. marina IN, H. marina SQ, H. marina SH-1, and H. marina SH-2 growing in LB medium containing $15\%$ NaCl were about 3.2, 4.5, 4.5, 5.7, and 4.2, however the maximum biomass in LB medium containing $5\%$ NaCl were about 2.2, 1.1, 0.7, 0.2, and 2.4 as optical density at 660 nm, respectively. In scanning electron micrograph, unknown material (mucus) attached to outer membrane of all isolates was observed. When mucus isolated from halophilic bacterial cell was added to culture of E. coli, E. coli grew in medium containing $15\%$ NaCl.
You, Young-Hyun;Park, Jong Myong;Lee, Myung-Chul;Kim, Jong-Guk
Korean Journal of Microbiology
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v.51
no.1
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pp.86-95
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2015
To study the halobacterial diversity at the rhizospheric soil of coastal plant native to Dokdo islands, several host plant were selected and its rhizospheric soil was sampled. Soil sample was diluted serially and pure isolation was done by sub-culture using marine agar media. 26 halophilic strains cultivable at the marine medium containig concentration of 9.0% sodium chloride were selected among total 161 isolates. Their partial 16S rRNA gene sequences extracted from genomic DNA were analyzed and partially identified. Furthermore, to identify their genetic relationship, phylogenetic tree was deduced. Total 26 strains were belongs to Firmicutes (30.8%), Gamma proteobacteria (53.8%), Bacteroidetes (7.7%), Alpha proteobacteria (7.7%), and Actinobacteria (7.7%). These results showed the specific difference from previous researches which has been reported the microbial flora of soil or sea water around the Dokdo islands. Furthermore, 4 among 26 halophilic strains grew at above 12.0% NaCl concentrated marine broth, and 2 strains Idiomarina abyssalis LM4H23 and Halomonas huangheensis AS4H13 grew at 15.0% concentration. These halophilic strains thought to overcoming the severe stress like high salt concentration or variation derived from Dokdo-specific climate and might have unknown, specific relationship with their host coastal plant native to Dokdo islands.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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