Kim, Jong-Bae;Kim, Hong;Jin, Hyun-Seok;Kim, Young-Sam;Kim, Keun-Sung;Kang, Yun-Sook;Park, Jong-Seok;Lee, Dong-Ha;Woo, Gun-Jon
Biomedical Science Letters
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v.7
no.2
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pp.85-89
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2001
Many Staphylococcus aureus strains produce enterotoxins causing food poisoning. Staphylococcal enterotoxins are classified by serological criteria into five major groups - subtype A to E. It is difficult, time-consuming, and expensive to detect staphylococcal enterotoxins in the clinical laboratory. In this study, we fried to detect the enterotoxin genes of Staphylococcus aureus strains isolated from clinical specimens and Kimbap - rice rolled in a sheet of laver - using multiplex PCR technique. A total of 77 strains of Staphylococcus aureus from clinical specimens and 78 strains from Kimbap were isolated. Among clinical isolates of S. aureus, 60 strains (78.0%) were identified as producing enterotoxins. A total offs strains (91.6%) in the 60 staphylococcal enterotoxin producing strains were enterotoxin subtype C. In case of kimbap: 43 (55.1%) strains were detected to produce enterotoxins and 39 (90.6%) enterotoxin producing strains were subtype A.
At the present study, it was aimed to explore the states of antimicrobial resistant Staphylococcus aureus isolates from 320 pigs and cattle carcass (160 pigs and 160 cattle) slaughtered in Busan province from March 2008 to November 2009. Among 320 samples, 26 of Staphylococcus aureus were isolated from pigs (10.6%) and cattle (5.6%). In antimicrobial susceptibility test, all of the isolates were demonstrated susceptibility to oxacillin, cefoxitin, cephalothin, vancomycin, rifampin and linezolid. But the isolates were showed resistance other antibiotics in order of penicillin (92.3%), gentamicin (76.9%), tetracycline (69.2%), erythromycin (65.4%), and clindamycin (61.5%). In case of enterotoxin production, 7.7% of 2 strains produced enterotoxin A.
Escherichiae-like organisms were isolated from rectal specimens of 56 children who were either in preschool age or in elementary school. The isolated strains were subjected to tests to screen enteropathogens producing heat-labile enterotoxin and susceptibility test to various antibiotics by disc diffusion method on agar plates. Production of heat-labile enterotoxin by the strains was assyed in the sensitive and reproducible cultured adrenal tumor cell system. The assay was sterodogenesis of the cell in the presence of heat-labile enterotoxin. Among 56 strains, gave positive reaction in the test of toxin production. This meant that about 10% of the children population objected to the study harbored the toxigenic strain of enteropathogenes. Some of these toxigenic strains were resistant to the antibiotics employed in the test. This study suggested that considerable population in Korea may harbor entertoxigenic E. coli as a part of intestinal normal flora. The toxigenic strains which are resistant to antibiotics may bring issue of public health in the future.
The Journal of the Korean Society for Microbiology
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v.18
no.1
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pp.53-58
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1983
Enterotoxigenic E. coli is one of causative agents of the infantile diarrhea and traveler's diarrhea. A modified infant mouse assay(IMA) was developed for the detection of heat stable enterotoxin (ST) of E. coli isolated from diarrheal and control infants and assay system was established with using enterotoxin producing reference strains. The supernatant of the 24 hour-shaking culture of E. coli in Casamino Acid Yeast Extract Salt Broth(CYES-2) was ingested orally into the 2-4 day old ICR mice. After the mice were kept at $25^{\circ}C$ for 4 hours, they were sacrificed and the gut weight body weight ratio(GW/BW) was taken as the index of fluid accumulation induced by heat stable enterotoxin of E. coli. The results obtained were as follows; 1. The GW/BW responses of IMA tested with enterotoxin reference strains of E. coli(E. coli O148H28:$ST^+LT^+$, E. coli $O78H^-:ST^+LT^+$, E. coli O15H11:$ST^-LT^+$, E. coli O1H7:$ST^-LT^-$) appeared ta be ST dose-dependent, and not LT-dependent. From the dose-response curve, $25{\mu}l$ of culture supernatant was determined as test amount of the IMA. 2. Frequency distribution of IMA result from 643 strain of E. coli showed normal distribution at low GW/BW ratio and dispersed pattern at high GW/BW ratio. The GW/BW ratios of $0.056{\pm}0.004(mean{\pm}SD)$ of normal distribution which distributed from 0.044 to 0.068(P<0.01) was considered as ST negative. Thus the GW/BW ratio above 0.069 could be regarded as ST positive.
In order to investigate the most efficient and rapid method for the purification of enterotoxin A from Staphylococcus aureus M 7/1, various methods such as ion-exchange chromatography on Amberlite, and CM-cellulose. gel filtration on Sephadex G-50, 75, 100 and Sephacryl, and fast protein liquid chromatography (FPLC) were applied and compared in terms of purity and speed. Although ion-exchange chromatography on Amberlite resin was good enough to remove other materials in culture medium from enterotoxin, and convenient, and fast method, the purity of this method was less than 70%. However. carboxymethyl ion-exchange column showed to be better purity than that of Amberlite method. The yields of these two methods were about 70% and 75%, respectively. When gel filtration methods on Sephadex G-50, 75, 100 and Sephacryl were applied, the purity was about 90%. Fast protein liquid chromatography was found to be the most efficient method in terms of purity (97%) and speed. The combined method, gel filtration after CM-cellulose column (stepwise elution) treatment can be also used as a efficient method particularly for the purification of large volume of sample.
