Microtubule-associated protein 1B (MAP1B), a member of MAP1 family, plays a key role in neuronal development. MAP1B binds to many kinds of proteins directly or indirectly. This study was performed to investigate whether MAP1B interacts with GAPDH in bovine follicles using immunoprecipitation (IP) with Western blot analysis and immunohistochemisty. The mRNA expressions of MAP1B and glyceraldehydes 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) were down-regulated in bovine follicular cystic follicles (FCF). In parallel with the mRNA levels, their protein levels were also down-regulated in FCFs. In addition, MAP1B and GAPDH were co-localized at the cytoplasm of follicles. IP with Western blot analysis showed that MAP1B bound to GAPDH in normal follicles, but their binding was absent in FCFs, suggesting a low level of MAP1B and/or GAPDH expressions in FCFs. Taken together, these results suggest that MAP1B interacted with GAPDH may play a role in bovine follicle development, and that GAPDH does not function always as a loading control in bovine follicles.
The objective of the present study was to characterize the cell cycles of granulosa cell populations during follicular maturation in cattle by using flow cytometer. Granulosa cells were isolated from bovine preovulatory antral follicles of F1(>10mm), F2(5~20mm), F3(3~4mm) and F4(1~2mm) diameter and fixed and stained with fluorochromes that selectively bine to DNA. Flow cytometer equipped with a laser excitation system was used to analyze the intensity of fluorescence from stained cells. Forward angle light-scatter(FSC) and 90$^{\circ}$light-scatter(SSC) signals were adopted to measure the size and the granularity of granulosa cells. As a results of FSC/SSC analysis, granulosa cell populations(G1 phase of cell cycle) from each follicle were relatively regular in size and granularity, regardless of follicular size. However, their distribution in granularity was greater than that in size. Most of granulosa cell populations collected from each follicle were distributed in G0/G1, S and G2/M phases. As the follicles approached to ovulation the percentage of cells in the proliferative phases of cell cycle (S and G2/M) decreased significantly, but there was a concomitant increase in the percentage of granulosa cells in G1 phase. Therefore, these data indicate the proportion of main populations to cell cycle of granulosa cells may be changed from proliferative phase to G1 phase during follicular maturation in cattle.
A observation of the ovarian development and oogenesis of Pieris rapae Linne has been carried out during metamorphosis using stereo-microscope, light microscope and electron microscope. The results obtained through this experiment are as follows: 1. The ovarian development and vitellogenesis begin at the 3-day old pupa and the 6-day old pupa respectively, and the adult ovary right after their emergence contains a few mature eggs. 2. The species described above are further observed at six different stages in oogenesis, and the results are summarized as follows. 1) Pieris rapae has polytrophic ovarioles. The cell organelles of the nurse cells are transfered to the oocyte through the ring canal at the early oogenesis. 2) At stage 2, the nuclear envelope of oocyte nucleus is less infolding than that of nurse cell nucleus. In the oocyte cytoplasm a large number of ribosomes are observed. 3) At stage 3 and 4, many micropinocytotic vesicles are observed in the oocyte cytoplasm. These vesicles are fused together to form large proteid yolks. 4) At stage 5, the vitelline membrane is laid down in the intercellular space between the follicle cells and oocyte. 5) At stage 6, the chorion is formed by the follicle cells. 6) A micropyle and a number of aeropyle are observed on the surface of a mature egg.
Kim, Tae Keun;Kim, Yong Joo;Min, Byoung Hoon;Kim, Soo Jin
Applied Microscopy
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v.44
no.1
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pp.15-20
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2014
Cytokeratin 19 (CK19) expressed in epidermis of skin, bulge region of hair follicle, outermost layer of outer root sheath and proximal and distal to bulge. Vimentin is a fibrous protein that localized in cytoplasm of fibroblast and forms cytoskeleton to maintain shape of cell and nucleus. In this study, CK19 and vimentin in skin were confirmed with light, fluorescence and transmission electron microscope. As a result, CK19 was localized epidermis, hair follicles, outer root sheath and nucleus of Merkel's cell. However, vimentin was localized some epidermis, dermis, hypodermis and nucleus of Merkel's cell. The role of CK19 is self-renewal and homeostasis in skin. Also, hair follicle regeneration and hair growth is known to be related. It is supposed that required of structural proteins that make up cytoskeleton is increased. Thereby, expression of CK19 is increased. It is considered that vimentin localized in order to stabilize structure of cell and cytoskeleton of fibroblasts. Also, CK19 and vimentin present in nuclei of Merkel's cell, and to act as a fibrous protein that make up end of a nerve fiber present in Merkel's cell and paracrine function of Merkel's cell.
Follicular cystic follicles (FCFs) show delayed regression with persistent follicle growth. However, the mechanism by which follicles are persistently grown remains unclear. Glutathione S-transferases (GSTs) are drug-metabolizing and detoxification enzymes that are involved in the intracellular transport and metabolism of steroid hormones. In this study, a proteomic analysis was performed to identify whether GST expression is changed in bovine FCFs and to predict the interactions between GST and other proteins. Normal follicles and FCFs were classified based on their sizes (5 to 10 mm and 25 mm). In bovine follicles, GST mu 1 (GSTM1) was detected as a differentially expressed protein (DEP) and significantly up-regulated in FCFs compared to normal follicles (p<0.05). Consistent with the proteomic results, semi-quantitative PCR data and western blot analysis revealed an up-regulation of GSTM1 in FCFs. Expression levels of aromatase and dehydrogenase proteins were changed in FCFs. These results show that the up-regulation of GSTM1 that is observed in bovine FCFs is likely to be responsible for the persistent follicle growth in FCFs as the activity of aromatase and the dehydrogenases.
