• 한국식품과학회지
• /
• 제30권6호
• /
• pp.1415-1419
• /
• 1998

시설 원예산물 중 곰팡이 독소 생성능이 있는 균주의 오염여부를 조사하기 위해 진주를 비롯한 서부 경남 일원과 경북 안동 근교에서 가지, 메론, 배추, 상추, 오이, 수박, 참외, 토마토, 딸기, 및 그 토양 등의 시료를 수집하여 ochratoxin A 생성균의 오염정도를 관찰하였다. 분석방법은 indirect competitive ELISA 법을 사용하였으며, HPLC법과도 비교 분석하였다. 그 결과 경남 일원과 경북 안동 근교에서 총 192점의 시료를 분리하여 균분리를 실시한 결과 Aspergillus속 142균주, Penicillium속 153균주를 분리하였다. 분리된 균은 SLS배지로 $28^{\circ}C$, 15일간 배양한 후 indirect competitive ELISA 법에 의해 ochratoxin A의 생성여부를 검색하였다. 그 결과 Penicillium속 5균주에서 ochratoxin A 생성이 확인되었으며 검출량은 $0.084{\sim}2.128\;{\mu}g/mL$이었고, 수박에서 분리한 균주가 $2.128\;{\mu}g/mL$로 가장 많은 ochratoxin A를 생산하였다. 그러나 Aspergillus속은 모두 음성반응을 나타내었다. ELISA법에서 ochratoxin A를 생성하는 것으로 나타난 균주를 HPLC법에 의해 확인한 결과 ochratoxin A의 생성이 확인되었으며 생성량은 ELISA 결과와 비슷하였다.

• 대한수의학회지
• /
• 제38권2호
• /
• pp.297-303
• /
• 1998

For the extraction and measurement of zearalenone in the corn, bean, wheat and barley contaminated with Fusarium graminearum, the zearalenone-oxime, zearalenone-oxime BSA and zearalenone monoclonal antibodies were studied to develop and apply the direct competitive enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The extraction range of zearalenone with the monoclonal antibodies produced in this experiment was 10ng to 500ng/g feed and the 50% inhibition value was 50ng/ml. The mean recoveries of zearalenone artificially spiked in the ground corn were 89%. The specificity of F-2 monoclonal antibody for the analogues was favorable for the direct competitive ELISA. The result of the experiment showed the zearalenone in the corn, bean, wheat and barely naturally contaminated with the mold would be suitable for extraction and measurement with the monoclonal antibodies.

• 한국식품영양과학회지
• /
• 제27권6호
• /
• pp.1152-1159
• /
• 1998

In order to develop more rapid and reproducible analysis of biotin known as vitamin H, attempts were made to establish the condition for enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) compared with traditional microbiological assay(MBA). Antibiotin and antiserum were obtained from the immunized rabbits injected with emulsion of biotin KLH conjugate and Freund's adjuvant. The antiserum showed cross reactivity on biocytin, a derivative of biotin, which is converted to biotin in intestine, at the rate of 177%(median inhibitory concentration(IC50)=12.58ppb), but not on other derivatives such as desthiobiotin, diaminobiotin and 2 imino biotin. Specific antibody for biotin was purified from the antiserum through protein A column and desalting column. The conditions of competitive direct ELISA (cdELISA) were established. Detection range of biotin concentration by cdELISA was 0.01∼300ng/ ml(ppb). In the spike test with milk, fruit flake and pine carrot juice, the correlation coefficient between two methods of MBA and ELISA was reliably consistent at the value of r=0.992. But detection of biotin by microbiological assay(MBA) was rather restricted in range and nonspecific. Detection range of biotin by MBA was 0.1∼0.5ng/ml(ppb). It showed cross reactivities on biocytin and desthiobiotin at the rate of 80.1% and 66.7%, respectively. In conclusion, ELISA revealed a significant improvement compared with MBA for the biotin detection in terms of sensitivity, detection range and cross reactivity. In addition, a variety of samples could be analyzed rapidly and conveniently at one time by using ELISA. These results strongly suggest that the ELISA is very promising for the practical application to detect biotin contents in a wide range of food stuffs.

