This study was conducted to investigate the effect of 1-MCP, an ethylene action inhibitor, and several postharvest treatments including ethylene scrubbing on fruit quality and respiration for keeping marketability in 'Janhowon Hwangdo' peach ($Prunus$$persica$ Batsch). 1-MCP at the rate of $1.0{\mu}L{\cdot}L^{-1}$ showed best results in maintenance of fruit firmness and external appearance such as skin color. The ethylene production was strongly reduced by 1-MCP treatment at 0.5 or $1.0{\mu}L{\cdot}L^{-1}$ but respiration rate was only suppressed at $1.0{\mu}L{\cdot}L^{-1}$ during 6 days of shelf life at $20^{\circ}C$. Mature fruits (harvested 1 week before full commercial maturity) were much highly responsive to $1.0{\mu}L{\cdot}L^{-1}$ of 1-MCP compared to those of commercial maturity. At the concentration of $0.5{\mu}L{\cdot}L^{-1}$ of 1-MCP did not affect fruit marketability compared to untreated control. Beneficial effects of carbon ceramic as an ethylene scrubber were also found such as delay of firmness loss and deterioration of external appearance at $10^{\circ}C$, but these positive effects on fruit quality remained for only 5 days. The application of ethylene scrubber on the shipping carton boxes was effective on keeping firmness of immature fruit pretreated with 1-MCP when compared with mature fruit.
Acetolactate Synthase (ALS) was partially purified from the yeast and its basic biochemical studies were carried out. Yeast was grown in the minimum media containing 0.5% glucose, 51 mM $K_2HPO_4$, 22 mM $KH_2PO_4$, 8 mM $(NH_4)2SO_4,\;0.4\;m M\;MgSO_4$ for 18 hours at 37 $^{\circ}C$. The cell was ruptured in the buffer (20 mM phosphate buffer pH 7.0, 0.1 mM TPP, 0.5 mM DTT, 1 ${\mu}M$ FAD, and 1 mM MgCl_2$) following an overnight suspension. The supernatant fraction was collected from $10,000{\times}g$ and the enzyme was further purified by ammonium sulfate fractionation, DEAE-Sephacel chromatography and leucine-agarose chromatography. The enzyme activity was measured under the various conditions by the function of protein concentration, time, temperature, pH, and substrate. The optimum temperature was found to be 50$^{\circ}C$, optimum pH 8.0∼8.5. The kinetic parameters, $K_m\;and\;V_{max}$ were 8.4 mM and 17.9 nmol/mg/min respectively. Stability of the enzyme was studied with ethylene glycol and glycerol added to the enzyme solution. Both ethylene glycol and glycerol improved the enzyme stability up to 50%. The study of feedback inhibition showed that valine was a strong inhibitor while leucine was a weak inhibitor.
In this study, phase equilibria and formation behaviors of methane hydrate containing mono-ethylene glycol (MEG) and salts (sodium chloride, NaCl; sodium bromide, NaBr; sodium iodide, NaI) are investigated. Equilibrium conditions of methane hydrate containing MEG and salts are measured in a temperature range 272~283 K and a pressure range 3.5~11 MPa. Hydrate inhibition performance in the presence of additives can be summarized as follows: methane hydrate containing (5 wt% NaCl + 10 wt% MEG) > (5 wt% NaBr + 10 wt% MEG) > (5 wt% NaI + 10 wt% MEG). Formation behaviors of methane hydrate with MEG and salts are investigated for analyzing the induction time, gas consumption amount and growth rate of methane hydrates. There are no significant changes in the induction time during methane hydrate formation, but the addition of MEG and salts solution during hydrate formation can affect the gas consumption amount and growth rate.
