이 총론에서는 cell cycle의 조절에 관계하는 p34cdc kinase의 특성과 기질 그리고 cell cycle에서의 역할을 살펴보고, 또 cell cycle에서와 여러가지 세포내의 현상에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 casein kinase II의 특성과 기질 그리고 cell cycle에서의 역할을 살펴보고자 한다. 그리고 이런 효소들을 연구하는 데 필수적인 방법이나 시약들로 소개하고자 한다.
We have found a protein kinase activity that is tightly associated with type II DNA topoisomerase purified from regenerating rat liver. The activities of protein kinase and topoisomerase II were not separable when the enzyme was subjected to analytical chromatographies (Hydroxyapatite, phosphocellulose, and double strand DNA cellulose) and glycerol gradient sedimentation. The kinase activity from purified rat topoisomerase II was also inactivated by the topoisomerase II inhibitors such as N-ethylmaleimide or novobiocin. The evidences, however, do not rule out a possibility that the kinase activity resides in a polypeptide other than the topoisomerase II protein. The topoisomerase II-associated protein kinase required Mg++ for its activity, and this requirement was not substituted by any other mono- or divalent ions. Histone H1 act as a strong stimulator and a good substrate for the kinase activity and other histones and ${\alpha}$-casein could not substitute the effect of histone H1.
ATP analogs were immobilized or bovine caseins by the action of transglutaminase. The ATP analogs immobilized on the caseins were enzymatically active and interconverten by kinases. The immobilized ATP was dephosphorylated to the corresponding ADP by hexokinase and rephosphorylated to the ATP in solid form by acetate kinase. Under the conditions chosen, about 55% of the immobilized ATP was dephosphorylated and about 80% of the resulted ADP was rephosphorylated. Bovine $\beta$-casein was more useful than $\alpha$sf-casein as a carrier and C8-substituted ATP analognwas more effective than N6-substituted one in immobilization. Michaelis constant of C8-substituted ATP analog immobilized on $\beta$-casein was similar to that of free form of ATP and that of ATP analog. The immobilized ATP was much more stable than free ATP and its analog, while maximum velocity was reduced to 37% of the free ATP analog. The immobilized ATP was recovered almost completely by calcium precipitation.
Park, Young-Il;Kim, Jae-Hun;Lee, Jae-Deok;Kim, Yong-Woo;Kim, In-Soo
BMB Reports
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v.31
no.3
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pp.221-226
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1998
Phosphorylation of phytochrome may play important functional roles to control plant photomorphogenesis. Many attempts have failed to identify the protein kinase that phosphorylates phytochrome in vivo. It has been reported that a polycation-stimulated protein kinase activity was associated with the purified phytochrome. However, it is not known if the kinase activity is an intrinsic property of phytochrome or whether it comes from a contaminant of the purified phytochrome. In the present study, three protein kinases that phosphorylate phytochrome have been identified from etiolated oat seedlings. A polycationstimulated protein kinase that had very similar enzymatic properties with that associated with the purified phytochrome was identified in the cytosolic extract. It phosphorylated several contaminant proteins in the kinase preparation as well as phytochrome and had a broad substrate specificity. A CK II-type protein kinase phosphorylated phytochrome and the exogenously added casein. It is likely that this kinase may not be a feasible candidate for the kinase phosphorylating phytochrome in vivo since the content of the kinase seemed to well exceed the content of phytochrome in the etiolated oat seedlings. Another protein kinase that had unique enzymatic properties phosphorylated phytochrome very specifically and seemed to be present in a small quantity in the etiohlted seedlings. It is expected that one of three kinases may be responsible for the phytochrome phosphorylation in vivo.
Gastric cancer as one of the most common cancers worldwide has various genetic and environmental risk factors including Helicobacter pylori (H.pylori) infection. Recently, loss of a tumor suppressor gene named promyelocytic leukemia (PML) has been identified in gastric cancer. However, no mutation has been found in this gene in gastric cancer samples. Cag A H.pylori protein has been shown to exert post transcriptional regulation of some tumor suppressor genes. In order to assess such a mechanism for PML degradation, we performed in silico analyses to establish any interaction between PML and Cag A proteins. In silico interaction and docking studies showed that these two proteins may have stable interactions. In addition, we showed that imatinib kinase inhibitor can restore PML function by inhibition of casein kinase 2.
Objective: Caseins and fatty acids of milk are synthesized and secreted by the epithelial cells of the mammary gland. All-trans retinoic acid (ATRA), an active metabolite of vitamin A, has been shown to promote mammary development. This study was conducted to determine the effect of ATRA on casein synthesis and fatty acid composition in MAC-T cells. Methods: MAC-T cells were allowed to differentiate for 4 d, treated with ATRA (0, 1.0, 1.5, and 2.0 μM), and incubated for 3 d. We analyzed the fatty acid composition, the mRNA expression of casein and fatty acid synthesis-related genes, and the phosphorylation of casein synthesis-related proteins of MAC-T cells by gas chromatography, quantitative polymerase chain reaction, and western blotting, respectively. Results: In MAC-T cells, ATRA increased the mRNA levels of αS1-casein and β-casein, janus kinase 2 (JAK2) and E74-like factor 5 of the signal transducer and activator of transcription 5 β (STAT5-β) pathway, ribosomal protein S6 kinase beta-1 (S6K1) and eukaryotic translation initiation factor 4E binding protein 1 of the mammalian target of rapamycin (mTOR) pathway, inhibited the mRNA expression of phosphoinositide 3-kinase and eukaryotic initiation factor 4E of the mTOR pathway, and promoted the phosphorylation of STAT5-β and S6K1 proteins. Additionally, ATRA increased the de novo synthesis of fatty acids, reduced the content of long-chain fatty acids, the ratio of monounsaturated fatty acids to saturated fatty acids (SFA), the ratio of polyunsaturated fatty acids (PUFA) to SFA, and the ratio of ω-6 to ω-3 PUFA. The mRNA levels of acetyl-CoA carboxylase 1, fatty acid synthase, lipoprotein lipase, stearoyl-CoA desaturase, peroxisome proliferator-activated receptor gamma, and sterol regulatory element-binding protein 1 (SREBP1) were enhanced by ATRA. Conclusion: ATRA promotes the synthesis of casein by regulating JAK2/STAT5 pathway and downstream mTOR signaling pathway, and it improves the fatty acid composition of MAC-T cells by regulating SREBP1-related genes.
