자유생활 아메바인 Naegleria fowleri는 비강을 통해 인체에 들어와 출혈성 수막뇌염을 일으켜 감염된 사람의 대부분을 일주일 이내에 사망하게 하는 원충이다. 이 실험에서는 N. fowleri에 특이한 단세포군 항체를 만들어 이의 특성 및 그 이용 가능성을 알아보고자 하였다. 7 종류의 단세포군 항체(Nf 1, Nf 2, NE 256, Nf 279, Nf 27, Nf 154, Nf 137)를 제조하였는데 각각의 isotope은 IgGl이 두 종류(Nf 27, Nf 154), IgG3가 1 종류(Nf 137), IgA가 4 종류(Nf 1, Nf 2, Nf 256, Nf 279)이었다. 이들 항체를 N. fwoleri와 다른 종류의 아메바를 항원으로 하여 효소표식 면역검사법을 시행하여 Nf 1 및 Nf 256 항체를 제외한 5종류의 항체가 N. fowleri에 특이한 항체임을 확인하였다. 또한 간접 형광항체법을 통하여 NF 256 항체를 제외한 6 종류의 단세포군 항체가 세포막의 일부에 결합하였음을 관찰하였다. Nf 154 항체를 이용한 immunoperoxidase 염색에서도 세포막의 반응을 관찰하였다. 단세포를 항체가 N. fowleri를 응집시키는지 알아보고자 항체를 N. fowleri 영양형과 반응시켰더니 Nf 27 항 체를 제외한 5 종류의 단세포를 항체에 의해 응집이 일어남을 알 수 있었으며 응집된 덩 양형을 보체로 처리한 후 CGVS배지에서 배양하였더니 영양형의 증식이 억제되었다. 또한 2종류의 단세포군 항체(Nf 2, Nf 154)는 조직 세포(Chinese hamster ovary cell: CHO)에 대한 N.fowleri의 세포독성을 저하시켰다. 단세포군 항채와 반응하는 항원의 분자량을 알아보고자 EITB(Enzyme-linked immunoelectrotransfer blot)를 시행하였는데 Nf 279 항체는 25 kDa 및 28 kDa, Nf 154 항체는 43 kDa, N( 137 항체는 29 kDa에 해당되는 분획에서 항원항체반응을 나타내었다. 이상의 성적을 종합하면 N. fowleri에 대한 7종류의 IgG., IgG3 및 IgA 단세포군 항체를 생산하였다. 그중 Nf 256 항체를 제외한 6 종류는 N. fowleri이 세포막 성분중 28 kDa-43 kDa의 항원과 반응하는 특이한 항체임을 관찰할 수 있었다. 또한 이 단세포를 항체들은 영양형을 응집시키며, 시험관 내에서의 증식을 억제시키고 CHO 세포에 대한 N. fowleri의 세포 독성을 저하시키는 성질을 가지고 있음을 알 수 있었다.
DA-5018, a new capsaicin derivative, showed potent analgesic effect comparable to that of morphine in various experimental acute pain models. in this study, whether the analgesic mechanism of DA-5018 is related to opiate receptors or prostanoids was investigated. The affinity of DA-5018 for opiate receptor was determined by receptor binding assay. The Ki values of DA-5018 for nonspecific and specific $\mu$, $textsc{k}$, $\delta$-opiate receptor was 299$\pm$8.88, 735$\pm$215, 2930$\pm$ 163, 1550$\pm$813 nM, respectively and DA-5018 exhibited lower affinity than morphine. DA-5018 (10-"~3$\times$10-′M) inhibited electrically-evoked contractions of the guinea ply ileum and rat vas deferens, and these inhibition was not antagonized by naloxone(10 nM), an opiate receptor antagonist. Antagonism of analgesic effect of 7A-5018 by naloxone was examined by tail pinch test. Analgesic action of DA-5018(0.1 ~2 mg/kg, 5.c.) was not antagonized by naloxone(1 mg/rg, i.p.). These results indicate that pharmacological action of DA-5018 is not related with opiate receptor. Cyclooxygenase and 5-lipoxygenase activities in rat peritoneal neutrophil treated with A23187 and arachidonic acid were measured by radioimmunoassay. DA-5018 stimulated the cyclooxygenase activity and the concentration show-ing the two fold increase of activity was 124$\mu$M. DA-5018 slightly inhibited 5-lipoxygenase activity and these results together indicate that analgesic action of 3A-5018 is not mediated through inhibition of cyclooxy genase or lipoxygenase. These results suggest that the analgesic effect of DA-5018 is not due to blocking opiate receptor or to inhibiting the synthesis of prostanoids in the arachidonic acid metabolism pathway.
