Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum은 채소 무름병의 원인균이다. 박테리오신인 carocin D는 Pectobacterium carotovorum subsp. Carotovorum Pcc21 균주가 생산한다. Pcc21 균주의 비병원성인 돌연변이주를 선발하기 위해 Tn5을 이용하여 무작위적 삽입 돌연변이체들을 대상으로 병원성 검사를 하였다. 실험 결과 선발된 P. carotovorum subsp. carotovorum Pcc21-M15과 carocin D 유전자의 형질전환체인 E. coli(pRG3431)은 비병원성인 동시에 carocin D를 생산하여 무름병균인 P. carotovorum subsp. carotovorum Pcc3의 생장을 억제함을 확인하였다. Pcc21-M15와 E. coli (pRG3431)를 무름병균인 P. carotovorum subsp. carotovorum Pcc3과 함께 미네랄 오일법으로 상추에 처리한 결과 Pcc3 균주를 단독 처리했을 경우에는 3일만에 90%가 무름병에 걸린 반면, Pcc21-M15와 E. coli(pRG3431)를 함께 처리한 경우는 6일 후에도 25%의 상추에서만 무름병 증상을 보였다.
Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum (formerly Erwinia carotovora subsp. carotovora) is a plant pathogen that causes soft rot and stem rot diseases in several crops, including Chinese cabbage, potato, and tomato. To control this bacterium, we isolated a bacteriophage, PP1, with lytic activity against P. carotovorum subsp. carotovorum. Transmission electron microscopy revealed that the PP1 phage belongs to the Podoviridae family of the order Caudovirales, which exhibit icosahedral heads and short non-contractile tails. PP1 phage showed high specificity for P. carotovorum subsp. carotovorum, and several bacteria belonging to different species and phyla were resistant to PP1. This phage showed rapid and strong lytic activity against its host bacteria in liquid medium and was stable over a broad range of pH values. Disease caused by P. carotovorum subsp. carotovorum was significantly reduced by PP1 treatment. Overall, PP1 bacteriophage effectively controls P. carotovorum subsp. carotovorum.
Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum (PCC)는 세균성 무름병균으로 주로 감자, 양배추 등의 식물에서 질병을 일으킨다. 본 연구에서는 현장에서 신속하게 진단하기 위해 loop-mediated isothermal amplification법을 이용하여 1시간 내에 등온에서 검출 가능한 진단법을 개발하였으며, 이를 PCC-LAMP법이라 명명하였다. PCC의 lytic murein transglycolase 유전자를 특이적으로 증폭시키는 4개의 프라이머를 제작하였으며 최적 온도가 $61^{\circ}C$임을 확인하고 최적 조건을 확립하였다. 최적 조건을 바탕으로 4개의 프라이머가 $1{\times}10^3$ copies까지 검출하는 민감성을 확인할 수 있었다. 본 연구에서 개발된 PCC-LAMP법은 특이성 검사를 통해 PCC만이 특이적으로 검출됨을 확인하였으며, 이는 실제 시료에서도 적용 가능함을 확인하였다. PCC-LAMP법을 통하여 PCC를 신속하고 정확하게 검출함으로써 현장에서 유용하게 적용될 수 있을 것으로 사료된다.
국내 주요 배추재배단지 6곳을 정하여 토양 샘플에서 무름병균을 용균할 수 있는 bacteriophage를 분리하였다. 여름배추를 재배하는 평창과 태백의 토양 샘플에서 국내에서 분리한 15개의 다른 무름병균을 기주로 파지를 분리한 결과 태백의 토양은 다양한 병원균을 기주로 증폭하는 반면 평창의 파지는 두 종류의 균에서만 증폭이 되어 매우 좁은 기주 범위를 가졌다. 무름병균 P. carotovorum subsp. carotovorum Pcc3의 균주는 거의 모든 토양 샘플에서 파지를 증폭할 수 있어 앞으로 파지를 이용한 무름병균 예찰 균주로 사용될 수 있는 가능성을 보여 주었다. 국내 무름병균을 용균할 수 있는 파지는 Myoviridae, Podoviridae, Siphoviridae 세 종류로 밝혀 졌으며 국내 거의 전 지역에서 Siphoviridae가 분리되었다.
