Culexpfpfens pollens에 존재하는 superoxide dismutase의 연구를 위한 적정 분석 조건과 우화 전후. 시간 경과에 따른 superoxide dismutase 활성 경향에 대해서 연구하였다. C. pipiens에 존재하는 superoxide dismutase의 활성은 부화 직후부터 지속적으로 감소하다가. 우화 후 흡혈 자극에 의해서 급격하게 증가한다 흡혈 후 36시간이 경과했을 때. 최대의 논성도를 보인 후 급격히 감소하였다. 기관별 분석에서 흡혈 후 가장 높은 활성 증가는 중장에서 일어나고, 머리 흥부. 지꼴체 및 난소에서도 활성의 증가가 나타났다. 흡혈 전에는 2개의 동위효소(SOD-1, soD-2)가 존재하였으나. 흡혈후 36시간된 성체에서는 3개의 동위효소 밴드가 보이는데, 머리에서는 SOD-1만이 나타나고, 가슴에서는 SOD-2. 지방체와 난소에서는 SOD-1과 SOD-2이 존재하였고. 중장에서는 SOD-3가 나타났다. 그러므로 흡혈 후 나타나는 새로운 동위효소는 중장에서 합성됨을 알 수 있다.
Expression of human Cu.Zn-superoxide dismutase (SOD) with activity comparable to human erythrocyte enzyme was achieved in E. coli B21(DE3) by using the pET-17b expression vector containing a T7 promoter. Recombinant human SOD was found in the cytosol of disrupted bacterial cells and represented > 25% of the total bacterial proteins. The protein produced by the E. coli cells was purified using a combination of ammonium sulfate precipitation, Sephacryl S-100 gel filtration and DEAE-Sephacel ion exchange chromatography. The recombinant Cu,Zn-SOD and human erythrocyte enzyme were compared using dismutation activity, SDS-PAGE and immunoblotting analysis. The mass of the subunits was determined to be 15,809 by using a electrospray mass spectrometer. The copper specific chelator. diethyldithiocarbamate (DOC) reacted with the recombinant Cu,Zn-SOD. At $50{\mu}M$ and $100{\mu}M$ concentrations of DOC, the dismutation activity was not inhibited for one hour but gradually reduced after one hour. This result suggests that the reaction of DOC with the enzyme occurred in two distinct phases (phase I and phase II). During phase I of this reaction, one DOC reacted with the copper center, with retention of the dismutation activity while the second DOC displaced the copper, with a loss of activity in phase II.
Effects of oxidative stress on the induction of apoptosis and the activity of antioxidant enzymes were investigated in HL-60 cells using $H_2O$$_2$and cisplatin which generate oxygen species in the cell. Various concentrations of oxidants were treated to cells and at different incubation time, cells were harvested for assays. Cell viability, morphology by propidium iodide staining and DNA fragmentation by agarose gel electrophoresis were observed to determine whether they induce apoptosis. The activity of antioxidant enzymes such as superoxide dismutase and catalase was also measured to evaluate the cellular response to the oxidative damage. The results are as follows: $H_2O$$_2$ induced apoptosis at 10 $\mu$M after 6h incubation, while it took 12h for cisplatin. Both oxidants induced the superoxide dismutase activity at a tolerable low concentration. However, at a concentration which causes apoptotic cell death, the enzyme level was dropped markedly at first and then recovered to the normal level after which it declined again, probably due to cell death. On the other hand, changes in the activity of catalase were not significant at most concentrations except the statistically significant decrease at 24h after 10 $\mu$M-$H_2O$$_2$treatment. In this study, $H_2O$$_2$- and cisplatintreated cells showed similar results in apoptotic response and enzyme activities, suggesting that anticancer activity of cisplatin may be related, at least in part, to the production of oxygen free radicals.
대두 발효 식품의 항산화 활서을 알아보기 위하여 in vitro와 in vivo에서 과산화 지질의 생성 억제와 항산화 관련 효소인 superoxide dismutae(SOD), catalase및 glu-tathion perosidase 활성을 증강시키는 실험을 실시하였다. In vitro 실험에서 항산화 활성을 실험한 결과 대두 발효식품은 POV와 관산화 지질의 생성을 유의성있게 억제시켰으며, quercetin과 catechin와 비교와 결과 SOD 활성은 상당히 높았다. 그리고 대두 발효 식품은 SD계 수컷 쥐에 2주간 사료에 첨가하여 먹인 후 항산화 활성을 측정한결과, 대두 발효식품을 쥐에 투여하여 사염화 탄소($CCl_4$)로 손상을 유도시킨 뒤 쥐의 간 microsome의 지질 과산화를 유의성 있게 억제 시켰다. 항산화 관련 효소인 SOD, catalase 및 glu-tathion perosidase 활성은 유의성 있게 증가하였고, 지질 과산화도 억제시켰다. 따라서 대두 발효 식품은 산화 스트레스로 생성되는 활성 산소의 소거에 효과적임을 알 수 있다.