KIM, HOON;SUNGMIN F. KIM;DONG HO AHN;JlN HO LEE;MOO YOUNG PACK
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제5권1호
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pp.26-30
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1995
The cytoplasmic endo-$\beta$-l, 4-glucanase (endoglucanase) was purified from cell extracts of Escherichia coli (pBS1) transformant carrying the Bacillus subtilis endo-$\beta$-l, 4-glucanase gene after full growth, and its molecular weight was found to be 52 kilodaltons (kDa). The endo-$\beta$-l, 4-glucanase isolated from the periplasmic space was smaller than 52-kDa cytoplasmic enzyme. The 52-kDa endoglucanase was found to be cleaved in the periplasm and finally converted to 34.5-kDa protein. Small amounts of both 52-kDa and 34.5-kDa proteins were secreted into the culture broth. The cleavage took place in the C-terminal portion of the enzyme. The N-terminal amino acid residues of both 52-kDa and 34.5-kDa enzymes were determined to be the same, Ala, the 30th residue of the primary translation product. Cleavage of the C-terminal portion showed to have no significant effect on the basic enzyme properties.
Park, Kyeong-Tae;Kang, Da-Won;Han, Jae-Hee;Hur, Chang-Gi;Hong, Seong-Geun
The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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제7권6호
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pp.333-339
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2003
It has been demonstrated that an unidentified cytosolic factor(s) reduces $K_{ACh}$ channel function. Therefore, this study attempted to elucidate the cytosolic factor. Fresh cytosol isolated from normal heart (FC) depressed the $K_{ACh}$ channel activity, but cytosol isolated from the ischemic hearts (IC) did not modulate the channel function. Electrophorectic analysis revealed that a protein of ${\sim}80 kDa was markedly reduced or even lost in IC. By using peptide sequencing analysis and Western blot, this 80 kDa protein was identified as transferrin (receptor-mediated $Fe^{3+}$ transporter, 76 kDa). Direct application of transferrin (100 nM) to the cytoplasmic side of inside-out patches decreased the open probability ($P_o$, 12.7${\pm}6.4%, n=4) without change in mean open time (${\tau}_o$, $98.5{\pm}1.3$%, n=4). However, the equimolar apotransferrin, which is free of $Fe^{3+}$, had no effect on the channel activity (N*$P_o$, $129.1{\pm}13.5$%, n=3). Directly applied $Fe^{3+}$ (100 nM) showed results similar to those of transferrin (N*$P_o$: $21.1{\pm}3.9$%, n=5). However $Fe^{2+}$ failed to reduce the channel function (N*$P_o$, $106.3{\pm}26.8$%, n=5). Interestingly, trivalent cation La3+ inhibited N*$P_o$ of the channel ($6.1{\pm}3.0$%, n=3). Taken together, these results suggest that $Fe^{3+}$ bound to transferrin can modulate the $K_{ACh}$ channel function by its electrical property as a polyvalent cation.
