SOON-DUCK HONG;SHIN, WOO-CHANG;DONG-SUN LEE;JONG-GUK KIM
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
제5권2호
/
pp.87-91
/
1995
The chitinase gene was cloned from Acinetobacter sp. WC-17 for investigating the genetic control and enzymatic properties of bacterial chitinase. A genomic library of Acinetobacter sp. WC-17 was prepared in E.coli JM109 by using pUC18 as a vector. The chitinase-positive clone containing 3.2kb insert fragment was obtained from 5, 000 insert-bearing transformants. The optimum pH and temperature of cloned enzyme were 6.0 and $55^{\circ}C$, respectively. Almost all the chitinase activity of E.coli recombinant was localized in the periplasmic fraction, while most of the enzyme activity of Acinetobacter sp. WC-17 was found in the extracellular fraction.
한국미생물학회 2006년도 International Meeting of the Microbiological Society of Korea
/
pp.97-99
/
2006
A chitinase-producing bacterium strain KCTC10714 was isolated from sea sand around the King Sejong Station, King George Island in Antarctica. It was identified as Sanguibacter sp., based on the biochemical properties and 16S rRNA gene sequence. KCTC10714 chitinase showed enzyme activity in broad range of temperature from 0 to $70^{\circ}C$. At $0^{\circ}C$, it showed 70.9% of relative activity in comparison with 100%. The chitinase gene of KCTC10714 was cloned using inverse PCR cloning method. KCTC10714 chitinase gene was designated as chi21702. The ORF of chi21702 consisted of 1,449 bp (482 amino acid), and contained ChtBD3 (a chitin/cellulose binding domain) and an active site for chitinase family 18.
Chitin-degrading marine bacterial strain 98CJ11027 was isolated from bryozoa from the coastal area of Cheju Island, Korea, and identified as a member of the genus Vibrio. The molecular mass of the main extracellular chitinase (chitinase I), purified from strain 98CJ11027, was estimated to be 98 kDa. The optimal condition for chitinase I activity is pH 6.0 and 45$^{\circ}C$. The activity was inhibited by Fe$\^$+2/ and Cu$\^$+2/. Chitinase I displayed the hydrolysis type of chitobiosidase and catalyzed reversed hydrolysis leading to the synthesis of tetraacetylchitotetraose.
벼잎의 산성용액 추출물로부터 ion exchange chromatography chitin affinity chromatography chromatofocusing gel slicing 등의 방법으로 단백질 RCG-2를 순수분리하였다. 본 단백질은 chitin과 laminarin을 가수분해하므로 chitinase와 ${\beta}-1,3-glucanase$ 활성을 함께 보유하고 있는 것으로 나타났으며, 이외에도 M. lysodeiktikus cell wall을 가수분해하는 lysozyme 활성도 보유하는 것으로 판명되었다. 분자량이 29.77 kd인 본 효소의 chitinase 활성은 pH 4.0에서, ${\beta}-1,3-glucanase$ 활성은 pH 7.0에서 최대로 나타났고, 최적온도는 두 효소 활성 모두 $40^{\circ}C$ 이었다. chitin에 대한 $K_M$ 값은 7.86 mM, $V_{max}$는 $0.025\;{\mu}M/min$, laminarin $({\beta}-1,3-glucan)$에 대한 것은 각각 5.95 mM, $0.16{\mu}\;M/min.$ 이었으며, 정제된 효소는 chitin을 chitooligosaccharide로 분해하는 것으로 나타나서 endochitinase로 판명되었다.
Chitinase activities from Shumard oak tissues were determined to study changes in chitinase activities related to water stress. The enzyme extracted in sodium acetate buffer (0.1M, pH 4.5) was assayed by a colorimetric method. In addition, the fungal hyphae of Hypoxylon atropunctatum in xylem tissues of oak were observed through scanning electron microscopy. The enzyme in oak tissues was mainly endochitinase, and optimum pH for enzyme activity was 5. Specific chitinase activities from both of stems held under high relative humidity (ranges of 0.63-1.11 pKatal/$\mu\textrm{g}$ of protein) and stems held under low relative humidity (ranges of 0.41-0.99 pKatal/$\mu\textrm{g}$ of protein) were significantly increased following fungal inoculation with H. atropunctatum. However, there was no significant difference in chitinase activities between tissues held under high and low humidities, which might be due to fungal chitinase. Scanning electron microscopy showed holes in fungal hyphae in the xylem tissues of stems held under high humidity but not in the stems held under ow humidity, suggesting that hyphae might be hydrolyzed by plant hydolases such as chitinase.
