This study was performed to investigate the stimulating effect on oocyte maturation and cumulus cell expansion in TC199 media by human cord serum (HCS) supplementation. Immature mouse oocyte cumulus complexes (OCCs) were cultured in TC199 media supplemented with bovine serum albumin (BSA), HCS and human chorionic gonadotropin (hCG) instead of luteinizing hormone (LH) respectively, and the expression of cumulus expansion and oocyte maturation were observed. After 4hr and 24hr culture with or without OCCs, media containing 0.4% BSA, 10% HCS and 10 IV hCG respectively were collected and analyzed for changing concentrations of estradiol $(E_2)$, progesterone $(P_4)$, testosterone (T), and $PGF_{2\alpha}$. There were no elevation of $E_2$, T, and $PGF_{2\alpha}$ by OCCs culture, but minute elevation of $P_4$ level by 24hr OCCs culture in hCG supplementation (p=0.048). The stimulating pattern of cumulus expansion of OCCs by HCS and hCG supplementation was similar to our previously report using Ham's F-10 media, however oocyte maturation rates after 24hr OCCs culture in all media were increased by $20\sim30%$ compared to Ham's F-10 media. These results suggest that LH in HCS induce cumulus expansion probably by $P_4$ secretion of OCCs, and TC199 is efficient media for immature mouse oocyte maturation.
Objective: Zearalenone (ZEA) is a mycotoxin with potent estrogenic effects. Saffron is an herbal product that has antioxidant activities. The objective of this study was to investigate the protective role of saffron against reproductive toxicity induced by ZEA in female mice. Methods: Ninety 8-week-old female mice were randomly allocated into three treatment groups. The first group received an intraperitoneal injection of ZEA (2.5 mg/kg) on alternate days. The second group received ZEA (2.5 mg/kg) on alternate days plus oral saffron daily (50 mg/kg). The third group was treated with a vehicle of 1% dimethyl sulfoxide (DMSO) on alternate days, as a control. Ten mice were euthanized from each group at 30, 60, and 90 days of treatment. Serum levels of luteinizing hormone (LH), follicle-stimulating hormone (FSH), estradiol ($E_2$), and progesterone (P) were assessed. The uterus and ovaries were examined for changes in size or morphology. Results: Serum levels of LH, FSH, $E_2$, and P in the female mice treated with ZEA plus saffron were significantly higher than in those treated with ZEA alone, and were not significantly different from those treated with 1% DMSO. The female mice treated with ZEA alone showed a reduction in size of the uterus and abnormal architecture of the ovaries. Conclusion: The administration of saffron to female mice resulted in a significant reduction in ZEA-induced alterations in reproductive hormone levels, the size of the uterus, and the morphology of the ovaries.
Chronic exposure to atrazine (ATR) raises concerns about adverse effects on reproductive functions. We tested our previously validated filtering device, the OBP-based filter, onto a biological model constituted of cultured swine granulosa cells treated for 48 h with media conditioned with 0.1 or $10{\mu}M$ ATR evaluating cell viability and steroidogenesis. The tested atrazine concentrations did not change granulosa cell viability and no filtering effects was observed following treatments with media prepared with differently filtered water. As for steroidogenesis, treatment of water with OBP-based filter containing $10{\mu}M$ atrazine completely suppressed the stimulatory effect of $10{\mu}M$ atrazine on progesterone production as well as the inhibitory effect of $0.1{\mu}M$ ATR on estradiol-$17{\beta}$ production by granulosa cells. Our data demonstrate that the impairment of steroidogenesis induced by ATR is effectively removed after water filtration in the experimental device thus suggesting potential use in biotechnological applications on living cells and/or organisms.
Objectives: The purpose of this study was to investigate the anti-obesity effects of the aqueous extract of Schizandra chinensis (SC) in menopausal mice. Methods: To induce menopausal obesity, female mice were ovariectomized (OVX) and fed a high-fat diet (HFD; 60% fat, 28% carbohydrates, 14% protein) for 12 weeks. The mice were divided into 6 groups (n = 8): NOR (sham-operated and vehicle-treated), HFD+OVX (vehicle-treated), E2 (17-beta estradiol 50 ㎍/kg-treated), SC1 (1 mg/kg SC-treated), SC10 (10 mg/kg SC-treated), and SC100 (100 mg/kg SC-treated). Samples were orally administered for 6 weeks, after which all experimental mice were sacrificed. Body weight, feeding efficiency, white adipose tissue weight, adipocyte diameter, and fat vacuoles in liver were analyzed. Results: By treating with SC extract, the body weight and feeding efficiency of mice were significantly decreased. The weight of visceral fat tissues was decreased in the SC10 and SC100 groups. Histopathology showed that fat cell diameters of white adipose tissue were also decreased in the SC10 and SC100 groups. Additionally, SC extract regenerated the hepatocyte damage and decreased the size and number of follicular adipocytes Conclusion: In summary, these results suggest that SC has inhibitory effects against menopausal obesity. Schizandra chinensis may be a potential alternative for obesity among female menopausal diseases.
