• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제21권1호
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• pp.20-27
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• 2011

The purification and characterization of a $Mn^{2+}$-dependent alkaline serine protease produced by Bacillus pumilus TMS55 were investigated. The enzyme was purified in three steps: concentrating the crude enzyme using ammonium sulfate precipitation, followed by gel filtration and cation-exchange chromatography. The purified protease had a molecular mass of approximately 35 kDa, was highly active over a broad pH range of 7.0 to 12.0, and remained stable over a pH range of 7.5 to 11.5. The optimum temperature for the enzyme activity was found to be $60^{\circ}C$. PMSF and AEBSF (1 mM) significantly inhibited the protease activity, indicating that the protease is a serine protease. $Mn^{2+}$ ions enhanced the activity and stability of the enzyme. In addition, the purified protease remained stable with oxidants ($H_2O_2$, 2%) and organic solvents (25%), such as benzene, hexane, and toluene. Therefore, these characteristics of the protease and its dehairing ability indicate its potential for a wide range of commercial applications.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제12권5호
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• pp.460-464
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• 2005

콩 가수분해물의 기능성 강화를 위하여 콩분말 및 SPI에 4종의 protease를 처리하여 가수분해물의 특성을 조사하였다. 수율은 protease(B)를 처리하였을 때 콩분말에서 43.2%, SPI에서 61.6%로 가장 높게 나타났다. 용해도와 총페놀성 물질은 protease(B)와 (C)처리구에서 크게 증가하였으며, 칼슘내인성은 protease(B)를 처리하였을 때 향상되었다. 콩분말에서 콩 특유의 비린내는 protease처리로 감소하였으나 콩분말과 SPI 모두 protease 처리로 쓴맛이 강해졌으며 protease의 종류에 따른 차이는 확인되지 않았다. 가수분해물의 수율을 비롯한 이화학적 특성을 감안할 때, protease (B)가 가수분해물 제조에 적합하였으며, 가수분해물의 활용 형태에 따라 관능적 특성의 보완이 요구되었다.

• 한국식품과학회지
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• 제22권3호
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• pp.234-240
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• 1990

본 실험에서는 상품화된 단백질 분해효소를 이용한 굴 및 홍합에 대한 최적 가수분해 조건에 대하여 조사하였다. 가수분해도, 유리아미노태 질소, 핵산관련물질, 유리아미노산 및 관능검사로 가수분해물들의 특성을 조사한 결과 굴의 경우 MKC-HT proteolytic, alcalase 0.6L 및 thermoase가, 홍합의 경우 acid-fungal protease와 thermoase가 각 가수분해물 제조시 가장 효과적인 단백질 분해효소임을 확인하였다.

• Journal of Nutrition and Health
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• 제45권5호
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• pp.429-436
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• 2012

본 연구는 폐기되는 홍게껍질의 단백질을 활용하기 위하여 홍게껍질 분말에 상업적으로 사용하는 6가지 protease를 단일 또는 혼합처리하여 획득한 가용성 가수분해물의 분자량 및 아미노산 조성 등을 비교 분석하여 기능성 소재 및 보충제로서의 활용 가능성을 확인하고자 하였다. 단일효소 6종 중 단백질 분해능은 Biuret assay과 280 nm assay 및 $^{\circ}Brix$로 분석한 결과 Protease A (PA)가 현저하게 높았다. 단일효소 처리로 생성된 가수분해물의 단백질 분자량은 150 kDa 이하의 밴드를 형성하였다. 단일효소 중 단백질 분해능이 가장 강력한 PA의 최적 가수분해 조건을 선정하여 PA에 Protamex (P), Flavourzyme (F), Alcalase (A), Protease M (PM)과 Protease A (PA)를 1대 1의 비로 혼합 (PA + P, PA + PM, PA + F, PA + A)하여 GC로 아미노산 조성을 확인하였다. 총 아미노산 함량은 PA + P 247.411 mg/g > PA + F (206.442 mg/g) > PA + A (133.385 mg/g) > PA + PM (59.131 mg/g) > PA (54.875 mg/g)의 순으로 혼합효소처리가 단일효소처리에 비해 높은 것을 확인할 수 있었다. 혼합효소처리 한 홍게껍질의 아미노산 조성은 사용 효소에 따라 다소 차이가 있었다. 주로 phenylalanine, glycine, alanine, leucine의 함량이 높았으며 tyrosine, cystine은 검출되지 않았다. 쌀을 주식으로 하는 우리나라 사람들에게 부족되기 쉬운 필수 아미노산인 lysine, phenylalnine, leucine, isoleucine의 함량이 높아 아미노산 보충효과를 기대할 수 있을 것으로 보인다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권3호
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• pp.322-328
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• 1995