• 한국식품과학회지
• /
• 제32권5호
• /
• pp.1009-1014
• /
• 2000

PA를 분석하기 위하여 효소면역측정법을 개발하고자 하였다. Bc방법과 Po방법으로 BSA에 PA를 conjugation하여 각각의 PA-BSA conjugate(PA-BSA[Bc]와 PA-BSA[Po])를 제조하였으며, 이를 토끼에 면역하여 항PA-BSA 항체를 얻었다. 항PA-BSA[Po] 항체를 사용한 ciELISA의 결과에서 경합반응이 제대로 일어나지 않았기 때문에, 식품 속에 있는 PA를 검출하기 위해서 PA-BSA[Po]을 코팅한 후 항PA-BSA[Bc] 항체를 사용하였다. 이 결과에서 PA의 검출한계가 1 ppm인 것을 확인할 수 있었으며, 교차반응을 통해 PA 유도체들에 대해서도 항PA-BSA[Bc] 항체가 PA에 대해 특이성이 매우 강하였다. 또한, MBA의 결과에서는 그 검출한계가 10ppb인 것을 확인할 수 있었다. 분석시료인 계란(109%), 상추(64%), 소간(344%)의 식품시료에 대한 실험에서 상추를 제외하고는 ciELISA는 MBA의 결과와 비교해 볼 때 양호한 결과를 얻을 수 있었다. 그러므로, ciELISA는 MBA보다 분석시간, 교차반응 등의 면에서 장점이 있어 식품 중 PA의 검출에 효과적으로 활용할 수 있을 것이다.

• 대한수의학회지
• /
• 제37권3호
• /
• pp.613-618
• /
• 1997

곰팡이에 오염된 저질사료에서 T-2 독소의 존재확인 및 양을 측정하기 위한 Direct Competitive Enzyme Linked Immunosorbent Assay(ELISA)의 Kits를 개발하기 위하여 T-2HS, T-2HS-BSA, T-2HS-HRP 및 T-2 단크론 항체 동을 개발하고저 연구하여 좋은 결과를 얻었다. 분말 옥수수내에 인위적으로 혼합된 T-2 독소의 평균회수율은 83%이었으며, T-2 독소의 추출가능범위는 60ng에서 $6{\mu}g$이었다. 분말옥수수에서 인위적으로 혼합된 T-2 독소의 회수결과에 의하면 이 연구는 T-2 독소의 존재를 확인하기에 적합하고, T-2 독소의 양을 측정하기 위한각종 ELISA Kits 제조의 기틀이 마련되었다.

• 한국식품과학회지
• /
• 제46권3호
• /
• pp.269-275
• /
• 2014

메밀로부터 분리한 메밀단백질(BWP)을 토끼에게 면역하여 생산한 특이항체를 이용하여 가공식품 중 메밀의 검출을 위한 간접경합 효소면역측정법(ciELISA)을 확립하였다. 이때, BWP의 검출범위는 $0.05-100{\mu}g/mL$이었다. 특이항체 교차반응 결과, BWP, 메밀가루, 통메밀에 대한 반응성은 각각 100, 17.9, 11.8%를 나타내었으며 그 외 곡물 14종에 대한 반응성은 거의 나타나지 않아 메밀에 대한 특이성이 매우 높았다. 메밀가루는 $60-90^{\circ}C$에서 반응성이 평균 83.0%를 나타내었으며 $100^{\circ}C$에서는 44.5%로 반응성이 감소하였다. 메밀가루에 대한 spike test에서 메밀 생면, 삶은 면, 묵, 메밀곡물가루에서 평균 분석회수율이 각각 99.1, 98.6, 81.1, 104%로 매우 높게 나타났다. ciELISA에 의하여 22점의 시판시료 중 메밀의 함유량을 조사한 결과, 메밀 함유 표시된 12점에서 평균 분석회수율은 31.6%로 나타났으나 시료 중 메밀의 정성적 검출은 100%로 매우 우수하였다. 본 연구에서 개발한 ciELISA는 가공식품에 함유된 메밀을 검출하는데 매우 효과적으로 활용할 수 있을 것이다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제33권2호
• /
• pp.228-234
• /
• 2023

In this study, the performance of a gold biosensor combined with light microscope imaging system (GB-LMIS) was comparatively evaluated against enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detecting Salmonella under simulated chilling condition. The optimum concentration of antiSalmonella polyclonal antibodies (pAbs) was determined to be 12.5 and 100 ㎍/ml for ELISA and GBLMIS, respectively. GB-LMIS exhibited a sufficient and competitive specificity toward three tested Salmonella among only. To mimic a real-world situation, chicken was inoculated with Salmonella cocktail and stored under chilling condition for 48 h. The overall growth of Salmonella under chilling condition was significantly lower than that under non-exposure to the chilling condition (p < 0.05). No significant differences in bacterial growth were observed between brain heart infusion and brilliant green broth during the enrichment period (p > 0.05). Finally, both GB-LMIS and ELISA were employed to detect Salmonella at every 2-h interval. GB-LMIS detected Salmonella with a competitive specificity by the direct observation of bacteria on the sensor using a charge-coupled device camera within a detection time of ~2.5 h. GB-LMIS is a feasible, novel, and rapid method for detecting Salmonella in poultry facilities.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제26권3호
• /
• pp.238-243
• /
• 1998

