Myrosinase from Korean cabbage(Bogdoli) was purified and its enzymatic properties were investigated. Myrosinase from the Korean cabbage was purified by DEAE Bio-Gel Sepharose, Concanavalin-A, and Mono-Q column chromatography and exhibited a 55KD molecular weight with a single band on the gel of SDS-PAGE. The enzyme was purified about 21-fold compared to its crude enzyme and a specific activity of purified enzyme was 15, 120units/mg. Optimum pH of the myrosinase was 7.0 in both phosphate and Tris-HCl buffer solutions, the enzyme was stable at pH 6.5~7.0. Optimum temperature of enzyme was 37~38$^{\circ}C$. The enzyme activity was significantly inhibited by Cu2+ and Hg2+, but enhanced by ascorbic acid, resulting in a maximum activity at 1mM ascorbic acid. Among the ascorbic acid analogues, dehydro-ascorbic acid did not affect, whereas others showed a little effect on the enzyme activity, but less than ascorbic acid itself. Reducing agents such as 2-mercaptoethanol and dithiothreitol had no effect on the enzyme activity, but the enzyme activity was enhanced when 2-mercaptoethanol was mixed with ascorbic acid.
Micrococcus luteus purine nucleoside phosphorylase (PNP) has been purified and characterized. The physical and kinetic properties have been described previously. Chemical modification of the enzyme was attempted to gain insight on the active site. The enzyme was inactivated in a time-dependent manner by the arginine- specific modifying reagent phenylglyoxal. There was a linear relationship between the observed rate of inactivation and the phenylglyoxal concentration. At 30 $^{\circ}C$ the bimolecular rate constant for the modification was 0.015 $min^{-1}mM^{-1}$ in 50 mM $NaHCO_3$ buffer, pH 7.5. The plot of logk versus log phenylglyoxal concentration was a strainght line with a slope value of 0.9, indicating that modification of one arginine residue was needed to inactivate the enzyme. Preincubation with saturated solutions of substrates protected the enzyme from inhibition of phenylglyoxal, indicating that reactions with phenylglyoxal were directed at arginyl residues essential for the catalytic functioning of the enzyme.
콩나물은 숙취해소에 좋은 식품으로 잘 알려져 있으나 콩나물 특유의 비린 맛으로 인해 가공식품 원료로 이용하기에 어려움이 있다. 이에 숙취해소효과로 잘 알려진 설탕 및 올리고당과 같은 당을 이용하여 콩나물의 비린 맛을 없애고 섭취를 용이하게 하며 항산화 효과 증진 및 숙취해소에 긍정적인 효과를 기대하고 실험을 설계하였다. 콩나물에 설탕과 올리고당의 2종류 당액($50^{\circ}Bx$)을 25, 50, 75%(w/w) 비율로 첨가하여 1, 3, 6, 12, 24시간 침지하였으며, 침지한 콩나물의 여액을 여과하여 콩나물 당침용액을 샘플로 사용하였다. 세포내 산화적 스트레스 억제 효과를 제외한 모든 실험 결과에서 올리고당이 대조구나 설탕 침지보다 DPPH radical 소거능, 알코올 분해능이 좋은 것을 확인하였다. 총페놀, 총플라보노이드 함량 및 ADH ALDH 효소 활성 실험 결과, 당액 첨가비율 25%에 비해 50%에서 유의적으로 높은 활성을 띄었고, 50%와 75%에서는 유의적인 차이가 발생하지 않았다. 추출시간에 따른 항산화능과 알코올 분해능은 시간 증가에 따른 일정한 증가 추세는 나타나지 않았다. 추출 시간만을 고려하였을 때, DPPH radical 소거능 및 총페놀, 플라보노이드 함량과 알코올 분해능 실험에서 1-3시간 추출 시 대부분 대조구보다 높은 활성을 보였고 추출 시간이 길어질수록 오히려 활성이 떨어지는 경우가 더 많았다. 이러한 결과를 종합할 때 콩나물을 올리고당 당액($50^{\circ}Bx$) 50% (w/w) 비율 이상의 수준에서 단시간 침지하여 추출하는 것만으로도 항산화능과 알코올 분해능이 좋은 콩나물 추출액을 얻을 수 있을 것으로 판단된다. 본 연구를 통하여 콩나물을 이용한 숙취해소 음료를 제조하기 위하여 과량의 당액을 사용함으로서 발생할 수 있는 비용적인 절감의 근거를 마련할 수 있을 것으로 생각된다.
