• Journal of Yeungnam Medical Science
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• 제12권2호
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• pp.237-245
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• 1995

Klebsiella pneumoniae 의 phoA 유전자를 함유하는 DNA를 plasmid pACYC184에 클로닝 하였다. 클로닝된 DNA의 크기는 4.0 kb이었으며 제한효소지도를 작성한 결과 3개의 PstI 절단부위와 4개의 PvuII 절단부위가 발견되었다. Klebsiella pneumoniae 의 phoA 유전자의 염기서열은 Escherichia coli와 매우 유사하여 80%의 유사성을 보였으며 이는 이 두 균종이 서로 유전적으로 매우 가까운 관계에 있음을 시사하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권4호
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• pp.334-342
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• 1989

Bacillus stearothermophilus의 cytidine deaminase (cytidine/2'-deoxycytidine aminohydrolase：EC 3.5.4.5)를 코딩하는 cdd 유전자를 E. coli cdd$^-$ 결손변이주를 cloning host로 하여 3-10Kbp의 B. stearothermophilus DNA 단편으로부터 shot gun 법으로 클로닝하였다. 고 복제수 플라스미드 pBR322 의 PstI 부위에 3.0Kb의 B. stearothermophilus DNA 단편을 함유한 pJSC101이 cdd$^+$와 tetracy-line 내성으로서 cloning되었으며, 이어서, 결실 및 subcloning을 연속 수행한 결과 약 1.35kbp의 Eco RI$_1$/PstI$_2$단편이 동일 부위의 pBR322에 삽입된 cdd 양성의 pJSC201을 얻었다. Mini 세포 실험결과, 이 단편에서 합성되는 polypeptide는 약 33 KDa이었기에 이 polypeptide가 cytidine deaminase 로 추정되었다. 또한 이 단편에 함유한 550bp의 EcoRI/AvaI 부분을 lacZ 프로모터 영역에 삽입한 경우 프로모터 활성을 나타내었기에 이 단편의 Eco RI 부위에서 PstI부위로 cdd 유전자가 전사됨을 알 수 있었다. B. subilis와 E. coli에서 발현이 가능한 shuttle vector에 cdd가 함유된 단편을 삽입한 후 이를 양세포에서 동시 발현시켰을 때 B. subtilis에서 발현시킨 경우가 E. coli에서 보다높은 cytidine deaminase 활성을 나타내었으며 이 유전자는 B. subtilis 에서도 E. coli에서와 같이 안정하게 유지됨을 알 수 있었다.

• Mycobiology
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• 제41권1호
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• pp.37-41
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• 2013

Laccases (EC 1.10.3.2) are copper-containing polyphenol oxidases found in white-rot fungi. Here, we report the cloning and analysis of the nucleotide sequence of a new laccase gene, fvlac7, based on the genomic sequence of Flammulina velutipes. A primer set was designed from the putative mRNA that was aligned to the genomic DNA of F. velutipes. A cDNA fragment approximately 1.6-kb long was then amplified by reverse transcriptase-PCR using total RNA, which was subsequently cloned and sequenced. The cDNA sequence of fvlac7 was then compared to that of the genomic DNA, and 16 introns were found in the genomic DNA sequence. The fvlac7 protein, which consists of 538 amino acids, showed only 42~51% identity with 12 different mushroom species containing two laccases of F. velutipes, suggesting the fvlac7 is a novel laccase gene. The first 25 amino acids of Fvlac7 correspond to a predicted signal sequence, four copper-binding sites, and four N-glycosylation sites. Fvlac7 cDNA was heterologously overexpressed in an Escherichia coli system with an approximate expected molecular weight of 60 kDa.

• 대한약학회:학술대회논문집
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• 대한약학회 2002년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2
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• pp.332.1-332.1
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• 2002

Streptococcus vestibularis is a urease-producing oral bacterium. frequently isolated from vestibular mucosa of human oral cavity. Ureolysis by S. vestibularis and other ureolytic oral bacteria is believed to be crucially involved in oral microbial ecology and oral health. Genomic library of the S. vestibularis ATCC49124 was constructed in an E. coli plasmid vector and the urease-positive transformants harboring the urease gene cluster were isolated on Christensen-urea agar plates. The minimal DNA region required for the urease activity was located on a 5.6 kb DNA fragment. (omitted)

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권4호
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• pp.301-306
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• 1989

Zymomonas mobilis ATCC 10988로부터 분리된 chromosomal DNA를 제한효소 Sau3Al으로 부분 절단한 후 이를 BamHI으로 완전 절단하여 alkaline phosphatase를 처치한 pUC9과 ligation하여 Escherichia coli JM83을 형질전환시키는데 사용하였다. 알코올 탈수소 효소활성을 나타내는_대장균 형질전환체를 선별하기 위해 allyl alcohol을 사용하였는데 이 때 allyl alcohol을 함유한 LB 한천 배지에서 자라지 못하는 두개의 clones을 얻었다. 이들 clones으로부터 분리한 plasmids를 여러가지 제한효소로 처리하여 agarose gel 전기영동으로 분석한 결과 2.6kb 크기의 동일한 DNA 조각을 공유하고 있음이 밝혀졌으며 이들 plasmids를 함유하고 있는 대장균 형질전환체와 Z. mobilis에서 생성된 효소를 각기 polyacrylamide gel 전기영동한 후 효소활성을 염색하고 또한 알코올 기질특이성을 조사한 결과 이들 plasmids 가 Z. mebilis 의 alcohol dehydrogenase II 유전자를 함유하고 있음이 밝혀졌다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제1권1호
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• pp.37-44
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• 1991