The effect of different anisotropy and stress ratio on fatigue crack propagation behavior was investigated under various stress ratio(R=-0.4, -0.2, 0.2, 0.2, 0.4) using pure titanium sheet used in aerospace, chemical and food industry. The rack closure behavior under constant load amplitude fatigue crack propagation test was examined. Fatigue crack propagation rate da/dN was estimated in terms of effective stress intensity factor range, $\Delta$K$_{eff}$, regardless of various stress ratio but was influenced by anisotropy. Also, it was found that the effect of anisotropy was considerably decreased but still not negligible when he da/dN was evaluated by a conventional parameter, $\Delta$$K_{eff}$/E and when the modified da/dN.$\sqrt{\varepsilon}_f$ was evaluated by $\Delta$$K_{eff}$/E. On the other hand, da/dN could be evaluated uniquely by effective new parameter, $\Delta$K$_{eff}$/$sigma_{ys}$, regardless of anisotropy, as int he following equation da/dN=C''[\frac{{\Delta}K_{eff}}{{\sigma}_{ys}}]^{n''}. And effective stress intensity factor range ratio, U was estimated by the following equation with respect to the ratio of reversed plastic zone size, $\Delta r_{p}$ to monotonic plastic zone size, $r_p$ regardless of stress ratio and anisotropy. U=-4.45$(\Delta r_{p}/r_{p})^{2}$+4.1$(\Delta r_{p}/r_{p})$+0.245_{p})$+0.245
Using two drugs, tunicamycin and brefeldin A, which affect protein processing, we investigated the intracellular processing mechanism of secreted aspartyl proteinase 1 (SAPl) of Candide albicans. Three intracellular forms of SAPI were detected by immunoblotting using menoclonal antibody (MAb) CAPl. Their molecular weights were approximately 40, 41 and 45 kDa, respectively. The 41 kDa protein is a glycoprotein and may be the same as the extracellular form judging by its molecular mass. The 40 kDa protein was the unglycosylated form and its molecular mass coincided with deglycosylated SAPl and the 45 kDa protein was also the unglycosylated form. Neither the 40 and 45 kDa proteins were detected in the culture supernatant of C. albicans. These suggested that the 40 and 45 kDa proteins might be intracellular precursor forms of SAPI. These results show that SAPI is translated as a 45 kDa precusor form in the endoplasmic reticulum and the 45 kDa precursor farm undergoes proteolytic cleavage after translocation into the Golgi apparatus, generating the 40 kDa precursor form. This 40 kDa precursor is converted into a 41 kDa mature form through glycosylation in the Golgi apparatus. The mature form of the 41 kDa protein is sorted into secretary vesicles and finally released into the extracellular space through membrane fusion. When the glycan region of SAPl was digested with N-glycosidase F, both stability and activity of the enzyme decreased. These results indicate that the glycan attached to the enzyme may, at least in parti be related to enzyme stability and activity.
본 연구는 환원증류법을 사용하여 축사, 매립지, 시설재배지 등 높은 수준의 질산태 질소로 오염된 토양의 질산태질소 함량을 정확히 측정하는데 있어서, Devarda's alloy 의 입자 크기가 질산태 질소의 회수율에 미치는 효과와 Devarda's alloy의 처리량과 환원된 질산태 질소의 양과의 상관관계, 고농도의 질산태 질소를 함유한 토양 추출액의 정확한 분석을 위한 적절한 접근방법을 파악하고자 수행되었다. 본 연구에서 시험된 각 Devarda's alloy는 입자 크기의 분포가 서로 달랐으며, 이는 다소 높은 질산태 질소 조건인 1 mg과 2 mg $NO_3$-N에서 서로 다른 질산태 질소 회수율로 반영 되었다. 한편, 고농도의 질산태 질소 조건에서는 모든 Devarda's alloy들이 용액 중 질산태 질소의 함량이 증가할수록 급격히 질산태 질소의 회수율이 감소하는 경향을 보였으나, 시험된 모든 Devarda's alloy들은 예상과 달리, 단위 질량 당 환원된 질산태 질소의 양이 용액중 질산태 질소의 양에 비례하여 감소하는 경향을 보였다. 이상의 연구결과들은 높은 수준의 질산태 질소로 오염된 토양 시료를 안정적으로 분석하기 위해서는 Devarda's alloy의 입자 크기 분포를 감안한 충분한 처리, 그리고 두 수준 이상의 Devarda's alloy를 처리한 후 회수된 질산태 질소량 변화를 살피는 것이 필요하다는 것을 제시한다. 아울러, 본 연구에서 발견된 질산태 질소량의 화학적 비당량성은 앞으로의 연구를 통해 보다 자세히 조사되어야 할 것으로 사료된다.