A thermophilic bacteria showing proteolytic activity against defatted soybean was isolated from soil. It was identified as Bacillus amyloliquefaciens based on its morphological and physiological characteristics. The Bacillus amyloliquefaciens NS 15-4 was cultivated at 50$\circ$C by rotary shaking in a medium containing defatted soybean. An extracellular protease from this strain was purified to homogeneity by ammonium sulfate precipitation, ion exchange, and hydrophobic interaction chromatographies. The molecular weight of the enzyme was estimated to be approximately 30,000 by SDS-PAGE and the N-terminal amino acid sequence of the enzyme was turned out to be AQSVPYGISQIKAPA. The optimum temperature and pH for the enzyme reaction were 60$\circ$C and 11, respectively, and its thermostability was increased by the addition of calcium ion. The enzyme was inactivated by phenylmethylsulfonylfluoride, suggesting it be a serine protease. Comparing with other commercial proteases, the enzyme showed relatively high proteolytic activity against defatted soybean, a water-insoluble protein substrate.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제48권3호
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• pp.358-365
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• 2020

An organic solvent- and bleach-stable protease-producing strain was isolated from a polluted river water sample and identified as Aeromonas veronii OB3 on the basis of biochemical properties (API 20E) and 16S rRNA sequence analysis. The strain was found to hyper-produce alkaline protease when cultivated on fish waste powder-based medium (HVSP, 4080 U/ml). The biochemical properties and compatibility of OB3 with several detergents and additives were studied. Maximum activity was observed at pH 9.0 and 60℃. The crude protease displayed outstanding stability to the investigated surfactants and oxidants, such as Tween 80, Triton X-100, and H₂O₂, and almost 36% residual activity when incubated with 1% SDS. Remarkably, the enzyme demonstrated considerable compatibility with commercial detergents, retaining more than 100% of its activity with Ariel and Tide (1 h, 40℃). Moreover, washing performance of Tide significantly improved by the supplementation of small amounts of OB3 crude protease. These properties suggest the potential use of this alkaline protease as a bio-additive in the detergent industry and other biotechnological processes such as peptide synthesis.

• 한국식품영양과학회지
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• 제14권4호
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• pp.401-408
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• 1985

효모세포벽 용해효소의 일종인 Zymolyase$(endo-{\beta}-1\;,3-glucanase)$와 더불어 Arthrobacter luteus로 부터 생산되었고, 또한 Zymolyase의 조효소중에서 발견된 바 있는 염기성 AL-protease의 효모세포벽 용해작용을 S. sake의 생세포와 그 세포벽 표품(標品)을 사용하여 조사하였다. AL-protease의 효모 생세포에 대한 용해활성은 그 단독작용만으로는 지극히 미약하였으나, Zymolyase와의 복합작용에 의해서 용해활성은 고도로 상승하였다. 효모생세포를 AL-protease와 Zymolyase로써 단계적인 처리를 할 경우, 효모세포는 AL-protease로 전처리된 뒤에 Zymolyase로 처리되는 처리 순서에 한하여 효과적으로 용해되었다. 이러한 AL-protease의 촉진적 작용은 AL-protease처럼 염기성이고 serine protease로 알려진 몇가지 시판의 효소들 중에서는 발견되지 않았으며, 또한 AL-protease의 이러한 작용은 실험에 사용된 효모들의 배양조건 및 균종에 따라서 커다란 영향을 받는 것으로 밝혀졌다. AL-protease는 효모세포벽 표품(標品)으로부터 일정량의 peptide와 상당량의 당을 유리시키고 있으나, 그 세포벽을 66% 이상은 용해시키지 못하였다. 반면에, Zymolyase는 그 단독작용으로도 효모세포벽을 거의 완전히 용해시킬 수 있었다. 이상의 실험결과를 기초로 하여, S. sake 세포벽의 용해에 있어서 AL-protease의 효소적 작용은, 먼저 AL-protease가 mannan과 단백질로 구성되는 세포벽 표층부에 결합하고, 이어서 그들의 구조를 변화시킴으로써, Zymolyase를 세포벽의 외부로 부터 알카리 불용성 glucan으로 구축되고 있는 세포벽 내부의 골격구조로까지의 침투를 촉진시키는 것으로 추론되었다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제11권2호
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• pp.1-6
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• 1982

