This study aimed to evaluate the genotoxicity of GST (Gamisasangja-tang). For examining genotoxicity, we carried out bacterial reverse mutation assay, chromosome aberration assay, micronucleus induction test according to OECD guidelines. Bacterial reverse mutation assay: In GST treating group, regardless of existence S9 mix, revertant colonies counts appeared to be less than twice of negative control group and dose dependent increase. In positive control group, revertant colonies counts were shown to be more than twice of negative control croup. Chromosome aberration assay: All cell line showed repetition rate of abnormal chromosome aberration less than 5%, regardless of treating time, existence of S9 mix, and no significant change ($p{\succeq}0.05$) compared with negative control group. Micronucleus induction test: Micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) repetition rate of Polychromatic erythrocytes (PCE) showed no significant changes compared with negative control group ($p{\succeq}0.05$). PCE portion of total erythrocytes also showed no significant changes ($p{\succeq}0.05$). Our results showed that GST didn't induce any genotoxicity.
We exposed ICR mice to low-dose (0.2 Gy) and low-dose-rate (0.7 mGy/h) $\gamma$-radiation ($^{137}Cs$) in the Low-dose-rate Irradiation Facility at the Radiation Health Research Institute to evaluate systemic effects of low-dose radiation. We compared the body and organ weights, number of blood cells (white and red blood cells and platelets), levels of biochemical markers in serum, and frequency of micronuclei in polychromatic erythrocytes between low-dose irradiated and non-irradiated control mice. The ICR mice irradiated with total doses of 0.2 and 2 Gy showed no changes in body and organ weights, number of blood cells (white and red blood cells), or frequency of micronuclei in the polychromatic erythrocytes of peripheral blood. However, the number of platelets (P = 0.002) and the liver weight (P < 0.01) were significantly increased in mice exposed to 0.2 and 2 Gy, respectively. These results suggest that a low-dose-rate of 0.7 mGy/h does not induce systemic damage. This dose promotes hematopoiesis in the bone marrow microenvironment and the proliferation of liver cells. In the future, the molecular biological effects of lower doses and dose rates need to be evaluated.
From 1988 to 1989, 8 strains of canine parvovirus-2 (CPV-2) were isolated from the fecal specimens from the dogs that were clinically diagnosed as canine parvoviral enteritis in the veterinary hospitals located in the regions of Taejon and Chungbuk province. Studios on biological and physicochemical properties for the isolates were carried out. The results obtained by experiments are summarized as follows. 1. Among 62 fecal samples collected from the dogs with enteric diseases, 24 (38.7%) showed the haemagglutinating activity against porcine erythrocyte, ranging from 16 to 16, 384 of HA titers. 2. When 8 fecal specimens with high HA titer over 1, 000 were inocultated into CRFX cells, intranuclear inclusion bodies were obseverd in all of eight specimens, of w)lick three specimens showed cytoplasmic inclusions concurrently with the intranuclear inclusion bodies. 3. In study on species-specificity of haemagglutinating activity of the isolates, TJ-89-1 and TJ-89-2, it was found that the isolates revealed the highest haemagglutinating activity with porcine erythrocytes, showing the relatively lower haemagglutination titers with the erythrocytes from cat and rabbit. None of erythrocytes from other animals reacted with the isolates. 4. By the cross-haemagglutination inhibition test of the Isolates with reference viruses and sera, the Isolates were evidently identified as the strains of canine parvovirus-2. 5. In Physicochemical property test, it was evident that the isolates were stable in, lipid solvent, pH and heat treatment at $56^{\circ}C$ for 30 min. and contain DNA genome. 6. When seven puppies were inoculated intraorally with the isolate at HA titer of 8, 192, all of the puppies showed the symptoms of anorexia, vomiting, diarrhea and died at the 5th to 10th days post inoculation(pi). The fecal samples from all of the puppies revealed significantly high HA titers afterward the 5th days pi. Body temperature and the number of total leucocytes were slightly increased at the early stage of infection. but extremely decreased at the stage of collapse. HI titers of the sera started to increase at the 2nd to 3rd days pi reaching 512 to 1, 024 at the 4th to 5th day pi.