느타리버섯의 세균성갈반병균인 P. tolaasii(PT)를 신속 간편하게 검출할 수 있는 효소면역측정법 (ELISA)을 개발하였다. 특이항체를 생산하기 위하여 PT($5{\times}10^7$ cfu)를 Freund's adjuvant와 함께 토끼에 수차례 면역하였으며, 가장 높은 역가를 나타낸 항혈청을 이용하여 비경합 ELISA 및 경합 ELISA를 각각 확립하였다. 표준곡선으로부터 PT의 그 검출한계는 각각 $2{\times}10^2$cfu/ml 및 $3{\times}10^2$cfu/ml가량으로 나타났다. 교차반응은 비경합 ELISA의 경우 P. agarici, P. reactans 및 비병원성 Pseudomonas속 균주와 1/$10^3$이하의 매우 미약한 반응을 보였으나 P. solanacearum, Erwinia chrysanthemi, Streptococcus mutans, Xanthomonas citri 및 곰팡이인 Fusarium oxysporum등 다른 균주와의 반응성이 거의 없었으며, 경합 ELISA의 경우 PT이외에는 같은 속 균주에 대하여도 반응성이 거의 없었다. ELISA를 이용하여 버섯으로부터 분리된 18균주에 대하여 PT의 여부를 조사하였을 때 병원성과 white line 반응성을 동시에 나타내었던 11균주에 대하여만 명확한 양성으로 나타나, 본 연구에서 확립한 ELISA는 간편하고 정확한 PT검출법 임이 확인되었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제17권4호
• /
• pp.681-684
• /
• 2007

An immunoassay method was developed to quantitatively detect phosphinothricin-N-acetyltransferase (PAT) encoded by the Bialaphos resistance (bar) gene in genetically modified (GM) pepper. The histidine-tagged PAT was overexpressed in Escherichia coli M15 (pQE3l-bar) and efficiently purified by $Ni^{2+}$ affinity chromatography. A developed sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (S-ELISA) method (detection limit: $0.01{\mu}g/ml$) was 100-fold more sensitive than a competitive indirect ELISA (CI-ELISA) method or Western blot analysis in detecting the recombinant PAT. In real sample tests, PAT in genetically modified herbicide-tolerant (GMHT) peppers was successfully quantified [$4.9{\pm}0.4{\mu}g/g$ of sample (n=6)] by the S-ELISA method. The S-ELISA method developed here could be applied to other GMHT crops and vegetables producing PAT.

• BMB Reports
• /
• 제30권5호
• /
• pp.326-331
• /
• 1997

To construct a competitive ELISA standard curve for the detection of glucose-6-phosphate debydrogenase (G6PD), we used highly purified native G6PD (nG6PD) as both immobilized and soluble antigens and anti-G6PD serum raised against nG6PD as antibody. The polystyrene cuvettes coated with nG6PD were challenged with a mixture of a limiting amount of anti-G6PD serum and various doses of nG6PD as competitors followed by incubation with alkaline phosphatase-anti-IgG conjugate. The competitive ELISA did not exhibit the typical sigmoidal dose-response curve characteristic of competition immunoassays under the optimal concentrations of antigen and antibody. The soluble nG6PD used as competitor failed to effectively inhibit the binding of antibodies to the immobilized nG6PD. The addition of NADP, a cofactor of G6PD enzyme, to coating buffer used for immobilizing nG6PD to the cuvettes and PBS-Tween-BSA buffer for diluting competitors did not improve the inhibition of antibody binding to immobilized nG6PD by soluble n/G6PD. The addition of BSA to coating buffer did not increase inhibition, either. Surprisingly, when partially active G6PD (paG6PD), obtained by repeated freeze-thawing, was used as competitor, the antibody binding to either immobilized nG6PD or immobilized paG6PD was inhibited 49-58%. We conclude that an effective competitive ELISA system with nG6PD enzyme and anti-G6PD serum for the detection of G6PD may not be established due to the poor inhibition of antibody binding to immobilized nG6PD by soluble nG6PD under the present assay conditions and that the inhibition may be improved by using an inactivated enzyme as competitor regardless of the type of immobilized antigen used. These results imply that the immobilized nG6PD may undergo denaturation upon binding to the polystyrene cuvettes and that our anti-G6PD serum may recognize denatured enzyme better than active enzyme.