이 실험에서는 조피볼락을 대상으로 중성 formalin과 formalin으로 약욕하여 잔존량과 잔존기간 및 병리 조직학적 변화를 관찰하고 온도가 미치는 영향에 대해서 알아보았다. formalin 과 중성 formalin의 잔존량은 $15^{\circ}C$일 때 약욕 직후 약간의 차이를 제외하고는 별다른 차이를 보이지 않았다. 잔존기간은 수온 $15^{\circ}C$와 $25^{\circ}C$은 조건에서 각각 72 hr과 24 hr으로 온도의 영향을 많이 받는 것으로 나타났다. 어체에 미치는 독성은 중성 formalin보다 formalin이 강하게 나타나고 수온과 농도가 증가 할수록 조직에 미치는 영향이 심해졌다. formalin 약욕으로 인하여 아가미 조직에서는 부종과 상피세포의 박리, 뒤틀림, 괴사증상이 그리고 간에서는 부종과 핵농축, 공포화 현상이 나타나고 신장에서는 수증성 퇴행적 병변과 세뇨관 상피세포의 과립화 중상, 괴사가 일어나고 피부에서는 점액 세포의 증가와 표피의 괴사 및 피하조직과 진피층의 균열이 나타났다.
넙치 (Paralichthys olivaceus)를 카드뮴 아치사 농도인 5, 10, 50, 100$\mu$g/L의 구간에 노출시켜 30일 동안 아가미, 간, 신장, 창자에서 축적되는 정도를 조사하였다. 넙치에서 카드뮴의 축적은 아가미, 창자와 간에서 카드뮴의 노출농도와 노출기간에 따라서 증가를 하였으며, 그러한 양상은 선형적으로 증가를 하였다 노출 20일까지는 기관별 축적순서는 아가미>간>창자>신장의 순서로 나타나지만, 노출 30일 이후에는 아가미와 간에서 축적이 완만한 경향을 나타내며, 창자의 축적은 급격한 경향을 나타내어 기관별 축적순서는 창자>아가미>간>신장의 순서로 나타났다. 카드뮴의 넙치에 대한 축적계수는 아가미와 신장, 창자에서 노출농도에 반비례하며, 노출 시간에 따라 증가하는 경향을 나타났다.
팽이버섯의 다양한 유전자의 기능을 연구하기 위한 방법으로 팽이 자실체의 주름조직을 사용하여 A. tumefaciens을 매개로 한 형질전환을 수행하였다. Hygromycin 항생제 저항성 유전자를 포함하고 있는 AGL-1 pBGgHg를 팽이버섯의 자실체 조직에 도입시킴으로서 형질전환체들을 얻을 수 있었다. 형질전환체 선발은 첫 번째로 hygromycin 선발 배지에서 선발한 뒤 gpd-FH, hph-R primer를 이용하여 PCR로 확인 할 수 있었다. hygromycin은 30 ug/ml에서 선발 효율이 가장 높았다. 형질전환체 중 일부는 갈색 자실체를 갖는 wild type과는 달리 백색 자실체를 나타내었다. 형질전환체의 southern blot결과 외래유전자가 팽이버섯 내부에 하나 또는 그 이상의 다양한 copy 수로 삽입되어 있음을 알 수 있었다. 또한 삽입된 유전자의 주변 염기서열에 대한 정보는 Inverse PCR을 통해 알 수 있었다.
소음 스트레스로 인한 뱀장어(Anguilla japonica)의 영향을 파악하기 위하여 스트레스 지표로 사용되는 코티졸, 포도당, 알부민 및 glucocorticoid receptor(GCR) 유전자의 발현 양을 측정, 분석하여 노출되지 않은 대조구와 비교하였다. 그 결과, 알부민은 노출 1시간 후에 낮은 값을 보인 반면 코티졸과 포도당은 대조구에 비해 매우 큰 차이를 보이며 높게 나타났다. GCR 유전자의 조직 발현 결과 간, 아가미, 근육 및 소장에서 많이 발현하였다. 소음 노출에 따른 시간의 변화에서 간과 아가미 근육과 소장에서 발현이 감소하는 양상을 나타내었다. 실험결과 뱀장어의 glucocorticoid receptor 유전자의 발현변화가 소음 스트레스로 인한 영향을 파악하는데 유용한 지표가 될 수 있음을 확인하였다.