Purpose: The aim of this study was to assess the effects of guava leaf extract (GLE) supplementation on antioxidant enzyme activity and expression of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) mRNA in ovariectomized rats. Methods: All animals were randomly assigned to four groups (n = 7 for each group): non-ovariectomized control (Sham), the ovariectomized control (OVX), ovariectomy + 150 mg/kg b.w. of GLE ($OVX{\cdot}GL$), and ovariectomy + 300 mg/kg b.w. of GLE ($OVX{\cdot}GH$). Treatment groups were administered GLE for 8 weeks every day. Results: Body weight gain was significantly reduced in the $OVX{\cdot}GL$ group compared with the OVX group (p < 0.05). The level of serum $17{\beta}$-estradiol (E2) was significantly lower in the OVX groups than the Sham group (p < 0.05). Serum triglyceride (TG) and HDL-cholesterol levels were not significantly different between all groups. However, serum total cholesterol (TC) level was significantly reduced in the $OVX{\cdot}GH$ group compared with the OVX group (p < 0.05). Serum free fatty acid (FFA) level and liver TG level were significantly reduced in both $OVX{\cdot}GL$ and $OVX{\cdot}GH$ groups compared with the OVX group (p < 0.05). Furthermore, serum glutathione peroxidase (GPx) activity was significantly elevated in the GLE groups (p < 0.05). The mRNA expression level of GPx was not affected by ovariectomy. However, administration of GLE resulted in significantly increased nuclear factor erythroid 2-related factor (Nrf2) and catalase (CAT) mRNA expression levels in the liver (p < 0.05). In addition, liver nitric oxide (NO) level was significantly reduced in the $OVX{\cdot}GH$ group compared with the OVX group (p < 0.05). Expression level of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) was significantly elevated in the $OVX{\cdot}GH$ group compared with the OVX group (p < 0.05). Conclusion: These results suggest that GLE could have protective effects in OVX rats by stimulating eNOS expression and improving the antioxidant defense system.
In this study, oocyte steroidogenesis are investigated in relation to oocyte development in the starry flounder, Platichthys stellatus, a marine multiple spawner. Vitellogenic (0.52 and 0.55 mm oocyte diameter) and mature oocytes (0.63, 0.66 and 0.71 mm oocyte diameter) were incubated in vitro in the presence of $[^3H]17{\alpha}$-hydroxyprogesterone ($[^3H]17{\alpha}$-OHP) as a precursor. Steroid metabolites were extracted from the incubated media and oocytes, the extracts were separated and identified by thin-layer chromatography (TLC), high performance liquid chromatography (HPLC) and gas chromatographymass spectrometry (GC-MS). The major metabolites produced from $[^3H]17{\alpha}$-OHP were androgens [androstenedione ($A_4$) and testosterone (T)] and estrogens [$17{\beta}$-estradiol ($E_2$) and estrone ($E_1$)] and progestins [$17{\alpha},20{\alpha}$-dihydroxy-4-pregnen-3-one ($17{\alpha}20{\alpha}P$) and $17{\alpha},20{\beta}$-dihydroxy-4-pregnen-3-one ($17{\alpha}20{\beta}P$)] in vitellogenic and mature oocytes. The results from this study suggest the potential roles of $E_1$ in the oocytes with diameter 0.52-0.71 mm, $17{\alpha}20{\alpha}P$ and $17{\alpha}20{\beta}P$ at the oocytes of 0.63, 0.66 and 0.71 mm.
Our previous study showed that transgenic (TG) pigs harboring human EPO (hEPO) gene have been shown to have reproductive disorders, including low pregnancy rates, irregular estrus cycle and low little size. To investigate these reasons, we assessed estrus behavior (standing response) and plasma $17{\beta}$-estradiol ($E_2$) level, which partly reflect reproductive function, during the estrus cycles after synchronization and superovulation by hormone treatments. Then, we analysed blood composition and expression of hEPO gene in TG pigs. Pigs were injected with PG600. After 10 days, pigs were fed with Regumate porcine for 6 days. Blood samples were collected from jugular vein. Analysis of blood composition and $E_2$ level were measured by Hemavet 950 and $E_2$ ELISA kit, respectively. And, the expression of hEPO gene in reproductive organs was quantitated by real-time RT-PCR. The percentage of estrus behavior in TG was significantly decreased. Hematocrit (HCT), hemoglobin (Hb) concentration and red blood cell (RBC) number were significantly higher in TG than wild type (WT). On the other hand, high expression of hEPO gene in TG was observed in the mammary gland as well as in the uterus. Moreover, plasma $E_2$ level was significantly higher in TG than WT. These results suggest that nonspecific expression of hEPO gene in the other organs of TG may affect blood composition and plasma $E_2$ level, thereby causing reproductive disorders.