This experiment has been done to evaluate the relationship between the follicular atresia and the protein patterns on electrophoreais of the follicular fluids in porcine ovary. The protein concentration of the follicular fluids was lower than that of serum, and gradually decreased as the follicle siae became larger. The number of protein bands of follicular fluid on electrophoresis was less than that of serum, and gradually increased as follicle size became larger. Three specific bands were detected on disc PAGE and one band(M W. 75,000) on SDS PAGE in the follicular fluids, while not in serum. One band (A) at ${\beta}$-globulin region on disc PAGE became heavier, as follicles became atretic. Two bands less than(M. W. 20,000) were detected only in the large follicular fluid. Another band(M. W. 43,000) was not detected in necrotic group, whereas all other groups showed it. It could be concluded that the component and composition of the proteins follicular fluids changes according to the follicular size during atresia. Therefore detection of the changing pattern of proteins in the follicular fluid can be used as a basic criterion for the identification of follicular atretic stage.
LEE Jeong Yong;KIM Wan Ki;LEE Chae Sung;CHANG Young Jin
Korean Journal of Fisheries and Aquatic Sciences
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v.37
no.4
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pp.281-286
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2004
Spermatogenesis and sperm ultrastructure of the marsh clam (Corbicula japonica) were investigated by electron microscopic observations. Testis of the marsh clam consists of numerous spermatogenic follicle containing germ cells in the different developmental stages. Spermatogonia are located nearest the outer wall of the follicle, while spermtocytes and spermatids are positioned nearer to the lumen. Spematogonia are oval-shaped and about $5{\mu}m$ In diameter. Spermatogonia develop into spermatocyte, spermatid and spermatozoon. In the spermatid to about $2{\mu}m$ in diameter, cytoplasm decreases and mitochondria move to the base of the nucleus and fuse into several spheres, the centrioles become orthogonally oriented, a flagellum appears, and an acrosomal vesicle forms. The mature sperm has primitive type, consisting of a head, a midpiece and a tail. The sperm was arrow-shaped, and its head is about $8{\mu}m$ long and comprised of a long nucleus and an acrosome. The four mitochondria encircled the centrosome in midpiece. The flagellum had the classical 9+2 axoneme structure, and axonemal lateral fins in the tail were observed.
Radioiodine labelled human follicle stimulating hormone has been prepared using chloramine-T, with the approximate labelling yield of 65%. The labelled product is purified by means of a starch gel electrophoresis, and a Sephadex gel filtration, and the separation efficiencies are assessed for the effective use in radioimmunoassay. The results indicate that the gel filtration is efficient in view of the separation time, simplicity and bindability of the labelled hormone to the antibody. In determining the ratio of the free to the antibody hound labelled hormone, a double antibody technique is applied in comparison with a chromatoelectrophoresis. The ratio could be obtained only in the case of applying the double antibody technique.
Full-thickness scalp burns secondary to hair coloring are rare; however, such defects can be large and complex reconstruction of hair-bearing tissue may be necessary. Many skin-stretching devices that use gradual traction have been applied to take advantage of the viscoelastic properties of the skin. A 21-year-old female patient was seen with a burn defect on her occipital scalp leading to exposed subcutaneous tissue after chemical application of hair coloring in a salon. The dimensions of the wound were $10cm{\times}5cm$, and a skin graft or flap would have been necessary to close the defect. Two long transfixing K-wires (1.4 mm) and paired 3-wire threads (23 gauge), which are readily available in most hospitals, were applied over a period of 12 days for trichophytic closure of the defect. The remaining scalp scars after primary trichophytic closure with this skin-stretching method were refined with hair follicle transplantation. This skin-stretching method is simple to apply and valuable for helping to close problematic areas of skin shortage that would otherwise require more complicated procedures. This case shows a relatively unknown complication of hair coloring and its treatment.
Magamage, Manjula Priyantha Sumith;Sathagopam, Sriravali;Avula, Kiran;Madushanka, Di Neththi Nimesh;Velmurugan, Sathya
Journal of Animal Reproduction and Biotechnology
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v.36
no.1
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pp.51-58
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2021
Kisspeptin, a neuropeptide and the master controller of reproductive axis upstream to GnRH neurons, and its receptor are also expressed in extra-hypothalamic tissues, such as ovaries. As systemic kisspeptin has been shown to modulate follicular dynamics in cattle, we hypothesized that kisspeptin has direct actions on the ovarian follicular development. We also hypothesized that kisspeptin regulation of primordial follicle development is via modulation of VEGF expression. In order to test these hypotheses, we cultured caprine ovarian cortical strips in vitro for 7 days with supplementation of kisspeptin at 1, 10 and 100 µM concentration and observed the development of primordial follicles into intermediate, primary and secondary follicles. We also studied the alteration in the expression profile of VEGF and VEGF transcript variant 2 mRNA during follicular development in the presence of kisspeptin. We confirmed the presence of GPR54 in goat ovaries in our preliminary studies. Supplementation of kisspeptin at 1 and 10 µM concentration facilitated the development of primordial follicles into intermediate, primary and secondary follicles with less number of degenerated follicles while the same at 100 µM resulted in degeneration of follicles. We observed a drastic increase in the expression profile of VEGF and VEGF transcript variant 2 mRNA upon culture which was independent of kisspeptin treatment. In conclusion, our studies show that kisspeptin facilitates ovarian primordial development in vitro.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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