• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권5호
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• pp.365-369
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• 1986

새로운 alcohol발효성 효모 균주 개발을 목적으로 S. diastaticus 와 C. tropicalis간의 세포 융합을 하여 얻은 fusant의 성질에 대해서는 제3보$^{(10)}$에서 발표한 바이다. 본 보에서 는 fusant의 glucoamylase와 pullulanase activity와 glucoamylase의 성질 및 발효력을 조사하였다. glucoamylase activity는 parent보다 fusant가 1.5배 높은 활성을 나타내었고 pullulanase activity 역시 두배의 높은 활성을 나타내었다. glucoamylase의 성질을 조사한 바 온도, pH에서 비슷한 경향을 나타내었으며 발효력을 조사하기 위하여 정치법에서는 기질을 soluble starch로 한 것 보다 liquefied potato starch에서 alcohol 생성력이 2배 증가되었으며 발효력 또한 더 나았다. 15% 액화한 potato starch를 기질로하여 jar-fermenter에서 발효시켰을 때 당화율 94%에서 생성된 alcohol이 7.8% (v/v)이고 소비된 당에 대한 발효율은 78%였다.

• 환경위생공학
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• 제5권1호
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• pp.49-64
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• 1990

Glucoamylase from the culture filtrate of Aspergillus nicer was purified by ammonium sulfate precipitation, aceton precipitation, DEAE-cellulose ion exchange chromatography and Sephadex G-50 gel fillration. Glucoamylase was secreted into the medium upon growth on glucose, sucrose or a variety of other hexose sugars or hexose sugar polymers and little or no glucoamylase activity was found when glycerol or xylose was used as the carbon source. The optimum pH and temperature (or the maximum enzyme activity were found to be 5.0 and $50^{\circ}C$, respectively. The enzyme was considerably thermostable, for no loss of activity was observed when the enzyme was preincubated at $60^{\circ}C$ for 30 min. The enzyme activity was inhibited by 20 mM of $Hg^{2+}$, $Fe^{2+}$. The km value for starch was 0.045%.

• 한국균학회지
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• 제27권6호
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• pp.386-393
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• 1999

대체에너지 생산을 위한 우수발효효모를 선별하기 위하여 전국 지역에서 전분, 전분박 및 전분 공장의 주변 토양과 폐수 등 시료를 채취하여 glucoamylase를 분비하는 효모균 64분리주를 얻었으며 이중 비교적 높은 activity를 보여주는 분리주를 선별하였다. 분리주를 동정한 결과 A1-5, D1, E3, G1과 J20은 Saccharomyces diastaticus로 동정되었으며 Saccharomycopsis fibuligera와 Schwanniomyces occidentalis는 각각 두 분리주, Ambrosiozyma monospora와 Lypomyces kononenkoae로 각각 한 분리주색 동정되었다. 그 중 높은 효소활성을 보여주는 S. diastaticus A1-5, J20과 E3을 선택하여 분비되는 glucoamylase의 일반적인 특성을 조사하였다. 배양액내의 효소의 생성을 측정한 결과 glucose나 saccharose, 그리고 4탄당과 3탄당보다 수용성녹말에 의하여 현저하게 증가하였다. Glucoamylase활성의 반응 최적 온도는 $50^{\circ}C{\sim}60^{\circ}C$였고, 최적 pH는 $5{\sim}6$이었으며, 열에 대해서는 $60^{\circ}C$ 이상에서는 불안정한 활성을 보며주었다. 금속이온에 따른 효소의 활성은 $Na^+,\;Mg^{2+}$에 의해 약간 증가하였으나, $H^{2+},\;Ag^{2+}$에 의해 현저하게 감소되는 현상을 보여주었다. 효소의 기질 특이성은 수용성녹말이 쌀 전분, 옥수수전분과 밀 전분에 비하여 현저하게 좋은 기질임을 알 수 있었다.