The present study was undertaken to investigate the effect of stimulation of follicular development with eCG on the peripheral levels of inhibin and FSH in Murrah buffaloes. Estrus was synchronized in five normally cycling females by insertion of Crestar (Intervet, Boxmeer, Holland) implants for nine days. Estradiol valerate was administered i.m. on the day of implant insertion. On the 10th day of the induced estrous cycle a single dose of 3000 IU eCG (Folligon, Intervet, Boxmeer, Holland) was given, followed by treatment with 25 mg of $PGF_2$ alpha (Lutalyse, Upjohn, Belgium) 48 h later. Blood samples were obtained during the induced estrus, on cycle day 10 (luteal phase), at the superovulatory estrus (43 h after PGF) and during the periovulatory period (64 h after PGF). Ultrasonography was done daily to monitor follicular development. Plasma concentrations of inhibin and FSH were determined by specific radioimmunoassays. Differences between $mean{\pm}SEM$ values of different phases of the cycle were compared by ANOVA. The mean number of small (2-5 mm), medium (6-9 mm) and large (>10 mm) follicles observed two days after eCG treatment and on the day of superovulatory estrus was $2.8{\pm}0.31$, $5.2{\pm}0.30$ and $1.4{\pm}0.09$ and $1.9{\pm}0.21$, $2.8{\pm}0.40$ and $5.0{\pm}0.83$, respectively. The mean number of ovulations was $3.6{\pm}0.37$ and the mean number of unovulated follicles was $6.1{\pm}0.47$. Most of the follicles >10 mm in diameter had ovulated (72%). The mean ${\pm}SEM $ of plasma inhibin concentration $(2584.15{\pm}17.92pg/ml)$ during the superovulatory estrus was significantly higher $(p{\leq}0.05)$ than during the induced estrus $(749.87{\pm}17.29pg/ml)$, the luteal phase $(1099.54{\pm}24.98pg/ml)$ and periovulatory period $(1682.71{\pm}29.88pg/ml)$, respectively. $Mean{\pm}SEM$ plasma FSH concentration during the induced estrus $(10.35{\pm}0.41ng/ml)$ was not different from that during the superovulatory estrus $(8.52{\pm}0.39ng/ml)$, but was significantly higher $(p{\leq}0.05)$ than during the luteal phase $(2.81{\pm}0.42ng/ml)$ and periovulatory period $(5.7{\pm}0.28ng/ml)$. These data indicate that treatment with eCG in buffaloes for inducing superovulation results in a significant elevation in plasma inhibin levels and a decrease in plasma FSH levels during the superovulatory estrus. Thus, we suggest that the elevated plasma inhibin coming from fully developed follicles continued for a long time which results in inhibition of FSH leading to poor ovulation in the remaining follicles, which may be the cause of suboptimal superovulatory response.
In an effort to develop the biomarker for monitoring the contamination of xenoestrogen in the freshwater environment of Korea, reverse transcription-polymerasechain reaction (RT-PCR) analysis of vitellogenin (VTG) gene expression was optimized in Hearisarsus Iaseo, Based on the homology of the VTG cDNA sequences between the common carp and zebra fish, a set of PCR primers for VTG mRNA amplification for H; labo was designed. VTG mRNA level in livers from female and male fishes was analyzed by RT-PCR following single injection of 17 beta estradiol($E_2$ 10 mg $kg^{-1}$ B.W.). As an internal control, beta actin mRNA was amplified. One us of total liver RNA was subjected to RT-PCR. In female the amount of PCR productof VfC gradually increased in the range from 16 to 34 cycles of amplification. On the contrary, in control male, PCR product first detected at 32 cycles of amplification and linearly increased up to 40 cycles of amplification. In $E_2$ injected male liver, the VTC mRNA level was similar to that in the female. Taken together, this result suggests that liver of male H. labo expresses minute amount of VTG mRNA which are2-l6 equivalent of female and that induction of VTG mRNA occurs in male liver after estrogen treatment. In conclusion, the optimized protocol for RT-PCR analysis of VTG mRNA expression in liver of male H. labo will provide the environmental monitoring method for the xenoestrogen contamination in the rivers in Korea.
Purpose: We analyzed climacteric symptoms, bone mineral density (BMD), serum estradiol ($E_2$) and follicle stimulating hormone (FSH) to identify the health benefits of meridian massage in perimenopausal women. Methods: There were 16 women in the experimental group and 17 people in the control group. Meridian massage was performed for 4 weeks, 3 times a week for 20 minutes each session. The data were collected pre-treatment, posttreatment and 4 weeks after treatment. SPSS/WIN 11.5 was used for data analysis. Results: After meridian massage, there were significant differences in climacteric symptoms (U = 65.50, p = .011) and BMD (U = 65.50, p = .011) between the two groups. The E2 level showed a significant difference between the two groups pre- and posttreatment (U = 75.00, p = .028). FSH showed a significant increase when measured at 4 weeks after the treatment as compared with the amount when measured post-treatment within the control group (z = -2.249, p = .025), experimental group showed a stable change in FSH. but there was no significant difference between the groups. Conclusion: In this study, we confirmed the effects of Meridian massage in decreasing climacteric symptoms, inhibiting the decrease of BMD and stabilizing serum hormone in perimenopausal women. Therefore, it can be considered for use as a nursing intervention for health management in perimenopausal women.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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