독소원성 대장균(enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC, EC81, serotype O148:H28)이 생산하는 heat labile enterotoxin(LT)를 검색해 본 결과, reversed passive latex agglutination(RPLA)법에 있어서는 2배로 희석한 용액 (50 ng)으로부터 64로 희석한 용액 (1.56 ng)에서까지 양성반응을 보였으며 polymerase chain reaction (PCR)기법에 있어서는 10 ng으로부터 1 pg희석용액에서까지 147-base pair(bp)의 LT DNA fragment가 확인되었다. Clostridium perfringens A형 (NCTC8238, Hobbs serotype 2)이 생산한는 장독소를 검색해 본 결과, RPLA법에 있어서는 2배로 희석한 용액 (50 ng)으로부터 64로 희석한 용액 (1.56 ng)에서 까지 양성반응을 보여 독소원성대장균이 생산하는 LT와 일치하였으나, PCR기법에 있어서는 10ng로부터 10 pg 희석용액에서 까지 354-bp의 DNA fragment가 확인되어 독소원성대장균이 생산하는 LT보다 1/10의 낮은 감도를 보였다. PCR기법은 RPLA법에 비하여 훨씬 신속하고 소량의 sample로 장독소를 확인할 수 있었다.
Kim, Hye-Jung;Kim, Young-Hoon;Lee, Dong-Sun;Paik, Hyun-Dong
Korean Journal of Food Science and Technology
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v.35
no.1
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pp.97-102
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2003
Raw and washed spinaches were tested to evaluate the incidences of Aeromonas hydrophila, Escherichia coli O157:H7, Plesiomonas shigelloides, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia enterocolitica, Bacillus cereus, Campylobacter jejuni, Clostridium perfringens, Listeria monocytogenes, and Staphylococcus aureus. Four pathogenic bacteria were isolated from spinach samples, and identified by morphological and biochemical methods, including API and ATB identification systems. Isolates from MacConkey, Cereus Selective, Clostridium Perfringens, and Baird-Parker agar media were in 99.9, 99.8, 99.9, and 97.8% agreements with A. hydrophila, B. cereus, C. perfringens, and S. aureus at the species level, respectively. SET-RPLA revealed, among the five strains of S. aureus isolates, two produced type A enterotoxin. All five strains of B. cereus isolates produced enterotoxin as revealed with CRET-RPLA.
Clostridium perfringens A형이 생산하는 장독소를 검색해본 결과, RPLA법에 있어서는 2배로 희석한 용액으로부터 64배로 희석한 용액 (NCTC 8239 Hobbs serotype 3 CPE$^+$)에서까지 양성반응을 보였으며 PCR 기법에 있어서는 10 pg 희석 용액까지 364 bp의 장독소 DNA fragment(NCTC 8238 Hobbs serotype 2 CPE$^+$)를 확인 할수 있었다. 그러므로 장독소를 검색하기 위해서는 PCR기법이 RPLA법에 비하여 훨씬 감도가 높음을 확인할 수 있었다.
Objectives: This study was conducted in order to evaluate the microbiological contamination of the indoor air of the lunchrooms at child care centers and investigate the toxin genes and toxin production ability of food-borne pathogens. Methods: A total of 64 child care centers were sampled to test total aerobic bacteria, coliform bacteria, fungi, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus and Salmonella spp. according to the Korea Food Code. All toxin genes of pathogens were detected using the Polymerase Chain Reaction method. The Sthaph. aureus enterotoxin was detected by a Staphylococcus aureus enterotoxin-reversed passive latex agglutination kit. The heamolysin BL (HBL) and non-heamolytic enterotoxin (NHE) produced by B. cereus were detected using a B. cereus enterotoxin-reversed passive latex agglutination kit and Bacillus diarrheal enterotoxin visual immunoassay kit, respectively. Results: The means of total aerobic bacteria and coliform bacteria were $1.91{\pm}1.84$ log CFU/plate and $0.47{\pm}0.62$ log CFU/plate, respectively. The mean of fungi also showed $0.59{\pm}0.71$ log CFU/plate. Among the pathogenic bacteria tested in this study, Staphy. aureus and B. cereus were detected in four (6.3%) and 21 (32.8%) out of 64 indoor air samples from lunchrooms in child care centers, respectively. All Staphy. aureus tested in this study possessed no toxin genes and did not produce enterotoxin. The detection rate of nheABC, hblCDA, entFM and ces toxin gene in B. cereus was 100, 57.1, 76.2 and 0%, respectively. B. cereus isolates were classified into four groups according to the presence or absence of toxin genes. The nheABC gene was the major toxin gene among B. cereus tested in this study. The HBL was detected in 11 out of 21 B. cereus isolates (52.4%) and three B. cereus isolates produced NHE (14.3%). Conclusion: The results indicated that the contamination by microorganisms in the indoor air of lunchrooms was unqualified to supply safe catering in child care centers. The ongoing control of indoor air quality is required.
Aeromonas spp. infections have been reported to cause significant economic losses not only in the ornamental fish industry but also in aquaculture. In December 2022-January 2023, an Aeromonas infection occurred on a goldfish in korea, A gram-negative bacterium was isolated from the skin and internal organs of infected goldfish (Carassius auratus). The results showed that the isolate was identified as Aeromonas veronii using 16S rDNA targeted oilgpnucleotide primers, furthermore characteristics of A. veronii was confirmed by enterotoxin gene, infectious experiment, antibiotic resistance. In-vivo pathogenicity of isolates to goldfsh resulted in 100% mortality in challenged host within one week of post experiment injection. As a result of PCR analysis targeting three enterotoxin-encoding genes, cytotoxic enterotoxin (act) was identified in A. veronii isolate in this study. Antimicrobial susceptibility pattern of isolate showed it was to susceptible to most antimicrobial agents tested but resistant to ampicillin, imipenem, meropenem and clindamycin.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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