To search for the antifungal substances, various actino-mycete isolates were obtained from various soils of Korea using plate dilution method on the humic acid vitamin agar plates. In the screening procedures using a dual culture method, 32 actionomycete isolates were selected, which showed the inhibitory activity against mycelial growth of plant pathogenic fungi Altirnaria mali, Colletotrichum gloeosporides, Fusarium oxysporum f.sp. cucumerinum, Magnaporthe grisea, Phytophthora capsici, and Rhizoctonia solani. Bioassay of the crude extracts from culture filtrates and mycelial mets revealed that 12 antagonistic actionomycetes produced highly active antifungal substances. Actinomycete strain S5-55 which showed the substantial antifungal activity against the tested fungi was selected for production of the antifungal substances. Based on the cytochemical and morphological characteristics, strain S5-55 was identified as a Streptomyces species. The results of the numerical identification using the TAXON program confirmed that Streptomyces strain S5-55 was identical with Streptomyces humidus including in TAXON major cluster 19. The production of antifungal substance was most favorable when S. humidus strain S5-55 was cultivated for 10 dats on soluble starch broth supplemented with $K_2$HPO$_4$. The antifungal substances active against the plant pathogenic fungi P. capsici and M. grisea were partially purified using $\textrm{C}_{18}$ reversed-phase column chromatography.
In this study, we investigated Indole-3-acetic acid (IAA) production by a rice phylloplane bacteria, Enterobacter sp. DMKU-RP206, using sweet whey as a feed stock instead of lactose. We succeeded in using sweet whey for Enterobacter sp. DMKU-RP206 to produce 3,963.0 mg IAA/l with the optimal medium containing 1.48% sweet whey, 1.42% yeast extract and 0.88% $\text\tiny{L}$-tryptophan. The medium pH was adjusted to 6 and the culture conditions were shaking at 200 rpm on an orbital shaker at $30^{\circ}C$ for 3 days. We also evaluated the effect of IAA in culture filtrates of Enterobacter sp. DMKU-RP206 on the promotion of jasmine rice growth in a pot experiment. Compared with the negative control (without IAA), the result showed that biosynthetic IAA produced by Enterobacter sp. DMKU-RP206 significantly increased the growth of jasmine rice (Oryza sativa L. cv. KDML105) in terms of length and dry weight of shoot. This work thus reveals the impact of IAA produced by Enterobacter sp. on the promotion of jasmine rice growth.
The present study demonstrated lymphocystis disease virus (LCDV) propagation through cytopathic effects (CPE) formation and LCDV detection in olive flounder fin (FFN) cells by polymerase chain reaction (PCR) and fluorescent antibody technique (FAT) methods. Tissue filtrates from the cluster cells produced CPE in FFN cells, which initially cells became enlarged and gradually underwent fusion en masse. Infectivity of culture grown LCDV using the FFN cells reached $10^{2.3}$$TCID_{50}$/ml at 4 days post infection and the highest titer was measured $10^{6.5}$$TCID_{50}$/ml at 12 days. The viral DNA was detected in the cell culture supernatants showing CPE and the CPE cells by PCR. Antigen specific strong fluorescence reacting with monoclonal antibody against the virus revealed the presence of viral antigen in the cytoplasm of infected FFN cells. These results suggest that the FFN cell line originated from the olive flounder has a susceptibility of the LCDV.
Nam, Hyo-Song;Yang, Hyun-Ju;Oh, Byung Jun;Anderson, Anne J.;Kim, Young Cheol
The Plant Pathology Journal
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제32권3호
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pp.273-280
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2016
Most biocontrol agents for plant diseases have been isolated from sources such as soils and plants. As an alternative source, we examined the feces of tertiary larvae of the herbivorous rhino beetle, Allomyrina dichotoma for presence of biocontrol-active microbes. The initial screen was performed to detect antifungal activity against two common fungal plant pathogens. The strain with strongest antifungal activity was identified as Bacillus amyloliquefaciens KB3. The inhibitory activity of this strain correlated with lipopeptide productions, including iturin A and surfactin. Production of these surfactants in the KB3 isolate varied with the culture phase and growth medium used. In planta biocontrol activities of cell-free culture filtrates of KB3 were similar to those of the commercial biocontrol agent, B. subtilis QST-713. These results support the presence of microbes with the potential to inhibit fungal growth, such as plant pathogens, in diverse ecological niches.
Five types of agricultural wastes were used for the production of xylanolytic enzyme by Aspergillus flavus K-03. All wastes materials supported high levels of xylanase and ${\beta}-xylosidase$ production. A high level of proteolytic activity was observed in barley and rice bran cultures, while only a weak proteolytic activity was detected in corn cob, barley and rice straw cultures. Maximum production of xylanase was achieved in basal liquid medium containing rice barn as carbon source for 5 days of culture at pH 6.5 and $25^{\circ}C$. The xylanolytic enzyme of A. flavus K-03 showed low thermostability. The times required for 50% reduction of the initial enzyme activity were 90 min at $40^{\circ}C$, 13 min at $50^{\circ}C$, and 3 min at $60^{\circ}C$. Xylanolytic activity showed the highest level at pH $5.5{\sim}10.5$ and more than 70% of the original activity was retained at pH 6.5 and 7.0. The higher stability of xylanolytic enzymes in the broad range of alkaline pH is useful for utilization of the enzymes in industrial process requiring in alkaline conditions. Moreover, the highest production of xylanolytic enzyme was obtained when 0.5% of rice bran was supplied in basal liquid medium. SDS-PAGE analysis revealed a single xylanase band of approximately 28.5 kDa from the culture filtrates.
