Rana ovarian follicles consist of oocyte, vitelline envelope, granulosa cells, and theca/epithelial layer. Using scanning electron microscopy, the surface structure of each follicular component was investigated. Changes in oocyte surface during oocyte maturation were also examined. Theca/epithelial layer was almost transparent and some blood vessels and granulosa cells were observed underneath in intact follicle. The number of granulosa cells was estimated to be 6700-7200 per oocyte. The granulosa cells partially overlapped each other and their microvilli penetrated the vitelline membrane via holes present in the vitelline envelope and seemed to be linked to oocyte microvilli. After removal of the vitelline envelope by microforcep, oocyte microvilli were observed on the surface of the devitellined oocyte. The oocyte microvilli formed partial clusters on the surface of white spot area which appears iust before germinal vesicle breakdown (GVBD), whereas they were evenly distributed in other areas. The microvilli became shorter and less dense with oocyte maturation. The lengths of oocyte microvilli in the immature and mature oocyte were 1.5 $\mu$m and 0.6 $\mu$m, respectively. The present study suggests a fundamental structural change occurring on the oocyte surface during maturation.
Chronic exposure to atrazine (ATR) raises concerns about adverse effects on reproductive functions. We tested our previously validated filtering device, the OBP-based filter, onto a biological model constituted of cultured swine granulosa cells treated for 48 h with media conditioned with 0.1 or $10{\mu}M$ ATR evaluating cell viability and steroidogenesis. The tested atrazine concentrations did not change granulosa cell viability and no filtering effects was observed following treatments with media prepared with differently filtered water. As for steroidogenesis, treatment of water with OBP-based filter containing $10{\mu}M$ atrazine completely suppressed the stimulatory effect of $10{\mu}M$ atrazine on progesterone production as well as the inhibitory effect of $0.1{\mu}M$ ATR on estradiol-$17{\beta}$ production by granulosa cells. Our data demonstrate that the impairment of steroidogenesis induced by ATR is effectively removed after water filtration in the experimental device thus suggesting potential use in biotechnological applications on living cells and/or organisms.
This study was conducted to improve the production efficiency of in vitro produced (IVP) embryos in Korean Native cows. The optimal conditions and procedures for in vitro maturation(IVM), in vitro fertilization(IVF) and in vitro culture(IVC) of bovine follicular oocytes and IVP embryos were evaluated. Immature follicular oocytes were collected fiom the follicles of bovine ovaries obtained from abattoirs. The oocytes of Grade I and II for IVM were cocultured with monolayered bovine oviductal epithelial cells(BOEG) or granulosa cells in TCM-199 solution supplemented with follicle stimulating hormone, lutenizing hormone, estradiol-17$\beta$ and heat inactivated fetal calf serum at 39$^{\circ}C$ under 5% $CO_2$ in air for 14 to 24 hours. Most of the oocytes(93%) matured to metaphase II in 24 hours. The cocultured IVM oocytes were fertilized in vitro at significantly(P<0.05) higher rate with BOEC(83.8%) and with granulosa cells(84.6%) than the non-cocultured IVM oocytes(73.6%). The IVM-IVF embryos developed to morula and blastocyst at significantly(P<0.05) higher rate in coculture with BOEC(41.2%) than with granulosa cells(23.1%) or conditioned medium(23.4%).
Arachidonic acid (AA) is a polyunsaturated fatty acid that is a normal constituent of membrane lipids in animal cells. In addition to its role as a precursor of prostaglandins, AA itself may play an important role in the regulation of cell function. The effect of AA on functions of granulosa cells was investigated in pre-hierarchical small yellow follicles of laying hens. Immuno-cytochemical staining showed that AA ($10^{-7}-10^{-5}$ M) increased the expression of the extracellular matrix glycoprotein laminin, gap junction connexin 43 and protein kinase C (PKC). Therefore, mediated by the PKC signal pathway, AA may regulate the intercellular communication of granulosa cells and follicular development by increasing the expression of laminin and connexin.
