정자의 동결보존을 위한 새로운 기술개발 목적은 동결과정에서 최소한의 손상으로, 응해 후 최대한 높은 활력도의 정자를 얻는 것이다 정자가 난자와 수정하기 위해서는 적당한 생존성과 운동성을 유지해야 하는데, 가장 일반적인 방법으로는 정자의 진진 운동성과 첨체의 정상 여부 및 형태 검사방법 등이 있다 본 연구는 사람 정액을 동결보존 할 때 semi-programmable freezer를 이용한 완만동결 방법과, 액체질소의 vapor를 이용한 급속동결 방법이 응해 후 정자의 운동양상과 생존율 및 형태에 미치는 영향을 알아보기 위해 실시하였다. 동결-응해 후 정자의 MOT, VCL, VSL, VAP는 각각 급속 동결방법에서 47.40$\pm$20.06%, 38.12$\pm$15.58 $\mu$m/s, 28.19$\pm$14.10 $\mu$m/s, 33.64$\pm$15.15 $\mu$m/s로 완만 동결방법인 43.39$\pm$18.79%, 33.91$\pm$13.50 $\mu$m/s, 19.98$\pm$10.88 $\mu$m/s, 24.60$\pm$11.72 $\mu$m/s보다 유의적으로 높았으나(p<0.05), LIN은 완만동결 방법이 34.64$\pm$11.36으로 급속동결 방법인 28.83$\pm$10.35보다 더 좋은 성적을 나타내었다(p<0.05). 고 활력정자를 나타내는 HYP 역시 급속동결 방법에서 2.77$\pm$2.71%로 완만동결 방법의 1.33$\pm$1.57%보다 유의적으로 높게 나타났다(p<0.05). 그러나 정자의 운동양태를 나타내는 MAD, WOB, DNC, DNM에 있어서는 완만동결 방법이 급속동결 방법에 비해 조금 더 좋은 성적을 보였으나 유의적인 차이는 없었다. 동결-응해 후 정자의 생존율 및 정상형태의 정자는 완만동결 방법이 각각 62$\pm$2.1%, 44$\pm$8.3%, 급속동결 방법은 60$\pm$2.2%, 46$\pm$7.7%로 유의적인 차이가 없이 비슷한 결과를 보였다. 따라서 사람 정액의 동결 보존 시 많은 시간과 고가의 장비가 필요한 완만동결 방법보다는 짧을시간동안 액체 질소만으로 간단히 시행할 수 있는 급속동결 방법이 더 효과적이라고 사료된다.
본 연구는 백한우 개체 1두에서 성판별된 정자를 제조하고 원하는 성을 가진 후대를 생산하고자 인공수정을 실시하였다. 채정이 가능한 백한우 종모우 1두를 선발하고, 정자 성 분리 전용 유세포 분리기인 MoFlo XDP기기로 성분리 동결정액을 생산하였다. 성분리 X 정자의 농도에 따른 임신율과 출산율을 비교하기 위하여 대조군으로서 KPN 768정액을 이용하였으며 그 총 정자수는 $20{\times}10^6$로 추정되었다. 실험군으로서 성 판별된 백한우 X 정자를 이용하였으며, 정자수 $2{\times}10^6/straw$와 $4{\times}10^6/straw$를 처녀우 한우에 2회 인공수정하였다. 백한우의 정액 기형도는 $24.9{\pm}7.31%$로 관찰되었으며, 중편부 반전 정자기형이 약간 높은 정자로 검사되었다(11.7%). 성판별된 백한우 X-정자수가 $2{\times}10^6/straw$와 $4{\times}10^6/straw$를 인공 수정할 때 실험군에서 임신율의 차이는 없었으며, 보증씨수소 정자를 이용한 대조군의 경우, 임신율이 유의적으로 높게 나타났다(p<0.05). 대조군 KPN 768와 실험군 $2{\times}10^6/straw$ 정자와 $4{\times}10^6/straw$ 정자 처리군에서 임신율은 각각 85.0%, 26.3% 및 50 %로 관찰되었다. 산자 생산율은 각각 80.0%, 15.8% 및 21.4% 로 관찰되었고, 암컷 출현율은 각각 43.8%, 100% 및 100%로 조사되었다. 이러한 결과는 백한우 성 판별된 정자로 원하는 성을 가진 후대 생산이 가능함을 보여주고 있으며, 성 판별된 정자를 활용하여 원하는 성을 가진 백한우 후대를 생산하는데 최적화된 정자수의 대한 기본 자료를 제공할 수 있을 것으로 기대된다.
