Among 24 isolates of fluorescent Pseudomonads, 5 isolates named as LPT1, LPT2, LPT3, LPT4 and LPT5 were screened in vitro for their nematicidal activity against cyst forming nematode, Heterodera cajani causing patchiness, poor and stunting growth besides discoloration in Sesamum indicum. Second stage juveniles of H. cajani hatched from egg masses were collected from roots of host plant and subjected to fresh and heat-treated culture filtrate of isolates for 24 h. Mortality of H. cajani was recorded on the basis of parameters used for test organism bioassay. Among these isolates, Pseudomonas aeruginosa LPT5 caused maximum mortality towards second stage juvenile of H. cajani in vitro. Five isolates were used as seed coating for the management of cyst forming nematode H. cajani on sesame in green house condition. The strains LPT5 was better than the other strains in reducing the population of H. cajani both in vitro and in vivo. The reduction in cyst and juveniles population was found to be 49 and 60%, respectively when seeds were coated with strain LPT5. Among other strains, LPT4 was also found to inhibit the cyst and juveniles population 12 and 36% respectively. Increases in early vegetative plant growth parameters recorded in both in vitro and in vivo further revealed the significance of indigenous bacteria in comparison to introduced strain.
Various bacteria were isolated from the casing layer soil of the culture bed of P. ostreatus and their role in fruiting body induction of the edible mushroom, P. ostreatus, was investigated. Analysis of the bacterial community isolated from the casing layer soil revealed that the composition of genera and number of cultivable bacteria were different for each sterilizing treatment. Bordetella was predominant in the bulk soil whereas Flavobacterium was predominant after sterilization of the casing layer soil. Fluorescent Pseudomonas was predominant in the non-sterilized casing layer soil. Total number of the bacterial genera in the casing layer soil was higher than that in the bulk soil. In particular, an increase in the fluorescent Pseudomonas population was observed in the non-sterilized casing layer accompanied by induction of fruiting body and enhanced mushroom production yield. The results suggested that specific bacterial populations in the casing layer play an important role in the formation of primodia and the development of basidiome in P. ostreatus.
고추 시설 재배지 토양, 근권과 근면등으로부터 형광성 pseudomonads를 분리한 후 이들 중 35균주에 대해 계통 분석을 실시하였다. 계통 분석에 이용된 분류키는 165 rDNA의 일부 염기서열로, 종 수준에서 분류동정을 실시하였다. 고추재배지로부터 분리된 형광성 pseudomonads중 P. putida group으로 분류된 균주는 17균주 였으며, 이들은 주로 비근권 토양으로부터 분리되었다. 이들은 4개의 소그룹 (subgroup I, II, III, IV)으로 분류되었으며, 소그룹 I, IV에 속한 균주는 P putida의 표준균주가 속한 소그룹 II, III의 균주와는 분류학적으로 뚜렸히 구분되는 독특한 균주들이었다. P. fluorescens로 분류된 균주는 15균주였으며, 나머지 3균주는 P. fluorescens와 P. chloraphis의 중간 그룹으로 분류되었다. 근권으로부터 분리된 균주는 대부분 P. fluorescns로 분류되었으며, 이들의 유전적 유연관계는 매우 높게 나타났다. 본보의 결과에 비추어 볼 때, 고추의 근계는 P. fluorescens의 특정 균주에 의해 정착되는 것으로 생각되었다.
A new 4.87 kb Escherichia-Pseudomonas shuttle vector has been constructed by inserting a 1.27 kb DNA fragment with a replication origin of a Pseudomonas plasmid pRO1614 into the 3.6 kb E. coli plasmid pBGS18. This vector, designated pJH1, contains an aminogly-coside phosphotransferase gene (aph) from Tn903, a lacZ' gene for $\alpha$-complementation and a versatile multiple cloning site possessing unique restriction sites for EcoRI, SacI, KpnI, SmaI, BamHI, XbaI, SalI, BspMI, PstI, SphI, and HindIII. When pJH1 was transformed into E. coli DHS${\alpha}$ and into P. putida HK-6, it was episomally and stably maintained in both strains. In addition, the enhanced green fluorescent protein (EGFP) gene which was transcriptionally cloned into pJH1 rendered E. coli cells fluorescence when its transformants were illuminated at 488 nm.
A yellow-green, fluorescent siderophore A3 was extracellularly produced under iron-limited growth conditions from Pseudomonas synxantha A3. The physicochemical and biological properties of siderophore A3 were examined. The approxiamte molecular weights of the Fe(III)-siderophore A3-1 complex and Fe(III)-siderophore A3-2 complex were estimated to be about 1,300 and 1,100, respectively, by Bio-gel P2 gel exclusion chromatography. The molar ratio between the siderophore and the Fe(III)was 1.08 mole. The molecular weight of the complex could be calculated with this ratio and the new values were 1,150 and 960, respectively. The binding constant(K) between thesiderophore A3 and Fe(III) that determined by displacing the iron from the Fe(III)-siderophore complex with EDTA was 4.12*10$^{18}$ at pH 5.0. Siderophore A3 appeared to have antibacterial activity on several bacterial strains, however, ferric siderophore Ae complex did not show that activity. The cytotoxicity of siderophore A3 was obtained from Human Chronic Myelogenous Leudemia K562 cells. Inhibition concentration (50%)($IC_{50}$ ) was $0.17\mu$\{g/ml}.