With an aim to disclose causal factors scably grains intoxications, the screening of toxic Fusaria and the detection of toxic priniciples were performed in respect of cultured cells bioassay with HeLa cells, skin-necrotizing effect, histopathological investigation and also chromatographic analysis sith following results ; 1. Among the fungi, Fusarium sp. F-27, F-63 and F-61 were highly toxic to mice, causing liver injury characterized necrosis and inflammation. 2. HeLa cell culture bioassay demonstrated that the cell of the isolated strains of Fusaria were suspected to produce toxic material (Fusarenon-X). 3. The culture filtrates of Fusarium nivale Fn-2B, F-27, and F-63, were injected subcutaneously, and caused inflammation followed by crust on the skin ICR-mice. 4. The observation method of skin-necrotizing effect to the mice can be used to the screening to the toxin-producing fungi isolated from many fusarial contaminations.
KIM SANG-WOO;HWANG HYE-JIN;CHOI JANG-WON;YUN JONG-WON
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제15권3호
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pp.560-567
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2005
Three groups of exopolysaccharides (EPSs) (designated as Fr-I, Fr-II, and Fr-III) were isolated from the culture filtrates of Paecilomyces sinclairii by gel filtration chromatography on Sepharose CL-4B. Their molecular characteristics were examined by multi-angle laser light scattering (MALLS) connected online to a size exclusion chromatography (SEC) and refractive index (RI) detector system. The weight-average molar mass of Fr-I, Fr-II, and Fr-III of EPSs were determined to be $1.540{\times}10^6,\;6.302{\times}10^4$, and $9.389{\times}10^4\;g/mol$, respectively. All three EPSs showed a fairly low polydispersity indice, ranging from 1.008 to 1.059 (nearly mono disperse behavior), and showed different carbohydrates and amino acids compositions; all fractions of EPSs consisted of mainly cystine, valine, and arginine in the protein moiety, and mainly ribose, galactose, and glucose in the carbohydrate moiety. The determination of gyration radii of the EPSs in SEC/MALLS analysis revealed the molecular shape of the Fr-I to be a rod-like structure, whereas the Fr-II and Fr-III had a random-coil structure in an aqueous solution.
A large patch disease caused by Rhizoctonia solani AG2-2(IV) is a serious problem in turfgrass sites including golf courses and sports fields in Korea. The objectives of this study were to isolate some antagonistic microorganisms and to explain some involving mechanisms. Initially single colonies which were formed from the filtrates of various soil samples were obtained from LB culture and then co-cultured with R.solani AG2-2(IV) on PDA plate to explore some antagonistic microbes against for large patch fungus, Rhizoctonia solani AG2-2(IV). Out of total 82 antagonistic isolates which commonly had inhibition effect on Rhizoctonia solani AG2-2(IV) mycelial growth, one candidate (YPIN22) showed the most antifungal effect, which was confirmed by the longest distance from the edge of bacterial colony to the mycelial edge of the Rhizoctonia solani AG2-2(IV) in the dual culture. A succeeding investigation was to test any potential effect of the isolate on growth inhibition of 5 other turfgrass pathogens including R. solani solani AG2-2(IIIB), P. ultimum, C. caudatum, C. lunata, and F.oxysporum. Preliminary result indicated that the new isolate YPIN22 was also found to have antagonistic potential on the growth inhibition of those turfgrass pathogenic fungi, which was explained by inhibition zones ranging from 8 to 22mm. A further explanation of some characteristics of the isolate YPIN22 will be discussed in detail.
Sixty-one endophytic fungus strains with different colony morphologies were isolated from the leaves, stems and roots of Tephrosia purpurea with colonization rates of 66.95%, 37.50%, and 26.92%, respectively. Based on internal transcribed spacer sequence analysis, 61 isolates were classified into 16 genera belonging to 3 classes under the phylum Ascomycota. Of the 61 isolates, 6 (9.84%) exhibited antifungal activity against one or more indicator plant pathogenic fungi according to the dual culture test. Isolate TPL25 had the broadest antifungal spectrum of activity, and isolate TPL35 was active against 5 plant pathogenic fungi. Furthermore, culture filtrates of TPL25 and TPL35 exhibited greater than 80% growth inhibition against Sclerotinia sclerotiorum. We conclude that the endophytic fungal strains TPL25 and TPL35 are promising sources of bioactive compounds.
전국 각지에서 채집한 사멸곤충에서 분리한 곤충 기생성 진균이 생산하는 살충성 생리활성물질을 탐색한 결과 곰팡이 분리주 CNAB-63 균주가 목화진딧물과 점박이응애 모두에 대해 다른 분리균주들보다 비교적 높은 살충효과를 보인 바, 본 균주가 생산하는 살충성분을 각종 chromatography로 분리 정제하였다. 정제된 활성물질 CNAB는 점박이응애에서 66.59%, 목화진딧물에서 52.96%의 살충효과를 보였으며, 그 외에도 온실가루이에 살충효과를 보였으나 배추좀나방에는 미미한 살충효과를 보였다. 한편 활성물질 CNAB는 $100\;{\mu}g/disk$ 농도에서 곰팡이, 효모, 세균류에 전혀 항균활성을 보이지 않았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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