This study was conducted to investigate the effect of 1-methylcyclopropene (1-MCP), a known ethylene action inhibitor, on fruit quality and incidence of physiological disorders during a simulated marketing period in new mid-season Asian pear (Pyrus pyrifolia Nakai) 'Changjo'. Flesh firmness of untreated control fruits was maintained with a hardness of 20.2 N until day 14 of simulated marketing but decreased rapidly to 6.2 N at day 21 of simulated marketing; losing its commercial quality. However, the firmness of 1-MCP treated fruits remained high (> 20.7 N) during the same period. Quality indices such as soluble solids content and titratable acidity in 'Changjo' pear did not show any significant differences during simulated marketing period regardless of 1-MCP treatment. For the difference in skin color, redness ($a^*$) tended to increase as simulated marketing period became longer, and 1-MCP treatment delayed this change by 7 days compared to the untreated fruits. No decrease occurred in ethylene production level with 1-MCP treatment in 'Changjo' pear. Meanwhile, 1-MCP treated pears showed a significantly lower respiration rate compared to the untreated fruits. Also, 1-MCP treatment effectively reduced the incidence of physiological disorders including internal flesh browning and mealiness symptoms during simulated marketing periods of 21 and 14 days, respectively. Therefore, we conclude that the use of 1-MCP is recommended for quality maintenance and for prevention of physiological disorders during simulated marketing periods of ${\geq}7days$ for mid-season Asian pear 'Changjo'.
A series of 5-oxaproline peptide derivatives was synthesized and evaluated for its ability to inhibit the prolyl 4-hydroxylase in vitro. Structure-activity studies show that the 5-oxaproline sequences, prepared by the 1,3-dipolar cycloaddition of the C-methoxycarbonyl-N-mannosyl nitrone in the presence of the ethylene, are more active than the corresponding proline derivatives. Prolyl 4-hydroxylase belongs to a family of $Fe^{2+}-dependent$ dioxygenase, which catalyzes the formation of 4-hydroxyproline in collagens by the hydroxylation of proline residues in -Gly-Xaa-Pro-Gly- of procollagen chains. In this paper we discover the more selective N-Cbz-Gly-Phe-Pro-Gly-OEt $(K_m\;=\;520\;{\mu}M)$ sequences which are showed stronger binding than others in vitro. Therefore, we set out to investigate constrained tetrapeptide that was designed to mimic the proline structure of pep tides for the development of prolyl 4-hydroxylase inhibitor. From this result, we found that the most potent inhibitor is N-Dansyl-Gly-Phe-5-oxaPro-Gly-OEt $(K_i\;=\;1.6\;{\mu}M)$. This has prompted attempts to develop drugs which inhibit collagen synthesis. Prolyl 4-hydroxylase would seem a particularly suitable target for antifibrotic therapy.
Bacillus sp. strain K-l, which produces a strong fibrinolytic enzyme, was isolated from chongkukjang, a traditional Korean fermented soybean paste. The fibrinolytic enzyme was purified from chongkukjang base by using ammonium sulfate fractionation and chromatographic techniques. Purified enzyme, CK K-1 was demonstrated to be homogeneous by SDS-PAGE and isoelectric focusing electrophoresis, and has molecular mass of a 12.4 kDa and a pI of 8.0. The optimal reaction pH value and temperature were 8.0 and $40^{\circ}C$, respectively. Phenyl-methyl-sulfonyl-fluoride (PMSF; serine protease inhibitor), ethylene-diamine-tetra-acetic acid (EDTA; metallo protease inhibitor), copper ion, ferric ion and lead ion inhibited the enzyme activity. These results indicated that the fibrinolytic enzyme is a metallo-serine protease and different from nattokinase and chongkukjangkinase.
The effect of methylglyoxal-bis (guanylhydrazone) (MGBG) and ethylene synthesis inhibitors on adventitious root formation from soybean cotyledon in relation to ethylene production and endogenous polyamine content was investigated. Cotyledon explants cultured on rooting medium formed numerous adventitious rook on the cut surfaces after 2 weeks of culture. However when cultured on rooting medium supplemented with MGBG, the root formation was strongly inhibited, its inhibitory effect was reserved when cultured on medium with MGBG + spermine, MGBG + CoCl$_2$ and MGBG + spermine+CoC1$_2$. A slight reversion of the rooting inhibition was observed in 10$^{-3}$ M MGBG +10$^{-5}$ M spermine treatment, whereas it caused a significant effect in 10$^{-3}$ M MGBG +10$^{-4}$ M treatment .Ethylene production and endogenous polymine content was investgated in 10$^{-3}$ M MGBG , 10$^{-3}$ M MGBG +10$^{-5}$ Mspermine, 10$^{-3}$ M MGBG +10$^{-4}$ M CoCl$_2$and 10$^{-3}$ M MGBG +10$^{-5}$ M spermine +10$^{-4}$ M CoCl$_2$treatments. Ethylene production highest in 10$^{-3}$ M MGBG +10$^{-5}$ M spermine treatment was higher than control. In 10$^{-3}$ M MGBG +10$^{-5}$ M spermine + 10$^{-4}$ M CoCl$_2$ treatment, ethilene production was lowest, whereas polyamine level was highest.