A DNA fragment which is involved in tolassin production was cloned to obtain a molecular marker of Pseudomonas tolaasii, a casual agent of bacterial brown blotch disease of oyster mushroom (Pleurotus ostreatus). Tolaasin is a lipodepsipeptide toxin and known as a primary disease determinant of the P. tolaasii. It is responsible for formation of white line in agar when P. tolaasii were cultured against white line reacting organisms (WLROs). White line negative mutants (WL-) were generated by conjugation between rifampicin resistant strain of P. tolaasii and E. coli carrying suicidal plasmid pSUP2021 : : Tn5. The ability of tolaasin production of the WL- mutants was examined by hemolysis test, pathogenicity test, and high pressure liquid chromatography (HPLC) analysis of culture filtrate. All of the WL- mutants were lost the ability of tolaasin production (Tol-). Genomic library of the Tol- mutant was constructed in pLAFR3 and the cosmid clone containing Tn5 was selected. DNA fragment fro franking region of Tn5 was cloned from the plasmid and used as a probe in Southern blot. DNA-DNA hybridization with the probe to total DNA from group of bacteria ecologically similar to P. tolaasii including WLORs, fluorescent Pseudomonads isolated from oyster mushroom, P. agarici, P. gingeri, and some of other species of Psedomonas showed that some of the tested bacteria do not have any hybridized band and others have bands sowing RFLP. The cloned DNA fragment or its nucleotide sequence will be useful in detection and identification of the P. tolaasii.
Pseudomonas fluorescens Biovar III strains S-2 antagonistic to Rhizoctonia solani was subjected to Tn5 mutagenesis by the transposon vector pGS9. Ampicillin and kanamycin resistant (Ampr, Kmr) transconjugants were recovered at a frequency of 1.3$\times$10-7 per initial recipient cell, when recipient cells were washed twice in TE buffer before conjugation. Of the ca. 3000 transconjugants, a frequency of noninhibitory (Inh-), nonfluorescent (Flu-) and auxotorphic (Pro-) mutants were 0.27%, 0.47% and 0.40%, respectively. In these mutants, all Inh- mutants showed the same colony morphology as wild type, whereas all Flu- and Pro- mutants inhibited the growth of R. solani. These mutants were also susceptible to chloramphenicol, indicating only the Tn5 element, except for parts of pGS9, was integrated into the recipient genome. In a Southern blot analysis, the Tn5 element inserted into one site on the chromosome for each of the chosen mutants. However, Tn5 insertion sites of Inh-, and Pro- mutants were differed in each other. These indicate that the genes essential for R. solani inhibition, fluorescent production and auxotrophic are chromosomally located, but not linked to each other.
A RecA-like protein (RecAps) was identified from fluorescent Pseudomonas sp. and the inducible nature of the protein was characterized in detail. It was shown by dose-response and time-course experiments using two DNA damaging agents, nalidixic acid and mitomycin-C, that the cellular level of RecAps protein was increased 3-8 fold compared to that of the control. The most effective doses of nalidixic acid and mitomycin-C for the protein induction were $30{\mu}g/ml$ and $0.3{\mu}g/ml$ at the treatment time point of 150 min, respectively. The enhanced level of RecAps protein was gradually decreased to the control level after 10 hr in normal medium. Interestingly, the cellular level of RecAps protein was increased by the same DNA damaging agents even when cell growth was completely inhibited by treatment with $170{\mu}g/ml$ of chloramphenicol, an inhibitor of protein synthesis, suggesting that new protein synthesis is not required for the induction of RecAps. All these results suggest that a typical S0S repair function driven by RecA-like protein is conserved in Pseudomonas sp. cells as in E, coli.
Aspergillus을 이용하요 생리적 제성질을 조사하였던 바 다음과 같은 결론을 얻었다. 1) 각 균주들은 각각 그들의 특성을 가지고 있었으며 이로서 균동정의 가능성을 나타내었다. 2)Amilase측정결과에서 보면 비교적 역가가 높은 균주들이 관찰되었으며, 이는 일주문의 경과에 따라 역가가 증가하였으나 protease의 역가는 우수한 균주를 발견키가 어려웠다. 3)Iodine의 착색대와 비착색대의 비율에 의한 역가의 정성적인 측정이 가능하였다.
While screening for nematicidal activity of bacterial origins, various pseudomonads strains were inhabited in tomato rhizosphere. One isolate designated as $PE_{10}$ was selected for studies on nematicidal properties and plant growth-promoting (PGP) activity and was identified as Pseudomonas aeruginosa based on morphological features, biochemical and physiological tests, and carbohydrate utilization. To investigate nematicidal activity, Meloidogyne incognita juvenile mortality was determined using $PE_{10}$ culture filtrate. Inhibition of strain $PE_{10}$ against Fusarium oxysporum was observed using dual culture technique. Strain $PE_{10}$ showed good siderophore activity, HCN and IAA production abilities, and growth and development enhancement of tomato.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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