Background: To assess the diagnostic potential of tumor-associated high molecular weight DNA in stool samples of 32 colorectal cancer (CRC) patients compared to 32 healthy Malaysian volunteers by means of polymerase chain reaction (PCR). Methods: Stool DNA was isolated and tumor-associated high molecular weight DNA (1.476 kb fragment including exons 6-9 of the p53 gene) was amplified using PCR and visualized on ethidium bromide-stained agarose gels. Results: Out of 32 CRC patients, 18 were positive for the presence of high molecular weight DNA as compared to none of the healthy individuals, resulting in an overall sensitivity of 56.3% with 100% specificity. Out of 32 patients, 23 had tumor on the left side and 9 on the right side, 16 and 2 being respectively positive. This showed that high molecular weight DNA was significantly (p = 0.022) more detectable in patients with left side tumor (69.6% vs 22.2%). Out of 32 patients, 22 had tumors larger than 1.0 cm, 18 of these (81.8%) being positive for long DNA as compared to not a single patient with tumor size smaller than 1.0 cm (p <0.001). Conclusion: We detected CRC-related high molecular weight p53 DNA in stool samples of CRC patients with an overall sensitivity of 56.3% with 100% specificity, with a strong tumor size dependence.
In traditional systems of medicine including homeopathy, the Condurango extract (Con) is often used to cure stomach cancer mainly, without having any scientific validation of its anti-cancer ability. Con has therefore been tested against non-small-cell lung cancer cells (NSCLC) A549 and NCI-H522 (H522) known to contain the KRAS mutation, making them resistant to most chemotherapeutic agents. As cancer cells generally defy cytotoxicity developed by chemopreventive agents and escape cell death, any drug showing the capability of preferentially killing cancer cells through apoptosis is worth consideration for judicious application. A549 and H522 cells were exposed to $0.35{\mu}g/{\mu}l$ and $0.25{\mu}g/{\mu}l$ of Con, respectively, for 48 h and analysed based on various protocols associated with apoptosis and DNA damage, such as MTT assay to determine cell viability, LDH assay, DNA fragmentation assay, comet assay, and microscopical examinations of DNA binding fluorescence stains like DAPI, Hoechst 33258 and acridine orange/ethidium bromide to determine the extent of DNA damage made in drug-treated and untreated cells and the results compared. Changes in mitochondrial membrane potential and the generation of reactive oxygen species were also documented through standard techniques. Con killed almost 50% of the cancer cells but spared normal cells significantly. Fluorescence studies revealed increased DNA nick formation and depolarized membrane potentials after drug treatment in both cell types. Caspase-3 expression levels confirmed the apoptosis-inducing potential of Con in both the NSCLC lines. Thus, overall results suggest considerable anticancer potential of Con against NSCLC in vitro, validating its use against lung cancer by practitioners of traditional medicine including homeopathy.
Chin Sieo Chin;Abdullah Norhani;Siang Tan Wen;Wan Ho Yin
Journal of Microbiology
/
v.43
no.3
/
pp.251-256
/
2005
In this study, we assessed the susceptibility of 12 Lactobacillus strains, all of which had been isolated from the gastrointestinal tracts of chicken, to three antibiotics (chloramphenicol, erythromycin and tetracycline) used commonly as selective markers in transformation studies of lactic acid bacteria. Among these strains, $17\%,\;58\%,\;and\;25\%$ were found to exhibit a high degree of resistance to $200\;{\mu}g/ml$ of tetracycline, erythromycin, and chloramphenicol, respectively. Seven of the 12 Lactobacillus strains exhibiting resistance to at least $50\;{\mu}g/ml$ of chloramphenicol or erythromycin, and five strains exhibiting resistance to at least $50\;{\mu}g/ml$ of tetracycline, were subsequently subjected to plasmid curing with chemical curing agents, such as novobiocin, acriflavin, SDS, and ethidium bromide. In no cases did the antibiotic resistance of these strains prove to be curable, with the exception of the erythromycin resistance exhibited by five Lactobacillus strains (L. acidophilus I16 and I26, L. fermentum I24 and C17, and L. brevis C10). Analysis of the plasmid profiles of these five cured derivatives revealed that all of the derivatives, except for L. acidophilus I16, possessed profiles similar to those of wild-type strains. The curing of L. acidophilus I16 was accompanied by the loss of 4.4 kb, 6.1 kb, and 11.5 kb plasmids.
