• 제목/요약/키워드: feedback inhibition resistance (FBR)

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Klebsiella pneumoniae에 있어서의 escherichia coli K-12 $trpL({\Delta}att)\;trpE^{FBR}$유전자의 클로닝 및 발현 (Cloning and expression of escherichia coli K-12 $trpL({\Delta}att)\;trpE^{FBR}$ gene in klebsiella pneumoniae)

  • 지연태;김익영;이세영
    • 미생물학회지
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    • 제22권4호
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    • pp.229-234
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    • 1984
  • A modified E. coli trp operon, $trpL({\Delta}att)\;trpE^{FBR}$, was conjugally transfered into Klebsiella pneumoniae $KC_{100}\;(Phe^-,\;Tyr^-,\;Trp^-,\;Rif^r,\;Kam^r)$ by in vivo cloning using the hybrid plasmid $R_{6}K::$ Mucts 61 with a transfer frequency of $5.2{\times}10^{-7}$. Two K. pneumoniae transconjugants, $KUA_{701}\;and\;KUA_{702}$, were isolated. The characters of attenuation control-free and resistance to feedback-inhibition which are characteristics of donor C. coli trp operon were normally expressed in the $KUA_{701}.\;However,\;KUA_{702}$ retained only the feedback-inhibition resistant character. $Trp^+$ phenotype and ampicillin resistant character were completely stable in the transconjugants, but streptomycin resistant character was lost in the transconjugants.

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E. coli 유래 pheA 유전자의 되먹임제어 저항성 돌연변이의 구축과 그 단백질의 생화학적 특성 연구 (Development of the feedback resistant pheAFBR from E. coli and studies on its biochemical characteristics)

  • 카오틴팟;이상현;홍광원;이성행
    • 미생물학회지
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    • 제52권3호
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    • pp.278-285
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    • 2016
  • E. coli의 PheA 단백질은 chorismate mutase and prephenate dehydratase (CMPD) 활성을 가지며 마지막 산물인 페닐알라닌에 의하여 되먹임제어가 되는 생합성 경로의 주요 조절 효소 중의 하나이다. 그러므로, 이 PheA 단백질은 필수 아미노산 중의 하나인 페닐알라닌의 대량 생산에 이용하기 위한 단백질 공학의 타겟이 될 수 있다. 이러한 목적으로 PheA 단백질의 마지막 생산물인 페닐알라닌에 의한 되먹임저해 저항성 유전자원을 선별하였다. 이 유전자의 산물인 $PheA^{FBR}$은 118번째 류신이 페닐알라닌으로 치환되었고, 기질인 prephenate에 대한 친화도가 야생주단백질과 비교하여 약 3.5배 정도 높았다. $PheA^{FBR}$은 세포내에서 축척되어져 되먹임저해를 하는 페닐알라닌 농도에서(약1 mM와 10 mM)에서도 50%와 40%의 활성을 유지 하고 있었고, 페닐알라닌 존재하에서 기질의 결합 성향이 협동적(cooperative) 모드에서 단독적(hyperbolic) 모드로 전환되었다. 이는 기존 연구와 비교해 볼 때, 이 돌연변이 부위는 이 융합기능 효소인 PheA 단백질의 새로운 조절 부위의 존재를 암시 한다. 효소 동력학적 결과는 PheA 단백질의 되먹임저해 저항성 획득이 아미노산 돌연변이에 의한 단백질 구조의 변화 유도에 의한 것으로 생각된다. 더 나아가, 본 연구에서 선별된 돌연변이 유전자는 생물전환법을 이용한 필수아미노산 생산에 산업적으로 응용 가능성이 있다.