Purpose: The purpose of this study was to know the physical properties of UDMA dental composite resins containing two photosensitizers, PD, DA, as a photosensitizer instead of CQ. We want to know Remaining Double Bond(RDB) of UDMA unfilled resin and diametral tensile strength and flexural strength of composite resin containing PD and DA were compared with those of CQ, most widely used photosensitizer for dental composite resins. Methods: The RDB of UDMA studied by FT-IR spectroscopy increased with irradiation time. The composite resins were tested for their physical properties. The dental composite resins were made with UDMA as a monomer, silanized silica as filler, N,N-dimethylaminoethyl methacrylate (DAEM) as amine initiator, and one of the two kinds of new photosensitizers. Results: The relative RDB of UDMA was in the order: DA > CQ > PD but the physical properties of the composite resins show PD and DA with higher results compared with that containing CQ. The reason for the results is that PD and DA serve not only as a photosensitizer but also as a photo-crosslinking agent. Conclusion: PD and DA show as effective photosensizers, suitable for UDMA dental composite resin compare with a higher efficiency than CQ.
The antimicrobial activities of the copolymer of N,N'-dimethyl- N,N'-diallyl ammonium chloride(DMDAAC) and diallyl amino(DA) were investigated. The copolymer of DMDAAC and DA was prepared by free radical Polymerization through an intra-intermolecular propagation mechanism ie, cyclopolymerization. The copolymer was, then, reacted with cyanuric chloride for reactivity with hydroxyl group of cellulose. Cotton fabrics were finished by synthesized polymer, and their antimicrobial activities and fastness to launderings were tested. Dichlorotriazinyl DMDAAC-DA copolymer has MIC value of 1ppm against S. aureus and 10ppm against K pneumoniae. The antimicrobial fastness of the finished cotton to launderings were good enough to show colony reduction above 70% against S. aureus and K pneumoniae after 50 repeated laundering in anionic commercial detergent. Optimum treatment concentrations of the polymer were 0.5% in cold pad-batch method, and 0.1% in pad-dry method.
Production and some properties of chitinolytic enzymes were investigated by 80% ammonium sulfate precipitates (crude enzymes) from culture supernatant of antagonistic bacteria, Chromobacterium violaceum strain C-61 and strain C-72, Aeromonas hydrophila, Aeromonas caviae, and Serratia marcescens. The maximum production of chitinase was obtained from the 3-day culture at 28$^{\circ}C$ in C. violaceum stains, the 6-day culture in S. marcescens, and the 2-day culture in A. hydrophila and A. caviae. In the optimum culture periods, chitinase activity of C. violaceum strains C-61 was 1.5, 5.5, 12.0 and 11.3 times higher than those of strain C-72, S. marcescens, A. hydrophila and A. caviae, respectively. However, N,N'-diacetylchitobiase activity was 3.2 times higher in S. marcescens than in C. violaceum strain C-61, and that of Aeromonas spp.was very low. On gels containing glycol chitin, chitinase of C. violaceum strains showed four isoforms of 54-, 52-, 50- and 37-kDa, whereas there were four isoforms of 58-, 52-, 48- and 38-kDa in S. arcescens, three isoforms of 70-, 58- and 54-kDa in A. hydrophila and six isoforms of 90-, 79-, 71-, 63-, 58- and 38-kDa in A. caviae. The chitinase of C. violaceum strain C-61 was most active at pH 7.0 and at 5$0^{\circ}C$ and was stable in ranges of pH 5.0~10.0 for 2 hours and of 0~5$0^{\circ}C$ for 30 min.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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