제초제인 methiozolin에 대한 유전독성 영향을 평가하기 위하여 in vitro 시험으로 복귀돌연변이시험과 염색체 이상시험을 수행하였고, 그리고 in vivo 시험으로 소핵시험을 수행하였다. Salmonella typhimurium, 균주 TA98, TA100, TA1535 및 TA1537 및 Escherichia coli WP2uvrA를 이용한 복귀 돌연변이 시험에서 직접법과 대사활성화법(S9 mixture) 모두 $5,000{\mu}g$/plate에서 돌연변이 수는 음성 대조군과 유의차가 없었다. Chinese hamster lung(CHL) 세포를 이용한 구조적, 숫적 염색체 이상시험결과 직접법과 대사활성화법의 경우 methiozolin을 투여한 모든 군(80, 40, $20{\mu}g$/mL)의 세포에서 염색체 이상이 관찰되지 않았다. ICR 마우스를 이용한 소핵시험에서는 methiozolin의 복강투여가 골수세포에서 다염성 적혈구(polychromatic erythrocytes) 및 소핵(micronucleous)을 가진 다염성 적혈구의 출현율을 조사하였는데, 모든 농도(1,500, 1,000, 500 mg/kg)에서 음성대조군과 유의한 차이가 나타나지 않아 소핵을 유발하는 독성이 없는 것으로 판단된다. 이상의 결과로부터 제초제인 methiozolin은 세균, 세포 및 동물체내에서 유전독성을 유발하지 않는 물질로 사료된다.
Objectives : We investigated genetic toxicity of HMCO5 using the Micronucleus Test in bone marrow cells of mice and Bacterial Reverse Mutation Assay in plate incorporation method according to OECD Guidelines and KFDA Guidelines. Methods : 1. Micronucleus test: The male rats were divided into 5 groups, respectively; G(1), treated with distilled water: G(2), treated with 1250mg/kg HMC05: G(3), treated with 2500mg/kg HMC05, G(4), treated with 5,000mg/kg HMC05; G(5), treated with Cyclophosphamide $H_2O$. Sterilized distilled water and HMC05 were administered for two consecutive days. Cyclophosphamide $H_2O$ was administered once on the day of 2nd administration. 2. Bacterial Reverse Mutation Aassay: Experimental groups were divided into two groups: with S-9mix(+S) or without S-9mix(-S). Each group treated with sterilized distilled water only, HMCO5(62, 185, 556, 1,667, $5,000{\mu}g$/plate) and, positive vehicles(Sodium azide, 2-Aminoanthracene, 4-Nitroquinoline N-oxide, ICR 191), respectively. Results : HMC05 did not show any changes in the number of micronucleated polychromatic erythrocytes(MNPCE) among 200 polychromatic erythrocytes compare to negative control. However, there were significant (p<0.01) increase with CPA in MNPCE. In Bacterial Reverse Mutation Aassay, no significant increases in the number of revertant colonies compared to (삭제) negative control were detected in all concentrations of HMC05. Conclusions : These results indicate that HMC05 did not show any genotoxicity against in Micronucleus test and Bacterial Reverse Mutation Aassay.
본 실험은 대두(Glycine max L.) 방사품종의 종자단백질에서 렉틴을 분리하여 그 특성을 조사하기 위하여 수행되었다. 렉틴의 분리방법은 (NH$_4$)$_2$SO$_4$의 50~80% 포화침전단백질을 Carboxymethyl cellulose column과 Sephadex G 100 column을 거쳐서 분리, 정제되었다. 순도의 검정은 2~30% polyacrylamide porosity gradient gel을 사용한 전기영동법으로 단일 band를 확인하였고 또한 분자량은 11% sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel에 의하여 134,000 dalton임을 추정하였으며 45,000 dalton의 3개의 subunits로 구성되어 있음을 알았다. Schiff reagent에 의하여 분홍색 반응을 일으켰으므로 이것은 당단백질임을 알 수 있었다. 본 당단백질은 토끼와 사람의 적혈구 모두에서 적혈구응집 반응이 일어났으며 사람의 혈액형중에서 적형구응집 정도는 A>B>O>AB형의 순서로 응집이 잘 일어났다. 당류에 의한 적혈구응집저해는 N -acetyl-D-galactoseamine 과 D-galactose에 의하여 일어났다.