The oocyte quality is of great importance in infertility as it reflects the follicle developmental potential and further affects the embryo development, clinical pregnancy outcomes. The analysis of gene expression in somatic cells is an important study to better clinical in vitro fertilization (IVF) outcomes in embryo selection reflecting the appropriate communication between the oocyte and somatic cells. Specifically, somatic cell transcriptomic technology can help assess biomarkers of oocyte and embryo ability. The present article aims to overview the basic aspect of folliculogenesis and review studies involving changes in candidate gene expression of cumulus or granulosa cell related to clinical outcomes in human IVF.
Objective: Superstimulatory treatment of one-month-old lambs can achieve synchronous development of numerous growing follicles. However, these growing follicles cannot complete maturation and ovulation. Oocyte maturation and competence are acquired during follicular development, in which granulosa cells play an essential role. Methods: In this study, we applied RNA sequencing to analyze and compare gene expression between prepubertal and adult superstimulated follicle granulosa cells in sheep. Results: There were more than 300 genes that significantly differed in expression. Among these differently expressed genes, many extracellular matrix genes (EGF containing Fibulin Like Extracellular Matrix Protein 1, pentraxin 3, adrenomedullin, and osteopontin) were significantly down-regulated in the superstimulated follicles. Ingenuity pathway and gene ontology analyses revealed that processes of axonal guidance, cell proliferation and DNA replication were expressed at higher levels in the prepubertal follicles. Epidermal growth factor, T-Box protein 2 and beta-estradiol upstream regulator were predicted to be active in prepubertal follicles. By comparison, tumor protein P53 and let-7 were most active in adult follicles. Conclusion: These results may contribute to a better understanding of the mechanisms governing the development of granulosa cells in the growing follicle in prepubertal sheep.
Fluoxetine (FLX), a selective serotonin reuptake inhibitor antidepressant, exhibits various other mechanisms of action in numerous cell types and has been shown to induce cell death in cancer cells, paving the way for its potential use in cancer therapy. The aim of this study was to determine the off-target effects of the anti-depressant drug FLX, on the human ovarian granulosa tumor COV434 cells stimulated by forskolin (FSK), by measuring the real-time kinetics of intracellular cyclic AMP (cAMP), ATP level, cytoplasmic calcium ([Ca2+]cyt) and survival of COV434 cells. We show that incubating COV434 cells with FLX (between 0.6 and 10 μM) induces a decrease in intracellular cAMP response to FSK, a drop in ATP content and stimulates cytoplasmic Ca2+ accumulation in COV434 cells. Only the highest concentrations of FLX (5-10 μM) diminished cell viability. The present report is the first to identify an action mechanism of FLX in human tumor ovarian cells COV434 cells and thus opening the way to potential use of fluoxetine as a complementary tool, in granulosa tumor treatments.
좀구굴치 성숙란의 난여포층은 외층인 theca cell과 내층인 granulosa cell로 구분되며 특히 원주형인 granulosa cell은 분비활동으로 인하여 세포질에 분비물이 축적되면서 난모세포를 둘러싸게 된다. 이러한 granulosa cell은 난황형성 초기인 난황포 시기에 입방형태를 보이지만 난황구시기에는 원주상세포로 바뀌면서 점액을 분비하는 특징을 보여 주고 있다. 이러한 부착물질은 형태가 없으며 전자밀도가 높다. 또한 이러한 분비물을 가지는 난막은 난황형성이 더욱 진행됨에 따라 동물극 부근이 식물극보다 더욱 두꺼워지고 커지게 된다. 이러한 점막여포층 아래에는 약 $7.8{\sim}11.5\;{\mu}m$ 두께의 방사대가 존재한다. 방사대는 전자밀도가 낮은 외층과 3~5층의 여러 전자밀도층을 가지는 내층으로 구성되어 있다. 한편 점막여포층은 방사대에 존재하지 않고 있기 때문에 이 물질은 난세포질이 여포상피로부터 기원된 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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