A shuttle promoter-probe vector, pEB203, was derived from pBR322, pPL703 and pUB110. Using the vector, a useful DNA fragment, 319 bp EcoRI fragment, having strong promoter activity has been cloned from Bacillus subtills chromosomal DNA. Selection was based on chloramphenicol resistance which is dependent upon the introduction of DNA fragments allowing expression of a chloramphenicol acetyl transferase gene. The nucleotide sequence of the 319 bp fragment has been determined and the putative -35 and -10 region, ribosome binding site, and ATG initiation codon were observed. This promoter was named EB promoter and the resultant plasmid which can be used as an expression vector was named pEBP313. The crystal protein gene from B. thuringiensis subsp. kurstaki HD-73 was cloned downstream from the EB promoter without its own promoter. When the resultant plasmid, pBT313, was introduced into Escherichia coli and B. subtilis, efficient synthesis of crystal protein was observed in both cells, and the cp gene expression in B. subtilis begins early in the vegetative phase. The cell extracts from both clones were toxic to Hyphantria cunea larvae.

• 생명과학회지
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• 제15권5호
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• pp.734-738
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• 2005

Xylanase를 생산하는 알칼리 내성 Bacillus alcalophilus AX2000의 chromosomal DNA로부터 xylanase 유전자를 cloning하여 그 염기배열 순서를 결정한 다음 이로부터 유전자 발현에 관련된 구조를 분석하였다. Xylanase 유전자의 cloning을 위해 제한효소 PstI으로 절단한 B. alcalophilus AX2000의 chromosomal DNA와 pUC19을 ligation 시켜 E. coli $DH5\alpha$에 형질전환시킨 후 형질전환체 중에서 xylanase 활성을 나타내는 재조합 plasmid pXTY99를 분리하였다. 재조합 plasmid pXTY99은 pUC19의 PstI 부위 내에 7kb의 외래 DNA가 삽입 되 었다. Cloning된 xylanase 유전자(xynT)의 염기배열을 분석한 결과 유전자의 크기는 1,020 bp이었고 이는 340개의 아미노산으로 구성된 분자량 40 kDa의 poly-peptide를 coding하고 있었다. 이 염기배열은 AUG 개시 codon으로부터 각각 259와 282 base상류에 TACAAT의 -10 box와 GTTCACA인 -35 box로 추정되는 염기배열이 존재하였으며 ribosome 결합부위가 존재하였다. B. alcalophilus AX2000의 xylanase와 아미노산배열의 유사성이 가장 높은 xylanase는 Bacillus sp. N137과 B. stearothemophilus 21 유래의 xylanase로 각각 $61\%$와 $59\%$의 유사성을 나타내었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권6호
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• pp.574-579
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• 1989

Chromosomal DNA fragments of Bacillus sp. YA-14, isolated from soil as a potent $\beta$-xylosidase producing bacterium, were ligated to a vector plasmid pBR322 and used to transfer Escherichia coli HB101 cells. The recombinant plasmid pYXL22 was found to enable the transformants to produce $\beta$-xylosidase. pYXL22 was found to contain the 7.0 kb HindIII DNA fragment originated from the Bacillus sp. YA-14 chromosomal DNA by Southern hybridization. The optimum temperature for the reaction of $\beta$-xylosidase produced by E. coli HB101 (pYXL22) was appeared at 3$0^{\circ}C$. The enzyme was maintained stably up to 4$0^{\circ}C$ when stored 1hr at 4$0^{\circ}C$. The $\beta$-xylosidase was repressed completely by 0.4% (w/v) glucose concentration in E. coli HB101 (pYXL22). The optimum concentration of xylose for the $\beta$-xylosidase production in Bacillus sp. YA-14 was 0.2% (w/v).

• Journal of Plant Biology
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• 제35권2호
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• pp.165-171
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• 1992

rbcL 유전자 발현조절에 관한 연구의 일환으로 Cp DNA로부터 분리한 rbcL 유전자를 클로닝하였다. 옥수수의 엽록체로부터 DNA를 분리한 후 제한효소 BamHI으로 절단하여 rbcL 유전자가 포함된 BamHI 9 절편을 pUC19에 클로닝하여 재조합 플라스미드 pRLYS1을 만들었다. 쌀의 rbcL 유전자 일부를 probe로 사용하여 pRLYS1과 Southern hybridization한 결과와 제한효소 BamHI, HindIII, 그리고 PstI으로 절단된 pRLYS1 절편의 전기영동 결과로부터 재조합 플라스미드의 내부에 완전한 rbcL 유전자의 존재를 확인하였고 삽입방향을 결정하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권2호
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• pp.145-149
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• 1995

For the purpose of developing a new biodegradable detergent, we have isolated a gene encoding wide-range temperature applicable alkaline protease from Xanthomonas sp. YL-37 (Lee et al., 1994, Kor. J. Appl. Microbiol. Biotechnol.). An alkaline protease gene was isolated from the gene bank that was prepared from the chromosomal DNA of Xanthomonas sp. YL-37. From the results of agarose gel electrophoresis and a restriction enzyme mapping, a 2.7 kb DNA fragment containing the alkaline protease gene was inserted in the plasmid pUC9. Extracellular activity of a clone having alkaline protease gene was detected on SDS-polyacrylamide gel with activity staining assay. The molecular weight of alkaline protease was determined to be about 64 kDa from 11% SDS-PAGE analysis. Alkaline protease activity, produced from E. coli which harboring the plasmid, showed no difference at reaction temperature 20, 30 and 40$\circ$C, respectively. This result showed that alkaline protease produced from E. coli harboring the plasmid was apparently the same as that of Xanthomonas sp. YL-37.