Fifty-four Korean native and 28 foreign varieties harvested in 1998 and 1999 were examined for superoxide dismutase (SOD) and peroxidase (POD) activities. The SOD and POD activities of leaves extracts in Korean native and foreign rice varieties showed variation at the heading stage. The activities of SOD and POD changed with growth stage. In comparison of storage duration, the SOD and POD activities of the extract from three months stored seeds in Korean native (CV=53.3%) and foreign rice (CV=57.9%) varieties were higher than that of stored rices for a year in seed extracts although the activities among varieties did not show significant variation. Also, the averaged activity of foreign rice varieties (SOD=12.9%) was relatively higher than that of korean native rice varieties (SOD=10.7%). The test of activity at the enzymatic level related to antioxidative activity suggests that the rice varieties with higher antioxidative potentials can be developed and also may provide information with rice breeder to breed rice variety with a high antioxidative activity.
To study the relationship between oxygen tolerance and enzyme activity in the oxygen metabolism of bifidobacteria, the activities of catalase, superoxide dismutase (SOD), NADH oxidase and NADH peroxidase from six typical bifidobacteria and other bacteria were assayed by spectrophotometry. Catalase activity was hardly detected in any of the bifidobacteria tested. SOD activity was detected in every species including the Clostridium species. In particular SOD activity was notably high in the aerosensitive Bifidobacterium adolescentis. This fact indicates that SOD activity is not a critical factor to ensure aerotolerance. Aerosensitive B. adolescentis showed very low NADH oxidative enzyme activity whereas other aerotolerant bifidobacteria exhibited considerable activity for the enzymes. It seems that detoxification of $H_2O_2$ by NADH oxidative enzymes might be an important factor in improving for aerotolerant bifidobacteria survival rates in an oxygen environment.
The superoxide dismutase (SOD) activity of seven Bifidobacterium spp. strains was examined by an indirect SOD assay method. Some Bifidobacterium spp. showed significant levels of SOD activity. However, we could not observe any significant differences between anaerobic and aerobic cultures. Furthermore, although several Bifidobacterium spp. exhibited some degree of tolerance to paraquat which produces superoxide radicals, the apparent SOD activity of these strains was not correlated with their resistance to paraquat. In addition, when we added increasing amounts of manganese or iron to MRS medium which had been prepared without either of the metal ions, the apparent SOD activity of cell free extracts (CFEs) was increased with increasing concentration of both metal ions. To our surprise, the heat-denatured CFEs also showed nearly identical correlative patterns. Based on these results, the apparent SOD activity was likely due to a nonenzymatic dismutation. These results strongly suggest that high concentration of divalent metal ions ($Mn^{2+}$, $Fe^{2+}$) in MRS medium result in nonenzymatic dismutation which can lead to false positive SOD activities in Bifidobacerium spp.
Previous studies have shown that methanol extract and its butanol fraction of Carthamus tinctorius L. Semen have the hepatoprotective effect on the CCl4-induced hepatotoxicity. The hepatoprotective effect of the subfractions of butanol fraction has been evaluated by analyzing oxygen free radical scavenging enzyme activities and histopathological examinations. In BS-5 subfraction treated group, the activity of superoxide dismutase has been significantly increased as compared with that of CCl4, treated rats. Antioxidant activity has been evaluated by the examination of the scavenging activity against 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical. BS-5 subfraction has shown strong antioxidant activities. The histopathological examination showed that the treatment of BS-5 subfraction has relieved the ballooning degeneration of hepatocytes which had been generated by CCl4. It appears that the protective effect of BS-5 subfraction would be mediated of the attenuation of lipid peroxidation by acting as a free radical scavenger, which were based on the increase of superoxide dismutase activity.
망초(Conyza bonariensis)에서 제초제 paraquat 저항성을 구명하기 위해 paraquat가 생성하는 superoxide 라디칼과 과산화수소 등의 유해 산소 물질을 제거하는 데에 관련된 효소의 활성을 저항성 종과 감수성 종의 망초에서 측정하였다. 경작지 부근에 자라는 망초는 비경작지에 자라는 망초에 비해 paraquat 저항성이 강하였다. 국내에서 paraquat를 자주 살포하는 지역에서 저항성 종의 망초가 출현하고 있음을 처음으로 보고한다. 저항성 종의 superoxide dismutase의 활성, ascorbate peroxidase의 활성, 그리고 glutathione reductase의 활성은 감수성의 그것에 비해 각각 약 20%, 44%, 그리고 64% 높게 나타났다. 이러한 결과로부터 paraquat에 대한 망초의 저항성은 superoxide dismutase, ascorbate peroxidase, 그리고 glutathione reductase 등으로 구성된 효소의 유해 산소 물질을 제거하는 효율성에 부분적으로 달려 있을 수 있다고 사료된다.
Effects of exposure to a neurotoxicant, fenitrothion on antioxidant enzyme activities in Chironomus riparius Mg. (Diptera, Chironomidae) larvae were evaluated under laboratory conditions. Exposure to this chemical led to an increase of cupper, zinc type superoxide dismutase and manganese type superoxide dismutase activities and to a decrease of glutathion peroxidase activity. An activation of catalase was observed in the larvae exposed to high fenitrothion concentration. The response of superoxide dismutase was rapid and sensitive to low chemical concentrations, but changes in catalase, total peroxidase and glutathion peroxidase were less sensitive. In this study, antioxidant enzyme activities in Chironomus riparius larvae were identified as pertinent biomarkers for environmental monitoring.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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