Due to the limited bioavailability of $[D-Ala^6]$LHRH from nonparenteral transmucosal sites of administration, enhancement of mucosal permeability by coadministration of several protease inhibitors and/or penetration enhancers were studied in rabbit mucosa. As a reliable bioassay method for $[D-Ala^6]$LHRH, ovulation-inducing effect were measured after vaginal administration in the rat. The permeation of $[D-Ala^6]$LHRH through the mucosal membrane of rabbit mounted on George-Grass diffusion cells were examined in the presence of polyoxyethylene 9-lauryl ether (POE), ${\beta}$-cyclodextrin$({\beta}-CyD)$ or ethylene diamine tetra acetate disodium salt(EDTA). The vaginal membrane showed higher permeability of $[D-Ala^6]$LHRH than the rectal and nasal membrane. POE and ${\beta}-CyD$ showed a small promoting effect on the membrane permeation of $[D-Ala^6]$LHRH, but EDTA showed significant enhancement. Ovaluation was enhanced by the coadministration of sodium laurate(0.5%), a protease inhibitor but was not enhanced by EDTA, a penetration enhancer. On the other hands, coadministration of sodium tauro 24,25 dihydrofusidate(1%) and EDTA(2%) enhanced the ovulation inducing-effect 2.8 times. These results suggest that the vaginal administration of $[D-Ala^6]$LHRH with STDHF or sodium laurate as a protease inhibitor, and EDTA as a penetration enhancer, may become an elective method for transmucosal delivery of $[D-Ala^6]$ LHRH.
Possible roles of polyamines in the inhibition of cell elongation in Ranunculus petioles were investigated. Exogenously apoplied polyamines greatly inhibited the auxin-induced petiole growth, while treatment of the tissue with $\alpha$-difluoromethylarginine, the inhibitor of putrescine biosynthesis, further enhanced the growth in the presence of IAA. Inhibitory effect of spermine can also be apparent for fusicoccin-induced elongation, but not for growth induced by a low pH. Spermine also suppressed the ethylene-enhanced growth in the presence of auxin. Using computer-based video digitizer system, the inhibitory effects of spermine on petiole growth were kinetically analyzed. Auxin-induced growth was characterized by an initial and transient growth with a highly elevated rate followed by a steady growth with a slightly reduced rate. Spermine treatment was found to shorten the duration of the initial phase of growth, and to reduce the rates of both the initial and steady growth as well. The latent period for auxin induction was not affected by spermine.
Antisense construct of cDNA for senescencerelated ACC oxidase (CAO) cDNA isolated from carnation flowers were introduced into tobacco by Agrobacteriummediated transformation. The decreasing expression of NtACO and the reduction of ethylene production were observed in these transgenic lines. In contrast, the SAMDC transcripts and spermidine content were increased. The findings that higher content of spermidine in the ethylene suppressed transgenic plants compared with wild-type should be directly resulted in the enhancement of SAMDC activity followed by the increased accumulation of SAMDC transcript. To investigate the pathogenic response in these transgenic plants, wild-type and transgenic plants were inoculated with Phytophthora parasitica pv. nicotianae. Transgenic plants suppressing ethylene production showed the increased resistance against fungal pathogen, comparing with wild-type plant. PR-protein genes expression in CAO-AS-2 and CAOAS-4 were also higher at the normal growth condition and pathogenic response than in wild-type plants. The results of higher spermidine content and SAMDC activity in transgenic plants, CAO-AS-2 and CAO-AS-4, support the possibility that an increase in spermidine content might induce the higher transcripts of PR-protein genes. This results agreed with the phenomena that spermidine promoted the expression of PR1a and a SAMDC inhibitor, MGBG, decreased the expression of PR1a in leaf discs. These results suggest that the resistance against fungal pathogen in transgenic tobacco impaired in ethylene production might be caused by increasing in polyamine, especially spermidine, biosynthesis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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