평균 체중이 $137.51{\pm}4.84g$인 Sprague-Dawley종 수컷 22마리를 세 군으로 나누어 각각 68% cornstarch 식이(cornstarch군)와 20% sucrose+48% cornstarch 식이(sucrose군), 그리고 20% glycosylsucrose+48% cornstarch
식이(glycosyl-sucrose군)로 6주간 사육하여 glycosyl-sucrose가 혈당 및 혈청 지질 농도, 당 가수분해 효소의 활성에 미치는 영향을 검토하였다. 사료 섭취량, 체중 증가량 및 사료 효율에 있어서는 세 군간에 유의적인 차이를 볼 수 없었다. Glycosyl-sucrose군에서 공복시의 혈당 농도는 sucrose군과 비교해 차이가 없었으나 포도당 투여 30분 후, 60분 후의 혈당치는 낮은 경향을 보였다. 또한 충혈당바응면적(total integrated blood glucose response area)도 sucrose군에 비해 낮은 경향을 보였다. 혈청 지질 함량은 분석한 지질(중성 지방, 인지질, 총콜레스테롤, HDL-콜레스테롤) 모두에 있어 세 군간에 통계적 유의성은 없었다. 췌장-amylase 활성은 glycosyl-sucrose 군에서 증가하는 경향을 보였다. 소장 점막, 특히 공장과 회장에서의 서당 가수분해 효소 활성은 glycostyl-surcose군이 다른 두 군에 비해 유의적으로 감소되었다. 맥아당 가수분해 효소의 활성은 cornstarch군에 비해 glycostyl-surcose군의 공장과 회장 부위에서 낮게 나타났으며 특히 공장에서는 sucrose군보다도 유의적으로 낮은 수치를 보였다.
The objective of this study is to understand how regulatory mechanisms respond to sugar status for more efficient carbon utilization and source-sink regulation in plants. So, we need to identify and characterize many components of sugar-response pathways for a better understanding of sugar responses. For this end, genes responding change of sugar status were screened using Arabidpsis cDNA arrays, and confirmed thirty-six genes to be regulated by sucrose supply in detached leaves by RNA blot analysis. Eleven of them encoding proteins for amino acid metabolism and carbohydrate metabolism were repressed by sugars. The remaining genes induced by sugar supply were for protein synthesis including ribosomal proteins and elongation factors. Among them, I focused on three hydrolase genes encoding putative $\beta$-galactosidase, $\beta$-xylosidase, and $\beta$-glucosidase that were transcriptionally induced in sugar starvation. Homology search indicated that these enzymes were involved in hydrolysis of cell wall polysaccharides. In addition to my results, recent transcriptome analysis suggested multiple genes for cell wall degradation were induced by sugar starvation. Thus, I hypothesized that enzyme for cell wall degradation were synthesized and secreted to hydrolyze cell wall polysaccharides producing carbon source under sugar-starved conditions. In fact, the enzymatic activities of these three enzymes increased in culture medium of Arabidopsis suspension cells under sugar starvation. The $\beta$-galactosidase encoded by At5g56870 was identified as a secretory protein in culture medium of suspension cells by mass spectrometry analysis. This protein was specifically detected under sugar-starved condition with a specific antibody. Induction of these genes was repressed in suspension cells grown with galactose, xylose and glucose as well as with sucrose. In planta, expression of the genes and protein accumulation were detected when photosynthesis was inhibited. Glycosyl hydrolase activity against galactan also increased during sugar starvation. Further, contents of cell wall polysaccharides especially pectin and hemicellulose were markedly decreased associating with sugar starvation in detached leaves. The amount of monosaccharide in pectin and hemicellulose in detached leaves decreased in response to sugar starvation. These results supported my idea that cell wall has one of function to supply carbon source in addition to determination of cell shape and physical support of plant bodies.
호알칼리성 Bacillus sp. YC-335가 생산하는 CGTase의 효소학적 특성 및 작용반응을 살펴보았다. ${\alpha}-CD,\;{\beta}-CD$ 및 ${\gamma}-CD$로부터 glucosyl residues를 설탕으로 전이시키는 반응에 대한 효소의 최대 반응속도, Vmax 값은 각각 $16.13,\;21.8,\;9.8{\mu}moles glucose/min/mg\;protein$이었으며 Km 값은 각각 1.68, 0.33, 0.37 mM이었다. 효소의 전분 가수분해활성은 여러 당류에 의해 촉진되었으며 특히 전분 가수분해 산물인 maltose와 glucose에 의한 효과가 가장 좋았다. 이 효소는 ${\beta}CD$에 의해 효소의 전분 분해활성이 저해되었으며 비경쟁적 저해형식을 보였다. 또한 전분으로부터 효소작용에 의해 생성된 산물을 총당량법 및 HPLC 분석을 통해 조사한 결과 이 효소는 cyclization 작용 뿐만 아니라 transglycosylation 작용과 disproportionation 작용을 가지는 것으로 확인하였다.
[ ${\alpha}$ ]-갈락토올리고 당인 melibiose, raffinose와 stachyose의 ${\alpha}-1,6$으로 결합된 D-galactosyl 잔기를 완전히 가수분해하는 것으로 확인된 Bacillus licheniformis YB-42의 ${\alpha}-galactosidase$는 사멸기에 도달하였을 때 배양상등액에서 최대활성을 보였다. ${\alpha}$-갈락토올리고 당의 가수분해 정도를 TLC와 환원당 생성량으로 분석한 결과, ${\alpha}-galactosidase$는 melibiose, raffinose, stachyose 순서로 가수분해 활성이 높았다. 반응산물인 당을 첨가하여 반응하였을 때 첨가 된 반응산물에 따라 가수분해 활성의 저해정도가 다르게 나타났으며, galactose에 의한 저해도가 가장 높았다. 첨가된 당의 농도 (20 mM)가 기질과 동일할 때는 가수분해 활성의 저해도가 미미하였으며 5배 농도로 첨가하였을 때도 가수분해 활성의 저해정도가 높지 않았다. 한편 소량의 효소로melibiose를 가수분해 하였을 때 반응초기에 TLC 상에서 기질보다 이동도가 낮은 물질이 생성되었으며, 이로보아 B. licheniformis YB-42의 ${\alpha}-galactosidase$는 당 전이활성을 갖는 것으로 여겨진다. 또한 대두분 추출액을 ${\alpha}-galactosidase$로 처리한 후 최종 반응산물을 분석한 결과, 대두분에 존재하는 raffinose와 stachyose가 완전히 가수분해 되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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