We have found that Thermoactinomyces vulgaris KFB-Cl00 produces a chitinase. The optimum temperature and pH of the enzyme activity were $55^{\circ}C$ and 6.5. The enzyme was stable after heat treatment at $80^{\circ}C$ for 30 min and stable in acidic and basic conditions (PH 6.0~11.0). The thermostable endo-chitinase from Thermoactinomyces vulgaris KFB-C100 was cloned into the plasmid pBR322 by using E. coli DH5$\alpha$ as a host strain. The positive clone carrying a recombinant plasmid (PKCHI23) with a 4.1-kb fragment containing the chitinase gene was found. The recombinant plasmid was analyzed to determine the essential region for chitinase activity and obtained a 2.3-kb fragment, which was sub cloned into pTrc99A using the PstI and SalI sites to construct pTrc99A/pKCHI23-3. The resulting plasmid exerted high chitinase activity upon transformation of E. coli XL1-Blue cells. Chitinase was overproduced 14 times more in the clone cells than in the wild-type cells and the enzyme was purified to homogeneity. The purified enzyme showed the similar properties as the native chitinase from T. vulgaris in terms of molecular weight and substrate specificity. The catalytic action of the cloned enzyme was an endo type, producing chitobiose as a major reaction product.
Production and some properties of chitinolytic enzymes were investigated by 80% ammonium sulfate precipitates (crude enzymes) from culture supernatant of antagonistic bacteria, Chromobacterium violaceum strain C-61 and strain C-72, Aeromonas hydrophila, Aeromonas caviae, and Serratia marcescens. The maximum production of chitinase was obtained from the 3-day culture at 28$^{\circ}C$ in C. violaceum stains, the 6-day culture in S. marcescens, and the 2-day culture in A. hydrophila and A. caviae. In the optimum culture periods, chitinase activity of C. violaceum strains C-61 was 1.5, 5.5, 12.0 and 11.3 times higher than those of strain C-72, S. marcescens, A. hydrophila and A. caviae, respectively. However, N,N'-diacetylchitobiase activity was 3.2 times higher in S. marcescens than in C. violaceum strain C-61, and that of Aeromonas spp.was very low. On gels containing glycol chitin, chitinase of C. violaceum strains showed four isoforms of 54-, 52-, 50- and 37-kDa, whereas there were four isoforms of 58-, 52-, 48- and 38-kDa in S. arcescens, three isoforms of 70-, 58- and 54-kDa in A. hydrophila and six isoforms of 90-, 79-, 71-, 63-, 58- and 38-kDa in A. caviae. The chitinase of C. violaceum strain C-61 was most active at pH 7.0 and at 5$0^{\circ}C$ and was stable in ranges of pH 5.0~10.0 for 2 hours and of 0~5$0^{\circ}C$ for 30 min.
Abstract Extracellular chitinase was purified from the culture liquid of the marine bacterium, Bacillus sp. LJ-25 , and its enzymatic properties were examined. The purified chitinase exhibited a single band on SDS-PAGE and the molecular weight was estimated to be approximately 50 kDa. The optimum pH and temperature for the enzymatic activity were 7.0 and $35^{\circ}C$, respectively. The activity of the chitinase was strongly inhibited by $Zn^{2+}$ and slightly inhibited by $Ba^{2+},{\;}Co^{2+},{\;}Mn^{2+},{\;}and{\;}Cu^{2+}$. The purified chitinase did not hydrolyze $p-nitrophenolN-acetyl-{\bata}-D-glucosaminide{\;}(GlcNAc)_2$ and Micrococcus lysodeikticus cells, which are known to be the substrates for exo-type chitinase. Among the hydrolyzates of colloidal chitin, $(GlcNAc)_2$ was in the highest concentration with small amounts of GlcNAc and $(GlcNAc)_3$..
식물-미생물 상호작용에 관한 연구의 일부로 식물 병저항성 단백질로 간주되는 키틴분해효소(Chitinase, EC 3.2.1.14)의 식물 세포간액에의 분포와 유도를 몇가지 조건에서 연구하였다. 강낭콩과 대두의 잎에서 병원균, 상처, 에틸렌 등의 스트레스 조건에서 유도되는 endochitinase 가운데 강낭콩에서는 34 kD chitinase가, 대두에서는 30 kD와 36 kD chitinase가 뚜렷이 세포간극에 축적되었다. 스트레스 조건에서 시간이 경과함에 따라 이들의 세포간극에 축적되는 양은 많아졌다.
Four chitinase producing bacteria, Arthrobacter nicotinae CH4, Arthrobacter nicotinae CHI3, Arthrobacter sp. CH5 and Micrococcus sp. CH3, were isolated from small crabs and shrimps. We investigated the optimum medium condition for the production of enzyme and high cell mass. The preferable medium composition was as follows: colchitin 0.1 %(w/v), glycerol 0.25%(w/v) and yeast extract 0.05%(w/v) in minimal midium ($K_{2}HPO_{4}$ 0.7 g/l, $KH_{2}PO_{4}$ 0.3 g/l, $MgSO_{4}{\cdot}5H_{2}O$ 0.5 g/l, $FeSO_{4}}{\cdot}7H_{2}O$ 0.01 g/l, $ZnSO_{4}$ 0.001 g/l, $MnCI_2$ 0.001 g/l, pH 7.0). This cell culture medium could be used directly as sample for measuring chitinase activity. Because it hardly conreducing sugar such as glucose (blank value=0), the detected reducing sugar can be considered as a chitinase reaction product. The results can be used for easy preparation method for determination of enzyme activity and analysis of enzyme-substrate reaction in step of screening of chitinase producing bacteria.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.