오존처리 해수중에 함유하는 잔류 옥시던트(TRO)가 양식 넙치의 생존, 혈액성상과 삼투질 농도, 산소소비 및 아가미 조직에 미치는 독성 영향을 조사하였다. TRO에 노출된 넙치의 48-hr 및 96-hr $LC_{50}$은 각각 26.4 와 22.3ppb이었고, 47ppb에서는 3시간 이내에 모두 치사하였으나 13ppb에서는 96시간 동안 폐사발생이 없었다. TRO 24~39ppb 농도범위에 노출된 넙치의 hematocrit, 헤모글로빈, 적혈구 수, 혈중 sodium과 chloride 이온 및 삼투압 농도는 TRO 농도가 높을수록 유의하게 증가하였고, 아가미 조직은 아가미 상피층이 모세혈관으로부터 박리되고, 괴사와 상피새포의 증생이 관찰되었다. 산소소비율은 TRO 농도가 높고, 노출이 계속될수록 감소하였다. 13ppb에서는 아가미 조직과 생리상태에 미치는 변화는 관찰되지 않았으나 혈당은 유의하게 증가하였다. 그러나 활성탄으로 TRO를 제거한 대조구에서는 오존의 독성 영향은 관찰되지 않았다. 잔류오존에 노출된 넙치는 삼투질 농도의 생리적 불균형 및 아가미 손상과 상피세포의 증생에 의한 산소섭취 부족이 치사를 유발하는 것으로 나타났다. 본 연구의 결과 해산어 양식장에서 오존을 사용할 경우에는 오존처리수중의 TRO는 제거하여야 하며, 비록 저농도라도 장기간 노출되면 양식어류의 생존과 생리상태에 미치는 영향은 현저할 것으로 평가되었다.
Lee, Young Mee;Lee, Jeong-Ho;Noh, Jae Koo;Kim, Hyun Chul;Park, Choul-Ji;Park, Jong-Won;Hwang, In Joon;Kim, Sung Yeon
한국발생생물학회지:발생과생식
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제17권4호
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pp.329-335
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2013
TCR subunits are members of membrane-bound receptors which allow the fast and efficient elimination of the specific fish pathogens have regulated function in adaptive immunity. Sequence structure of TCR subunits have been reported for various teleosts, but the information of each TCR subunit functional characterization through expression analysis in fish was unknown. In this study, we examined the gene expression of TCR subunits in the early developmental stages and observed transcript levels in various tissues from healthy adult olive flounder by RT-PCR. The mRNA expression of alpha subunit was already detected in the previous hatching step. But the transcripts of another TCR subunit were not observed during embryo development and increased after hatching and maintained until metamorphosis at the same level. It was found that all TCR subunits mRNAs are commonly expressed in the immune-related organ such as spleen, kidney and gill, also weak expressed in fin and eye. TCR alpha and beta subunit were expressed in brain, whereas gamma and delta were not expressed same tissue. The sequence alignment analysis shows that there are more than 80% sequence homology between TCR subunits. Because it has a high similarity of amino acid sequence to expect similar in function, but expression analysis show that will have may functional diversity due to different time and place of expression.
Herath, H.M.L.P.B;Priyathilaka, Thanthrige Thiunuwan;Elvitigala, Don Anushka Sandaruwan;Umasuthan, Navaneethaiyer;Lee, Jehee
Fisheries and Aquatic Sciences
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제18권3호
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pp.273-281
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2015
The follistatin (FST) gene encodes a monomeric glycoprotein that plays a role in binding and inhibiting the functions of members of the transforming growth factor (TGF)-${\beta}$ superfamily. Thus, FST facilitates a wide variety of functions, ranging from muscle growth, to inflammation and immunity. In this study, we sought to characterize an FST counterpart, RbFST, which was identified from rock bream Oplegnathus fasciatus. The RbFST cDNA sequence (2,419 bp) contains a 933-bp open reading frame (ORF) that encodes a putative amino acid sequence for RbFST (35 kDa). The putative amino acid sequence contains a Kazal-type serine protease inhibitor domain (51-98 residues) and an EF-hand, calcium-binding domain (191-226 residues). Additionally, this sequence shares a high identity (98.7%) with the Siniperca chuatsi FST sequence, with which it also has the closest evolutionary relationship according to a phylogenetic study. Omnipresent distribution of RbFST transcripts were detected in the gill, liver, spleen, head kidney, kidney, skin, muscle, heart, brain, and intestine of healthy animals, with significantly higher expression levels in the heart, followed by the liver tissue. Under pathogenic stress caused by two bacterial pathogens, Streptococcus iniae and Edwardsiella tarda, RbFST transcription was found to be significantly up-regulated. Altogether, our findings suggest the putative role of RbFST in immune related responses against pathogenic infections, further prefiguring its significance in rock bream physiology.