The dependence of activities of Aspergillus phoenicis on the culture conditions in the progesterone transformation reaction was investigated. In the beginning of the reaction, $6{\beta},\;11{\alpha}-dihydroxyprogesterone$ was not produced even at high concentration of $11{\alpha}-hydroxyprogesterone$. However, large amount of the product was obtained after the complete exhaustion of progesterone. When spores of A.phoenicis replaced mycelia as enzyme source, $11{\alpha}-hydroxyprogesterone$ was produced after a considerably long indyction period, and its maximum production rate followed the exponential growth phase. The $6{\beta}-hydroxylation\;of\;11{\alpha}-hydroxyprogesterone$ continued, even after the stationary growth phase. A. phoenicis showed high enzyme activity for these reactions when the phosphate buffer solutions were used in place of the ordinary culture medium. The buffer solutions of low pH gave more yield of $11{\alpha}-hydroxyprogesterone$ than those of high pH. However, the addition of flucose to the buffer solutions did not activate the transformation reaction. The presence of progesterone seems to be necessary for the induction of enzymes for the $6{\beta}-hydroxylation\;of\;11{\alpha}-hydroxyprogesterone\;since\;6{\beta},\;11{\alpha}-dihydroxyprogesterone$ is not produced in the reaction medium containing only $11{\alpha}-hydroxyprogesterone$ as a substrate.
In this work, colorants extraction process from gromwell was studied for making powder form of colorants by solving the high viscosity problem of gromwell extracts. In order to do that, sugar extracted together with colorants must be pre-extracted. For sugar decomposition, gromwell roots were pretreated with various enzyme solutions. The total sugar content of pre-extract with enzyme solution was measured. Accordingly, the effects of enzyme type and pretreatment condition on sugar decomposition were investigated to find appropriate enzyme(amylase, hemicellulase, pectinase) and enzyme activity (100~1000unit), pre-extracted time(3~24hr). Color characteristics and dye uptake of dyed fabrics were evaluated. Gromwell colorants were assessed for their potential antimicrobial activities, which possibly expand their end use as functional pigments. The efficiency of removing sugar was increased in the order of hemicellulase, pectinase, amylase, $H_2O$. Gromwell colorants powder yield was in the range of 4.4% to 9.8% depending on pretreatment enzyme. Gromwell colorants produced RP color on the silk and wool fabrics with good dye uptake. Antimicrobial activity of gromwell colorants will greatly increase its potentiality for applying as functional natural colorants in the future.
Changes in laundering habits and the efficacy claims made for oxygen bleach added to detergents necessitate a deeper investigation into the testing of the washing efficacy of detergents and washing process. The effect of the addition of a sodium percarbonate and bleach activator TAED to an enzyme containing detergent on the soil removal and antimicrobial properties were investigated with the measuring of residual H$_2$O$_2$. The addition of sodium percarbonates to enzyme containing detergent lowered the soil removal of EMPA 116 cloth. But sodium percarbonates had greater effects on that of colored stained cloths such as EMPA 115 and artificially soiled with wine and red pepper while they were presoaked at 20$^{\circ}C$ or higher for So minutes or longer. Most of hydrogen peroxide was remained after washing. Over 99.9% of Staphylococcus aureus on the cotton cloth was removed in every washing solutions, but the cloth washed with enzyme containing detergent or detergent with oxygen bleach didn't show the antimicrobial property.