직접채취(直接採取)한 3종(種)의 벌꿀을 표준으로 하여 시판(市販)꿀의 당조성(糖組成), 효소력(酵素力) 및 화분수(花粉數)를 조사비교(調査比較)한 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 시판(市販)꿀의 전당함양(全糖含量)은 표준꿀보다 약간 많았다. 2. 표준꿀의 화분수(花粉數)는 시판(市販)꿀보다 약 5배(倍)나 많았다. 3. 표준꿀은 시판(市販)꿀보다 ${\alpha}-amylase$는 5배(倍), ${\beta}-amylase$는 2배(倍), protease activity는 평균 2배(倍)나 높았다. 4. 이상(以上)의 결과(結果)로 보아 시판(市販를)꿀은 sugar honey이거나 synthetic honey가 일부 들어 있는지 의심스럽다. 그래서 표준꿀에 대한 조사(調査)를 충분(充分)히 해서 판정기준(判定基準)을 설정(設定)하여 불량시판(不良市販)꿀이 없도록 해야겠다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제30권4호
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• pp.760-763
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• 2001

시판되는 새우젓의 새로운 기능성 지표를 제시하고자 단백분해효소의 활성 및 키토산 분해활성 등을 측정하였다. 시판 되는 새우젓의 염도를 측정한 결과. 29.8~48.3%로 제품에 따라 최대 19% 정도의 염도 차이를 보였다. 총질소량은 3510.5 ~7314.1 mg/100g 으로 A시료가 7314.1 mg/100 g으로 가장 높은 총질소 함량을 보인 반면 D 시료는 3510.5 mg/100 g으로 비교적 낮은 총질소 함량을 보였다. 아미노태 질소량은 321.2~723.9 mg/100g으로 총질소 함량이 가장 낮았던 D시료가 아미노태 질소 함량이 낮았다. 5개 시판 새우젓의 평균 펩타이드 길이(average peptide length: APL)는 10.1~15.0이었다. 휘발성 염기질소는 14.1~98.6mg/100g 으로 D시료에서 가장 높은 98.6mg%의 함량을 보였다. 단백질 분해효소 활성은 18~232 unit로 차이를 보이고 있으며 C번 시료의 단백질 분해 효소 활성이 232 unit로 가장 높은 효소활성을 보였다. Chitinase 활성은 14.4~171 unit의 활성을 보였으며 E번 새우젓이 171 unit로 가장 높은 효소 활성을 보였다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제33권3호
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• pp.247-251
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• 1990

오징어 젓갈로 부터 분리한 protease를 생산하는 H5-2 균주는 Halobacterium 속 균으로 동정되었으며 NaCl 2.0M 이하의 배지에서는 생육하지 못하는 고도 호염성균이었고, 이 균의 protease 생산은 Nan 4.5M, yeast extract 0.4%, gelatin 1.5%를 첨가한 pH7.0의 Norberg & Hofsten 배지에서 $38^{\circ}C$로 $4{\sim}5$일간 배양했을 때 가장 양호하였다.