Flowering time (or heading date) is controlled by intrinsic genetic programs in response to environmental cues, such as photoperiod and temperature. Rice, a facultative short-day (SD) plant, flowers early in SD and late in long-day (LD) conditions. Casein kinases (CKs) generally act as positive regulators in many signaling pathways in plants. In rice, Heading date 6 (Hd6) and Hd16 encode $CK2{\alpha}$ and CKI, respectively, and mainly function to delay flowering time. Additionally, the major LD-dependent floral repressors Hd2/Oryza sativa Pseudo-Response Regulator 37 (OsPRR37;hereafter PRR37) and Ghd7 also confer strong photoperiod sensitivity. In floral induction, Hd16 acts upstream of Ghd7 and CKI interacts with and phosphorylates Ghd7. In addition, Hd6 and Hd16 also act upstream of Hd2. However, whether CKI and $CK2{\alpha}$ directly regulate the function of PRR37 remains unclear. Here, we use in vitro pull-down and in vivo bimolecular fluorescence complementation assays to show that CKI and $CK2{\alpha}$ interact with PRR37. We further use in vitro kinase assays to show that CKI and $CK2{\alpha}$ phosphorylate different regions of PRR37. Our results indicate that direct posttranslational modification of PRR37 mediates the genetic interactions between these two protein kinases and PRR37. The significance of CK-mediated phosphorylation for PRR37 and Ghd7 function is discussed.
Proceedings of the Korean Society of Applied Pharmacology
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1995.10a
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pp.17-21
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1995
대부분의 인슐린의 작용들은 인슐린 수용체를 통하여 이루어진다. 인슐린이 수용체에 결합하면, 수용체 고유의 tyrosine kinase 효소활성의 증가를 유발시키며, 결과적으로 세포내에 존재하는 기질 단백질, IRS-1, 의 tyrosine 잔기의 인산화를 증가시키게 된다. 이후, 여러 형태의 serine / threonine protein kinase 의 연속적인 활성화가 일어난다. 이들에 부가해서, 인슐린의 효자는 세포핵 내에까지 전달되어 유전자 발현의 조절과 같은 세포핵 고유의 활동에도 관여한다. 현재, 세포막에서 시작된 인슐린의 신호들이 세포핵까지 전달되는 정확한 기전에 대해서는 알려진 바 없지만, 최근의 연구에 의하면 MAP Kinase 와 S6 Kinase 그리고 Transcription Factor AP-1의 중요성이 제시되고 있다. 특히 유전자 조절 기전에는 핵단백질인 transcription factor의 인산화 반응이 큰 역할을 한다고 보고되고 있는바, 본 연구에서 AP-1. transcription factor 의 인산화 반응이 인슐린의 신호전달계에 미치는 역할에 대하여 고찰하였다. 요약하면, AP-1 transcription factor의 구성원인 c-Jun, c-Fos 그리고 Fos 관련 단백질들의 인산화가 인슐린에 의해 증가되며, 동시에 그들의. DNA-binding activity 와 유전자 발현의 활성이 증가됨을 밝힘으로써, AP-1 transcription factor의 인산화 반응이 인슐린의 핵 내에서의 작용기전에 중요한 역할을 함이 제시되고 있다. 또한 AP-1 의 인산화 반응에 관여하는 세포핵 protein kinase로서 Casein Kinase II 의 중요성이 밝혀졌다.
Shanware, Naval P.;Williams, Leah M.;Bowler, Michael J.;Tibbetts, Randal S.
BMB Reports
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v.42
no.3
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pp.142-147
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2009
Small-molecule inhibitors of protein kinases have contributed immensely to our understanding of biological signaling path-ways and have been exploited therapeutically for the treatment of cancers and other disease states. The pyridinyl imidazole compounds SB 203580 and SB 202190 were identified as ATP competitive antagonists of the p38 stress-activated protein kinases and have been widely used to elucidate p38-dependent cellular processes. Here, we identify SB 203580 and SB 202190 as potent inhibitors of stress-induced CREB phosphorylation on Serine 111 (Ser-111) in intact cells. Unexpectedly, we found that the inhibitory activity of SB 203580 and SB 202190 on CREB phosphorylation was independent of p38, but instead correlated with inhibition of casein kinase 1 (CK1) in vitro. The inhibition of CK1-mediated CREB phosphorylation by concentrations of pyridinyl imidazoles commonly employed to suppress p38, suggests that in some cases conclusions of p38-dependence derived solely from the use of these inhibitors may be invalid.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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