We investigated the nutritional state of B vitamins and the neuropsychological functions in 25 subjects, aged $63.1{\pm}6.3$ years, residing in rural areas of Korea. Nutritional states of thiamin, riboflavin, and pyridoxine were assessed enzymatically in the erythrocytes, and folate concentrations were measured microbiologically in the plasma and erythrocytes. A battery of composite neuropsychological test was administered to the subjects. Plasma folate was correlated with the total intelligence score (p=0.049). Folate levels in the erythrocytes were correlated with the performance intelligence scores such as block design (p=0.017) and picture arrangement (p=0.016). The red cell folate was correlated with memory scores such as general memory (p=0.009) and delayed recall (p=0.000). Although it did not reach statistical significance, verbal memory (p=0.053) was highly correlated with the red cell folate. The red cell folate was also correlated positively with the percent of conceptual level response number score (p=0.029), and negatively with the grooved pegboard test score for the non-dominant hand (p=0.010). Fine motor coordination was also influenced by folate nutrition, as finger tapping scores in both hands were significantly correlated with red cell folate (dominant hand; p=0.026, non-dominant hand; p=0.004). Other B vitamins such as thiamin, riboflavin, and vitamin $B_6$ were not as strongly correlated with neuropsychological function test scores as folate was. These results suggest that folate nutrition influences neuropsychological function test scores significantly in humans. Further studies are needed to explore the relationship between folate or other vitamin B nutrition and neuropsychological functions and the implications thereof.
돼지(n=22) 순환혈액내 단핵세포(PB-MNCs)중 T 및 B 림프구를 정량하고자 rosette 형성기법을 적용하였다. T 림프구는 여러 농도의 2-aminoethylisothiouronium bromide(Aet)나 dextran(Dex) 용액 또는 Aet와 Dex로 조합 처리된 면양(SRBC) 및 재래산양(GRBC)의 적혈구를 사용한 E-rosette 법으로, B 림프구는 erythrocyeantibody(EA) 및 erythrocyte-antibody-complement(EAC) rosette 법으로 각각 정량하였다. 한편 rosette 형성세포의 냉장정치시간에 따른 판독결과를 비교하여 적정판독시간대를 구명한 바 아래의 결과를 얻었다. 1. PB-MNCs와 SRBC/GRBC와의 자연 rosette형성을(RFR)은$ 32.9{\pm}7.9%/31.3{\pm}9.4%$인데 비하여 Aet 또는 Dex 처리군에서는 모두 증가되었고 특히 0.15M Aet$(40.2{\pm}4.6%/37.0{\pm}3.3%)$ 및 8% Dex$(71.5{\pm}4.5%/69.9{\pm}5.8%)$ 처리군에서 각각 높게 나타났다. 한편 0.1M Aet처리후 8% Dex 첨가군에서는 $67.8{\pm}7.4%$ 및 $69.8{\pm}8.5%$로 나타나 복잡한 Aet와 Dex를 복합처리하기 보다는 8% Dex 단독처리가 간편함을 알 수 있었다. 2. Rosette 형성세포의 냉장보관중 최적판독시간대는 10~20시간의 범위이었다. 3. EA 및 EAC의 RFR은 SRBC의 경우 $39.1{\pm}10.2%$, $27.6{\pm}7.0%$, GRBC의 경우 $32.6{\pm}6.1%$, $21.0{\pm}3.2%$로 나타났다. 이러한 결과는 돼지 PB-MNCs내의 T 및 B 림프구를 rosette 형성법으로 분리할 수 있으며 rosette assay에서 SRBC 뿐아니라 GRBC의 이용이 가능함을 제시한다.