Objectives: Recently, recombinant FSH (rFSH) has been manufactured using a Chinese hamster ovary cell line transfected with the gene encoding human FSH. Both rFSH and urinary gonadotropin (uFSH) could be used for controlled ovarian hyperstimulation (COH). However, uFSH implies a number of disadvantages, such as batch-to-batch inconsistency, no absolute source control, dependence on large amounts of urine, low specific activity, and low purity. The purpose of this study was to evaluate the efficacy of rFSH in human IVF-ET program. Materials and Methods: A total of 508 infertile women was enrolled in this study. They are classified into rFSH group (n=177) or uFSH group (n=331), and all of them were matched by age and cause of infertility in same period. The $Puregon^{(R)}$ (Organon, Holland) was used as rFSH, and the Metrodin-$HP^{(R)}$ (Serono, Switzeland) and $Humegon^{(R)}$ (Organon, Holland) was used as uFSH. We subdivided the patients into three age groups. The outcomes of IVF-ET program were analyzed using the statistical package for social sciences (SPSS). Results: There was no significant differences in the level of estradiol on hCG injection day, the numbers of retrieved oocytes, matured oocytes, fertilized oocytes, transferred embryos, frozen embryos between the two groups. The total dose (IU) of gonadotropin for COH was significantly lower in the rFSH group compared to uFSH group ($1339{\pm}5491.1$ vs $2527.8{\pm}1075.2$ IU, p<0.001). Clinical pregnancy rate per embryo transfer in the rFSH group showed increasing tendency, compared to the uFSH group, but there was no statistical significance (35.2% vs 29.3%). Our results demonstrated that the relative efficiency of rFSH compared with uFSH is higher in older patients. Conclusions: The ovarian stimulatory effect and clinical outcome of recombinant FSH was similar to that of the urinary gonadotropin. The IVF-ET cycles with significantly lower dose of gonadotropin in rFSH group showed comparable results. Therefore, we suggest that recombinant FSH is more potent and effective than urinary gonadotropin.
Seventy four Holstein heifers were randomly assigned over three trials to PRID-7+PG-6 and Synchromate B-9 regimens to synchronize estrus cycle for embryo transfer. Sexual behaviors; moounting, standing, orientation, chin-resting, sniffing, licking, rubbing and butting, vaginal swelling and mucus discharge were observed between 06-08, 12-14 and 18-20 h on 1st day and 00-02, 06-08, 12-14 and 18-20 h on 2nd day after removal of hormones. Synchromate-B treatment (81.6%) showed higher synchronized estrus rate than PRID treatment (77.8%) during observation period. Standing estrus was observed within 74 h after PG injection in PRID and within 52 h after removal of implant in Synchromate-B. About 68% of heifers in PRID and 74% of heifers in Synchromate-B showed standing estrus between 0-14 h on 2nd day after removal of the hormones. Synchromate-B resulted in a tighter synchrony of standing estrus than PRID. Incidence of average mounting and standing per head during observation period was 22.3 and 16.6 in PRID and 28.1 and 13.6 in Synchromate-B. The PRID showed peak in active mounting at 18-20 h on 1st day, however, the Synchromate-B showed at 0-2 h on 2nd day after removal of hormone. Active standing was shown between 18 h on 1st day to 20h on 2nd day in PRID, however, between 0-14 h on 2nd day after removal of hormone is Synchromate-B. There was slight difference in pattern of active mounting and standing during estrus between PRID and Synchromate-B. Conception rate of synchronized heifers transferred with fresh and frozen embryos by non-surgical and surgical methods was higher in synchromate-B (62.5%) than in PRID (38.5%). Chin-resting showed highest incidence among 6 sexual behavioral components in the both treatments. Synchromate-B showed higher incidence of chin-resting (16.6) than PRID (10.7). Synchromate-B group showed also higher incidence of orientation, sniffing and butting than PRID group. Synchromate-B resulted in more active sexual behaviors than PRID. The pattern of incidence of chin-resting, licking and butting was almost symmetrical in PRID with their peak values at 6-8 h on 2nd day, however in Synchromate-B chin-resting and sniffing was symmetrical with their peak values at 12-14 h on 2nd day after removal of hormone. There was tendency to increase vaginal swelling according to time passage of synchronized estrus in the both treatments. Incidence of mucus discharge in Synchromate-B was slightly higher than in PRID. Twenty to 40% was false negative in conception rate by tall painting before re-estrus day as judged by rectal palpation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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