The effectiveness of three kinds of enzymes (chitinase, ${\beta}$-glucuronidase, and lysing enzyme complex), employed as elicitors to enhance the ${\beta}$-glucan content in the sawdust-based cultivation of cauliflower mushroom (Sparassis latifolia), was examined. The elicitors were applied to the cauliflower mushroom after primordium formation, by spraying the enzyme solutions at three different levels on the sawdust-based medium. Mycelial growth was fully accomplished by the treatments, but the metabolic process during the growth of fruiting bodies was affected. The application of a lysing enzyme resulted in an increase in the ${\beta}$-glucan concentration by up to 31% compared to that of the control. However, the treatment resulted in a decrease in mushroom yield, which necessitated the need to evaluate its economic efficiency. Although we still need to develop a more efficient way for using elicitors to enhance functional metabolites in mushroom cultivation, the results indicate that the elicitation technique can be applied in the cultivation of medicinal/edible mushrooms.
An enzyme preparation from a newly isolated Candida that showed a high lipase activity was subjected to examination of its reaction rate under various conditions. The original and a diluted enzyme solutions showed the zero order curve starting at the point of 50 minutes in time. When PVA was used as an emulsifyer more activity was observed than the case of gum arabic. The optimal temperature and pH were $37{\sim}40^{\circ}C$ and 7.0, respectively. Oleic acid as a fatty acid conferred on the enzyme an inhibitory action while calcium ion a positive one. Sodium cholate yielded an increase in reaction rate at the first stage.
Water/cosolvent mixture system에 사용된 활성을 잃은 효소를 증발을 통해 재생하였다. model system으로 HRP를 이용하였을 때, 활성을 잃은 효소를 증발과 희석을 통해 용매를 제거하였을 경우, 두 경우 모두 열역학적으로 동일한 상황임에도 불구하고 증발에 의해 재생된 효소의 활성이 더 높게 나타났으며, 이는 증발이 활성을 잃은 효소의 재생에 어떤 영향을 주는 것으로 여겨진다. 형광분석법을 이용하여 효소의 구조를 간접적으로 분석하였을 때, 증발에 의한 경우가 희석에 의한 경우보다 효소의 구조적 변형이 적었음이 관찰되었다.이러한 결과들을 통해 증발에 의한 재생 효과는 구조적으로 비활성화된 효소의 활성을 일부 되살리는 기능을 하는 것으로 여겨진다. 한편 용매의 증발에 의해 재생된 효소는 초기 효소의, 유기용매 내에서의 상대적 안정성을 유지하였다.
무에서 DEAE Bio-Gel, Con-A 및 Superose-6 칼럼을 이용하여 myrosinase를 정제하고 그 효소학적 특성을 검토한 결과 myrosinase(II)는 2개의 subunits를 가졌으며, 이들의 분자량은 SDS-GAGE상에서 각각 53 및 39 KD였다. 정제된 무효소의 비활성도는 37,500 units/mg이었으며, 정제도는 44배였다. 최적 활성 pH는 phosphate 및 Tris-HCl 완충액에서 $6.5{\sim}7.0$이었으며, pH7.0에서 그 효소활성이 가장 안정하였다. 활성 최적온도는 $37{\sim}38^{\circ}C$였고, 열안정성은 $30^{\circ}C$ 이하였다. 무 myrosinase에 대한 무기염의 영향은 구리 및 수은 이온은 효소 활성을 매우 저해하며, ascorbic acid의 농도별 영향은 1 mM일 때 최대활성을 나타내었다. Ascorbic acid analogue에 대한 활성은 dehydroascorbic acid에 대해서는 거의 없었으며, 나머지 analogue들도 ascorbic acid보다 상당히 활성이 낮았다. 무 myrosinase에 대한 환원제의 영향은 2-mercaptoethanol과 dithiothreitol에 의해서는 활성을 나타내지 않았으나, 이들을 ascorbic acid 등 2-mercaptoethanol과 함께 첨가하면 활성을 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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