과망간산칼륨 ($KMnO_4$), 안정화이산화염소 ($S-ClO_2$, 3% 수용액), 포르말린 (37% formaldehyde), 황산동 ($CuSO_4$)을 이용하여 넙치 적혈구의 cell damage에 미치는 효과를 알아보고자 in vitro 용혈작용과 methemoglobin (MetHb) 생성을 조사하였다. 실험의 농도는 과망간산칼륨 2-250 ppm, 안정화이산화염소 3.13-400 ppm, 포르말린 31.3-2,000 ppm, 황산동 0.04-5 ppm 이었다. 과망간산칼륨은 31.3-250 ppm, 황산동은 0.63 -5 ppm에서 현저한 용혈작용을 나타내었으나 이와는 반대로 MetHb 생성은 전혀 없었다. 따라서 과망간산칼륨과 황산동은 넙치 적혈구에 대한 cell damage system이 매우 유사한 것으로 생각되었다. 안정화이산화염소의 경우, 용혈작용은 25 ppm 이상의 농도에서 그리고 MetHb 생성은 6.25 ppm 이상의 농도에서 높게 증가하였다. 본 실험에서 유일하게 용혈작용과 MetHb 생성을 양쪽 다 현저하게 나타내었다. 포르말린은 2,000 ppm의 고농도에서도 용혈작용은 없었으며, MetHb 생성은 250-2,000 ppm에서 완만하게 증가하였다. 따라서 안정화이산화염소와 포르말린은 넙치 적혈구에 대하여 과망간산칼륨 및 황산동과는 또 다른 cell damage system을 가지고 있는 것으로 나타났다.
Since intracellular free $Mg^{2+}$ ($[Mg^{2+}]_i$) appears to be tightly regulated following cellular energy depletion, we hypothesized that the increase in $[Mg^{2+}]_i$ would result in $Mg^{2+}$ extrusion into circulation. Extracellualr $Mg^{2+}$ contents ($[Mg^{2+}]_o$) were measured in rat erythrocytes, the perfused heart and liver, and plasma in the anesthetized rat. Animals were injected intraperitoneally with sodium nitrite ($NaNO_2$) and plasma $Mg^{2+}$ was measured after the injection and then 10 and 20 minutes later. An increase in circulating (plasma) $Mg^{2+}$ ($[Mg^{2+}]_c$) and methemoglobin was observed in animals injected with $NaNO_2$ (30 mg/Kg). The time course of the effects demonstrated that $[Mg^{2+}]_c$ and methemoglobin continued to increase 10 minutes after the $NaNO_2$ injection. Under these conditions, there was a sustained increase in $[Mg^{2+}]_c$, but not in methemoglobin, which was inhibited by pretreatment with potassium cyanide (KCN, 4 mg/Kg), indicating that an increase in $[Mg^{2+}]_c$ was accompanied by ATP depletion. Injection of rotenone (0.9 mg/Kg) or 2,4-dinitrophenol (15 mg/Kg) also induced an increase in $[Mg^{2+}]_c$. Reduced respiration rate from 100/min to 10/min during 30 minutes also caused a time-dependent rise in $[Mg^{2+}]_c$. These increase in $[Mg^{2+}]_c$ were inhibited by pretreatment with KCN. In addition, ATP depletion by $NaNO_2$ or KCN sustainedly increased the $[Mg^{2+}]_o$ in rat erythrocytes. $Mg^{2+}$ efflux was stimulated by KCN in the perfused heart and liver, but not by $NaNO_2$. These results suggest that the activation of $Mg^{2+}$ effluxes into the circulation is directly dependent on the ATP depletion-induced increase in $[Mg^{2+}]_i$ and heart, liver and erythrocytes have a major pool of $Mg^{2+}$ that can be mobilized upon cellular energy state.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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