세포막에서의 지방산 이동은 매우 빠르게 일어나므로 방사성 원소를 사용해서는 여러가지 단점이 있고, 정확한 이동속도 측정에도 어려움이 많았다 최근에 개발된 FRET assay는 형광성 물질과 형광성 물질을 상쇄시키는 quencher를 사용한 실험방법 이다. 이는 공명 에너지 이동의 원리를 이용한 것으로 형광광도계, stopped-flow장치를 사용하여 소수성 물질 이동을 직접 컴퓨터 모니터로 측정하는 방법으로 기존방법의 단점을 보완하였다. Donor막에는 형광성 표지를 붙인 지방산이 들어 있고 acceptor막에는 형광을 흡수하는 물질이 들어 있어서 형광성 지방산이 donor에서 acceptor로 이동하면 형광도가 감소하며, 시간에 따른 형광도 감소를 측정하여 지방산 이동속도를 측정하는 방법이다. 형광성 표지를 이용하여 소수성 물질 이동에 사용되는 또 다른 방법은 self-Quenching assay이다. 형광 물질의 농도가 높아지면 서로 형광을 흡수하는 성질을 이용한 방법으로 주로 micelle에서의 물질 이동에 많이 쓰인다. Donor micelle에는 높은 농도의 형광성 지방산이 들어 있고 acceptor micelle에는 형광성 지방산이 들어 있지 않을 때 형광성 지방산이 donor에서 acceptor로 이동하면 형광도가 증가하게 되고 시간에 따른 형광도 증가를 측정하는 방법이다.
These experiments were carried out to develop a novel, simple, and rapid method to determine urinary sulfonamides using fluorescamine by spectrofluorometry. To get optimal conditions for the sulfonamide-fluorescamine reaction, sulfonamides such as sulfamethazine, sulfamerazine, sulfadimethoxine and sulfamonomethoxine, dissolved in buffers with various pH ranges were reacted with various concentrations of fluorescamine. and then, the fluorescence intensity and stability of the fluorophore were measured. To eliminate the interfering substances in urine, the fluorophore in buffers and urine with a definite pH range was extracted with some organic solvents. After then the fluorescence intensity was measured in organic and aquous phases. The results obtained were summarized as follows: 1. The maximal fluorescence of sulfonamides was presented in acidic state, pH 4.5~5.0, at 30 minutes after reaction. 2. The optimal concentration ratio of sulfamethazine and ffuorescamine was more than 1 : 40 in mole. 3. In pH 4.0, the intensity was maximal but was time-dependent, whereas in pH 8.0, the intensity was time-independent. 4. Sulfamethazine-fluorescamine conjugate could be dissolved in some of organic solvents in acidic state such as chloroform, n-butanol, and ethylacetate. 5. Sulfamethazine-flnorescamine conjugate in swine urine coule be extracted with ethylacetate in acidic state, pH 4.0~5.0.
본 실험은 N-Carbamoylglycine의 농도 결정에 PET sensor를 응용한 것이다.N-Carbamoylglycine이 금속 이온에 리간드로 작용하면서 착물을 만들고 있는 fluorophore의 luminescence intensity를 변화시킬수 있고 이를 통해 농도결정에 이용할 수 있다. 사용한 금속이 온은 $Ni^{2+}$, $Cu^{2+}$ 그리고 $Zn^{2+}$이며 비교대상으로 아세트산을 사용하여 선택성을 확인하였다. $Ni^{2+}$ 이온은 음이온 리간드에 의해서 eT mechanism 변화를 보여주었으며 , $Cu^{2+}$이온은 아세트산과 N-Carbamoylglycine을 구별하는 선택성을 가지고 있으며, $Zn^{2+}$이온은 매우 예민한 luminscence intensity 변화를 일으키는 것으로 나타났다.
Rhodamine chromophore/fluorophore have been attracted to many researchers due to its excellent photophysical properties. In this study, we have designed and synthesized a strong emissive fluorescent dye chemosensor for toxic elements. A rhodamine-based sensor was prepared by incorporation the rhodamine fluorophore and several functional host groups with high affinity to hazardous metal and anion. This sensor shows a high selectivity and an excellent sensitivity and is a dual-responsive colorimetric and fluorescent metal/anion-specific sensor. In addition, the 1:1 binding mode was proposed based on Job's plot method. Finally, computational calculation was simulated and calculated to approach for HOMO/LUMO of this dye chemosensor.
Kim, Min-Kwan;Park, Chung-Hyun;Park, YongKeun;Cho, Yong-Hoon
한국진공학회:학술대회논문집
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한국진공학회 2014년도 제46회 동계 정기학술대회 초록집
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pp.403.1-403.1
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2014
In conventional far-field microscopy, two objects separated closer than approximately half of an emission wavelength cannot be resolved, because of the fundamental limitation known as Abbe's diffraction limit. During the last decade, several super-resolution methods have been developed to overcome the diffraction limit in optical imaging. Among them, super-resolution optical fluctuation imaging (SOFI) developed by Dertinger et al [1], employs the statistical analysis of temporal fluorescence fluctuations induced by blinking phenomena in fluorophores. SOFI is a simple and versatile method for super-resolution imaging. However, due to the uncontrollable blinking of fluorophores, there are some limitations to using SOFI for several applications, including the limitations of available blinking fluorophores for SOFI, a requirement of using a high-speed camera, and a low signal-to-noise ratio. To solve these limitations, we present a new approach combining SOFI with speckle pattern illumination to create illumination-induced optical fluctuation instead of blinking fluctuation of fluorophore.. This technique effectively overcome the limitations of the conventional SOFI since illumination-induced optical fluctuation is possible to control unlike blinking phenomena of fluorophore. And we present the sub-diffraction resolution image using SOFI with speckle illumination.
The physicochmical properties of recombinant hepatitis B surface antigen (r-HBsAg), which was expressed in C127 mammalian cell were studied. Using roller bottle culture in DMEM supplemented with fetal bovine serum, 10-15 mg/L of r-HBsAg was produced with about 31% of purification yield. The purity of r-HBsAg by HPLC was 99.8% and electron microscopic examination showed homogeneous spherical particle with 22 nm in diameter, a morphological characteristic of HBsAg. The density of r-HBsAg by CsCI density gradient method was 1.19g/ml and the isoelectric point by Mono $P^{TM}$ HR 5/20 column was 4.6. The analysis of subunit protein pattern using SDS-PAGE followed by scanning densitometry gave 81.3% of S protein and 18.7% of pre-S protein. fluorophore-assisted-carbohydrate-electrophoresis analysis showed the relative amount of carbohydrate to protein was 1.7% and it smajr component was N-acetyl glucosamine, which was about 39% of total carbohydrate. The relative amount of lipid to protein determined by vanillin phosphoric acid method was 32.5% and its major component was phospholipid, which was about 70% of total lipid. The physicochemical properties of C127 mammalian cell-derved r-HBsAg are similar to those of p-HBsAg, suggesting that the r-HBsAg can be used in developing a new preventive vaccine against hepatitis B.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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