Lee, Deog-Yong;Seo, Yeon-Soo;Kang, Sang-Gyun;Yoo, Han Sang
Korean Journal of Veterinary Research
/
v.47
no.2
/
pp.157-162
/
2007
Lactic acid bacteria (LAB) has been regarded as a useful microorganism and tried to manipulate plasmid DNA for increasing the usefulness. Although several methods have been developed to isolate plasmid DNA from Escherichia coli (E. coli), these methods were not sufficient to apply to LAB with exception of O'Sullivan's lysis method. So, we evaluated plasmid DNA extraction from LAB using general E. coli preparation methods and tried to improve the extraction yield and DNA purity by modifying O'Sullivan's alkaline lysis method. To improve the extraction yield, salt and carrier were added to precipitant and those were incubated at $-70{^{\circ}C}$. Only incubation at $-70{^{\circ}C}$ was the effective method of those modifications. Purity of plasmid DNA was improved by two times of each centrifugation and phenol/chloroform extraction. However, DNA was damaged by twice extraction with phenol/chloroform. Also, exclusion of ethidium bromide showed negative effect to purity. Additionally, it was recommended that improvement of the extraction yield may be due to centrifugation at high speed for more time and to dissolving complete DNA pellet before addition of 7.5 M ammonium acetate. Extraction using this modification produced higher quality of plasmid DNA.
The cancer chemo-preventive effects of equol have been demonstrated for a wide variety of experimental tumours. In a previous study, we found that equol inhibited proliferation and induced apoptotic death of human gastric cancer MGC-803 cells. However, the mechanisms underlying equol-mediated apoptosis have not been well understood. In the present study, the dual AO (acridine orange)/EB (ethidium bromide) fluorescent assay, the comet assay, MTS, western blotting and flow cytometric assays were performed to further investigate the pro-apoptotic effect of equol and its associated mechanisms in MGC-803 cells. The results demonstrated that equol induced an apoptotic nuclear morphology revealed by AO/EB staining, the presence of a comet tail, the cleavage of caspase-3 and PARP and the depletion of cIAP1, indicating its pro-apoptotic effect. In addition, equol-induced apoptosis involves the mitochondria-dependent cell-death pathway, evidenced by the depolarization of the mitochondrial membrane potential, the cleavage of caspase-9 and the depletion of Bcl-xL and full-length Bid. Moreover, treating MGC-803 cells with equol induced the sustained activation of extracellular signal-regulated kinase (ERK), and inhibiting ERK by U0126, a MEK/ERK pathway inhibitor, significantly attenuated the equol-induced cell apoptosis. These results suggest that equol induces mitochondria-dependent apoptosis in human gastric cancer MGC-803 cells via the sustained activation of the ERK1/2 pathway. Therefore, equol may be a novel candidate for the chemoprevention and therapy of gastric cancer.
In order to increase the production and secretion rate of mouse salivary $\alpha$-amylase from Saccharomyces cerevisiae, various experiments were attempted. A plasmid pCNNinv (AMY) was constructed by the substitution of ADCl promoter and native signal sequence of mouse salivary $\alpha$-amylase cDNA gene with PRBI promoter and yeast invertase leader sequence, which resulted in 25% increase in the production of $\alpha$-amylase in the culture medium. The respiratory deficient transformant carrying pCNNinv (AMY) were obtained by treating yeast cells with ethidium bromide, and the $\alpha$-amylase activities in the culture brothes of the respiratory-deficient transformants were 5-8 times higher than that of parental wild type strain. $\alpha$-Amylase activity was also increased 3 times when the 0.015% (w/v) of 2-mercaptoethanol was added to the culture medium.
Journal of the korean academy of Pediatric Dentistry
/
v.25
no.2
/
pp.292-303
/
1998
The arbitrary primer polymerase chain reaction(AP-PCR) and Southern blot restriction fragment length polymorphism(RFLP) were used to genotype the cariogenic pathogen S. mutans in children. Following the morphologic chracteristics of colony on selective medium for S. mutans, total genomic DNA from 155 strains was extracted by conventional methods. Among 155 strains, 143 strains (92.3%) were confirmed S. mutans by PCR with dexA gene and 114 strains were used in this study. Three random sequence 10-base oligonucleotide primers were chosen for AP-PCR. The amplified DNA products were separated electrophoretically in a 2% agarose gel containing ethidium bromide and the banding patterns were compared among different strains. For RFLP analysis, DNA was digested with EcoRI and BamHI, separated on a 0.7 % agarose gel and transferred to a nylon membrane. The membrane was probed with a previously characterised 1.6 kilobases (kb) DNA fragment cloned from gtf B gene of S. mutans. The probe was labeled with isotope[$^{32}P-{\alpha}CTP$], and hybridized fragments were detected with intensifying screen. AP-PCR produced 4-8 DNA bands in the 0.25-10 kb regions and distinguished 9, 10 or 12 genotypes, depending on the specific primer used. Southern blot RFLP analysis revealed 2 hybridization patterns consisting of 1 DNA fragments 450, 500 bp. These results indicate that AP-PCR is more discriminative method for genotyping of S. mutans.