Since 1993, the White Spot Syndrome Virus (WSSV) disease occurred in China among cultured shrimps resulting in mass mortality. Epizootiological surveys undertaken during the outbreak period of 1993-1994 indicated that all stages of Penaeus chinensis, P. japonicus and P. monodon were infected. Consequent to the transport of contaminated shrimp seedlings and seawater, the disease spread all over the farms of China. The disease was more rapidly transmitted at temperatures above $25^{\circ}C$. Challenge experiments showed the causative agent was highly virulent. White spots appeared on the carapace of both span-taneous and experimentally infected shrimps. Moribund shrimps contained turbid hemolymph, hypertrophied Iymphoid organ and a necrotic mid-gut gland. Electron microscopy showed the presence of viral particles in the gills, stomach, lymphoid organ, and epidermal tissue of the infected shrimp. The visions were slightly ovoid with an envelope and averaged 350 $\times$ 150 nm; nucleocapsids measured 375 $\times$ 157 nm. With discontinuous sucrose gradient of 35, 50 and 60% (w/v), the virus was separated from hemolymph of the infected shrimp. The estimated molecular weight of genomic DNA was 237 Kb with EcoR I, 247 Kb with Hind III and 241kb with Pst I. A total of 9 hybridoma colones secreting monoclonal antibodies (MAbs) were produced from mouse myeloma and spleen cells immunized with WSSV. The immunofluorescence assay of gill tissue showed that the MAbs reacted with diseased but not with healthy shrimp. The MAbs belonged to IgGl, IgG2b subclass and IgM class, all with kappa light Immune-electron-microscopy with colloidal gold marker showed the presence of 5 MAbs epitopes on the envelope and one on the capsid of the virus. Baculoviral mid-gut gland necrosis showed the specificity of the MAbs produced. For diagnosis 5 different methods were selected. Using Kimura primers for PCR, or MAbs for immunoblot, ELISA or FAT method, in situ hybridization was carried out to show the gene. All these methods detected WSSV in the organ samples of the diseased shrimp but not in healthy one.
We investigated a nematode infection in the epithelial tissue of rockfish Sebastes schlegeli cultured in Cheonsu Bay, western Korea, from May 2013 to April 2014. Nematodes infected the epithelial tissues of various external organs, including the fins, operculum, nares, mouth, and head. Over a 1-year period, the overall nematode infection rate in rockfish was 55% (n=89/163): 56.7% (n=17/30) in May 2013, 88% (n=29/33) in August 2013, 0% (n=0/30) in October 2013, 70% (n=21/30) in January 2014, and 55% (n=22/40) in April 2014. During this study, the only mass mortality of cultured rockfish in Cheonsu Bay was in August 2013, when we identified skin wounds on the rockfish caused by the nematodes escaping from their hosts. During this period, the accumulated mortality for 2 weeks was 1.4-22.4% in different farms. In addition, several pathogenic bacteria (Photobacterium damselae, Vibrio spp., and Streptococcus iniae) were isolated from the moribund rockfish; these were thought to be transmitted through the skin wounds caused by the nematodes.
Cytokines are proteins produced by many different cells of the immune system and play a significant role in initiating and regulating the inflammatory process. In this research, an important cytokine, interleukin-10 (IL-10) gene, has been identified and characterized from zebrafish (Danio rerio) genome database. Zebrafish IL-10 is located within a 2690 bp fragment and contains five exons and four introns, sharing the same organization with mammalian IL-10 genes. An open reading frame of 543 bp was found to encode a putative 180 amino acid protein with a signal peptide of 22 amino acids, which shares 29.7-80.9% homology with amino acid sequences of other known IL-10. The signature motif of IL-10 is also conserved in zebrafish IL-10. The predicted transcript was finally confirmed by sequencing of cDNA clones. Multi-tissue reverse transcriptase PCR (RT-PCR) was performed to examine the tissue distribution and expression regulation of this gene in seven organs of normal and lipopolysaccharide (LPS) stimulation zebrafish. The results demonstrated that this gene was expressed slightly in normal kidney, gill and gut, no expression was detected in other four tissues. The expression was clearly upregulated after LPS stimulation. Using the ideal zebrafish model, further study of IL-10 characterization and function may provide insight on the understanding of the innate immune system.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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