• 한국식품과학회지
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• 제16권4호
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• pp.398-402
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• 1984

Rhizopus oryzae 가 생산(生産)하는 glucoamylase 의 각종기질(各種基質)에 대(對)한 분해반응(分解反應)을 검토(檢討)하였다. Glucoamylase I 과 II 는 amylose, amylopectin, glycogen, 가용성 전분, pullulan, maltose, maltotriose, maltotetriose, maltopentaose, maltohexaose, maltoheptaose, maltooctaose를 가수분해(加水分解)하였으나, ${\alpha}-cyclodextrin$, ${\beta}-cyclodextrin$, sucrose, raffinose, 젖당은 가수분해(加水分解)하지 못하였다. $37^{\circ}C$, 32시간(時間)의 반응(反應)에서 glucoamylase I 은 amylopectin, 가용성 전분, amylose를 거의 100% 분해하였고 glycogen 만을 88%정도 분해 하였으나, glucoamylase II 는 공시기질(供試基質) 4 종(種)을 거의 100% 분해하였다. Glucoamylase I 과 II 의 반응생성물질(反應生成物質)은 glucose 만이었고 ${\alpha}-glucosyltransferase$ activity는 없었다. Glucoamylase I 과 II 는 생찹쌀 전분을 가장 잘 분해(分解)시키나 생감자 전분, 생미숙 바나나 전분, 생칡 전분, 생참마 전분, raw high amylose corn starch의 분해능(分解能)은 glucoamyase I 에 비(比)하여 생전분(生澱粉)의 분해력(分解力)이 강(强)하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제24권6호
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• pp.712-716
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• 1996

The effects of non-ionic surfactants (Triton X-100 and Tween 80) on cloned glucoamylase production and secretion in recombinant Saccharomyces cerevisiae culture were studied. Even though the extracellular glucoamylase activity was increased by addition of Tween 80 due to the increase of the cell mass, Tween 80 did not play a role in the increase of glucoamylase secretion. On the addition of Triton X-100 addition, the secretion efficiency was increased while the cell growth was inhibited. Triton X-100 was added to the culture broth after 24 hr of culture to minimize the inhibition of the cell growth, and consequently the glucoamylase activity in the culture broth was increased by 12%.

• 산업기술연구
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• 제39권1호
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• pp.15-19
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• 2019

This work focused on characterization of the starch degradation activity from extremophile strain Deinococcus geothermalis. Glucoamylase gene from D. geothermalis was cloned and overexpressed by pET-21a vector using E. coli BL21 (DE3). In order to characterize starch degrading activity of recombinant glucoamylase, enzyme was purified using HisPur Ni-NTA column. The recombinant glucoamylase from D. geothermalis exhibited the optimum temperature as $45^{\circ}C$ for starch degradation activity. And highly acido-stable starch degrading activity was shown at pH 2. For further optimization of starch degrading activity with metal ion, various metal ions ($AgCl_2$, $HgCl_2$, $MnSO_4{\cdot}4H_2O$, $CoCl_2{\cdot}6H_2O$, $MgSO_4$, $ZnSO_4{\cdot}7H_2O$, $K_2SO_4$, $FeCl_2{\cdot}4H_2O$, NaCl, or $CuSO_4$) were added for enzyme reaction. As results, it was found that $FeCl_2{\cdot}4H_2O$ or $MnSO_4{\cdot}4H_2O$ addition resulted in 17% and 9% improved starch degrading activity, respectively. The recombinant glucoamylase from D. geothermalis might be used for simultaneous saccharification and fermentation (SSF) process at high acidic conditions.