Objective: Tumor necrosis factor-a $(TNF-{\alpha})$, a potent immuno-modulator and pro-inflammatory cytokine, has been implicated in many pathological processes. In this study, the author examined whether promoter region polymorphism in the $TNF-{\alpha}$a gene at position-308 affect the odds of cerebral infarction (CI) and whether genetic risk is enhanced by sasang constitutional classification. Methods: 212 CI patients and 610 healthy controls were genotyped and determined according to sasang constitutional classification. The amplified genotypes were analyzed on $8\%$ polyacrylamide gel. The alleles were visualized by ethidium bromide staining. Primers for $TNF-{\alpha}$ were designed to incorporate a polymorphic site at a position -308 bp of the $TNF-{\alpha}$ gene into an NcoI restriction site. Restriction digests generated products of 87 and 20 bp for G allele and 107 bp for A allele. Results : A significant decrease was found for the $TNF-{\alpha}$ A allele in CI patients compared with controls (P=0.033, odds ratio, O.R.: 0.622). However, there was no significant association between $TNF-{\alpha}$ polymorphism and sasang constitution in CI patients. Conclusion: My finding suggests that $TNF-{\alpha}$promoter region polymorphism is responsible for susceptibility to CI in Koreans.
Kim, Do Kyun;Kim, Kyoung Hoon;Cho, Eun Ji;Joo, Seoung-Je;Chung, Jung-Min;Son, Byoung Yil;Yum, Jong Hwa;Kim, Young-Man;Kwon, Hyun-Ju;Kim, Byung-Woo;Kim, Tae Hoon;Lee, Eun-Woo
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
v.23
no.3
/
pp.430-435
/
2013
Multidrug resistance, especially multidrug efflux mechanisms that extrude structurally unrelated cytotoxic compounds from the cell by multidrug transporters, is a serious problem and one of the main reasons for the failure of therapeutic treatment of infections by pathogenic microorganisms as well as of cancer cells. Streptococcus mutans is considered one of the primary causative agents of dental caries and periodontal disease, which comprise the most common oral diseases. A fragment of chromosomal DNA from S. mutans KCTC3065 was cloned using Escherichia coli KAM32 as host cells lacking major multidrug efflux pumps. Although E. coli KAM32 cells were very sensitive to many antimicrobial agents, the transformed cells harboring a recombinant plasmid became resistant to several structurally unrelated antimicrobial agents such as tetracycline, kanamycin, rhodamin 6G, ampicillin, acriflavine, ethidium bromide, and tetraphenylphosphonium chloride. This suggested that the cloned DNA fragment carries a gene encoding a multidrug efflux pump. Among 49 of the multidrug-resistant transformants, we report the functional gene cloning and characterization of the function of one multidrug efflux pump, namely MdeA from S. mutans, which was expressed in E. coli KAM32. Judging from the structural and biochemical properties, we concluded that MdeA is the first cloned and characterized multidrug efflux pump using the proton motive force as the energy for efflux drugs.
A moderately halophilic bacterium, Listeria denitrificans HB-38, isolated from mud on the seashore in Sooyoung bay, Pusan, showed the requirement of $4\%$ sodium chloride for cell growth in a medium with salts typical of a marine environment, and showed that of $10\%$ in a medium with salts typical of a terrestrial environment. The optimum temperature and pH for growth were $40^{circ}C$ and pH 7.5 in the medium containing $10\%$ sodium chloride and ions typical of a terrestrial environment. Sodium chloride as a protoplast stabilizer gave more stability than sorbitol or sucrose, meanwhile the protoplast did not require higher concentration of stabilizer than that of E. coli protoplast. Succinic dehydrogenase of HB-38 had a halophilic property showing maximal activity in the presence of $9\%$ sodium chloride. The strain HB-38 did not harbor an extrach-romosomal DNA.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.