• 미생물학회지
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• 제31권2호
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• pp.136-140
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• 1993

A awamori 의 glucoamylase 유전자와 A. nidolans 의 trpC maker 유전자를 가진 A. nidulans 의 expression vector 를 만들었다. 이재조합 plasmid 를 트립토판 영양요구주의인 A. nidulans B17 에 형질전환시켰다. Southern blotting 으로 vector DNA 가 A. nidulans 의 chromosomal DNA 에 integration 된 것을 확인하였다. Northern blotting 의 결과, glucoamylase 유전자는 induction 조건에서 mRNA 를 합성하였다. glucoamylase 의 역가가 형질전환체에서 증가하였으며, nondenaturing polyacrylamide gel 에서 glucoamylase 의 활성이 나타났다.

• 한국식품과학회지
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• 제16권3호
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• pp.322-328
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• 1984

Pizopus oryzae가 생산(生産)하는 glucoamylase를 유안(硫安)및 acetone 분획(分劃)과 이온교환수지의 column chromatography에 의하여 정제(精製)하였다. 즉(卽) 조효소액(粗酵素液)을 유안분획(硫安分劃) acetone 분획(分劃), DEAE-cellulose column chromatography, CM-cellulose column chromatography에 의(依)하여 두가지형(型)의 glucoamylase를 분리정제(分離精製)하였으며 이들을 각각(各各) glucoamylase I과 II라고 하였다. Glucoamylase I과 II의 Specific activity는 각각(各各) 157.6U/mg protein (조효소액(粗酵素液)의 37.5배(倍)) 164.7U/mg protein (조효소액(粗酵素液)의 39.2배(倍)) 이었고 수율(收率)은 각각(各各) 4.3%, 3.8%이었다. Glucoamylase I과 II는 polyacrylamide disc gel electrophoresis와 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis에 의(依)하여 각각(各各) 단일(單一)한 band를 나타내었고 이 단백질(蛋白質) band는 옥도염색(沃度染色)에 의(依)해 glucoamylase 활성(活性)을, PAS염색(染色)에 의(依)해 glycoprotein임을 확인(確認)하였다.

• 한국버섯학회지
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• 제9권2호
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• pp.53-58
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• 2011

In order to confirm the presence of putative glucoamylase gene in Tricholoma matsutake genome, the genomic DNA was prepared from T. matsutake NBRC30773 strain and was used as template to clone the glucoamylases gene (TmGlu1). We obtained the nucleotide sequence of TmGlu1 and its franking region. The coding region (from ATG to stop codon) is 2,186 bp. The locations of exons and introns were determined from the nucleotide sequences of 3'- and 5'-RACE PCR and RT-PCR products. On the other hand, to investigate the relationship between composition of medium and glucoamylase expression, we checked the expression level of glucoamylase gene by realtime reverse transcription PCR and measurement of glucoamylase enzyme activity. It was found that enzyme activity of glucoamylase was very low in different medium. Expression of glucoamylases gene appeared to not be affected by different carbon source.

• 미생물학회지
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• 제28권3호
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• pp.181-187
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• 1990

전분 분해능력을 갖는 알콜생산용 효모를 만들기 위해 Saccharomyces cerevisiae에 glucoamylase 유전자인 STA를 도입하였다. 도입된 형질의 발현증대를 위해 STA 유전자의 promoter 부위를 alcohol dehydrogenase isoenzyme I 유전자의 promoter 부위와 치환 시켜준 재조합 플라스미드를 재조하였으며 안정성을 증진시키기 위해 centrometer 부위를 치환시킨 결과 glucoamylase의 발현이 증가하였으며, STA 유전자와 centromere를 갖고 있는 재조합 플라스미드는 여러세대가 거듭되어도 비교적 안정하게 유지되었으나 낮은 copy 수로 인해 형질전환체의 효소 역가와 형질전환 빈도는 낮아졌다. STA 유전자가 도입되어 형질전환된 다배체 산업용 효모는 액화 과정만을 거친 주정생산 배지(액화액)에서 원래의 알콜 생산용 효모에 비해 훨씬 많은 양의 알콜을 생산해 내었다. 그러나 centromere를 보유하는 플라스미드에의한 산업용 효모의 형질전환에는 실패하였다.