Plant-cell-wall-degrading enzymes (PCWDEs) of Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum are the key virulence factor in pathogenesis of soft rot disease of vegetables. The production of PCWDEs is controlled in a cell density dependent manner to avoid the premature production of PCWDEs and subsequent activation of plant defense. N-oxoacyl-homoserine lactone (OHL) is essential for quorum sensing in the soft rot pathogen and the expI gene is responsible for OHL production. The ExpI homolog isolated from P. carotovorum subsp. carotovorum SL940 had 94% identity with ExpI of E. carotovora subsp. carotovora scc3193 and 74% identity with Carl of E. carotovora subsp. atroseptica. The transgenic plants that express exp I uner the control of CaMV35S promoter were able to produce diffusible OHL. Transgenic plants producing OHL were very resistant to the infection of P. carotovorum subsp. carotovorum. Since the PR1 gene was strongly induced and NPR1 and NPR4 were induced weakly in transgenic plants compared to the wild type, salicylic acid-dependent pathways is likely involved in the resistance to the soft rot pathogen P. carotovorum subsp. carotovorum in ExpI transgenic plants.
Fifty-four Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum strains isolated in Korea were characterized by a spectrum of antibacterial activities against 7 indicator strains chosen to represent various regions and host plants. All P. carotovorum subsp. carotovorum isolates tested could be grouped into 4 classes depending on the pattern of antibacterial substance production. All tested strains had DNA fragment(s) homologous to the genes encoding carotovoricin and 21 of them had genes homologous to DNA invertase. Sixteen strains had genes homologous to the genes encoding carocin S1. Several isolates produced antibacterial substances active against strains in Brenneria, Pantoea, and Pectobacterium genera that belonged formerly to the genus Erwinia. Strains in Pseudomonas or Xanthomonas sp. were not sensitive to the antibacterial substances produced by P. carotovorum subsp. carotovorum, except for X. albilineans that was sensitive to antibacterial substances produced by most strains in P. carotovorum subsp. carotovorum and P. betavasculorum KACC10056. These results demonstrated the diverse patterns of antibacterial substance production and the possibility of the existence of new antibacterial substance(s) produced by P. carotovorum subsp. carotovorum isolated in Korea.
Pectobacterium carotovorum은 배추를 비롯한 광범위한 식물체에 무름병을 일으키는 병원성 세균으로, 무름병의 효율적인 방제를 위하여 신속한 병원체의 진단이 요구되고 있다. 따라서 본 연구에서는 높은 특이성으로 다양한 진단에 적용되고 있는 PCR법을 이용하여 Pectobacterium carotovorum을 높은 정확성과 민감성으로 검출할 수 있는 진단법을 개발하고자 하였다. 먼저 P. carotovorum에 특이성이 있다고 보고된 다양한 특이 primer들을 비교하여 가장 특이성이 높은 primer쌍들을 선별하였으며, 최종 선발된 특이 primer쌍은 ERB_3F (5'-TGCGACACCTCCTCATCACG-3'), ERB_3R (5'-CTTATCACGCTGTAACCAGC-3')로 나타났다. 이들을 사용한 PCR 검출법은 $58^{\circ}C$의 annealing 온도, 15 mM $MgCl_2$ 농도 등으로 최적화되었으며, 최적조건에서 P. carotovorum 특이 PCR 진단법은 10 pg, 즉 $2\times10^3$ copies의 병원균 유전자를 검출할 수 있는 우수한 민감성을 보였다. 또한 배양된 균주가 아닌 현장 시료에서 본 P. carotovorum 검출법을 시험해 본 결과 이 검사법은 병원균 배양없이 현장에도 직접 적용할 수 있음을 입증하였다. 따라서 본 연구를 통해 확립된 P. carotovorum 특이 PCR 진단법은 해당 병원균을 신속하게 진단하는데 유용하게 사용될 수 있을 것이라 기대한다.
Kim, Jeong-Ho;Joen, Yong-Ho;Kim, Sang-Gyu;Kim, Young-Ho
The Plant Pathology Journal
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제23권4호
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pp.314-317
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2007
A soft stem rot disease was observed on Chamaecereus silvestrii (Korean name: Sanchui), a scion of graft-cactus, in major growing areas of Suwon (National Horticulture Research Institute), Anseong, Eumseong, Cheonan, Daegu, and Goyang, Korea during 2000 and 2001. Typical symptoms were soft rots characterized by moist and watery decay of the whole cactus stem, which initiated as small water-soaked lesions and enlarged rapidly to the entire stem. The causal organism isolated from the infected stems was identified as Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum (Erwinia carotovora subsp. carotovora) based on its physiological and biochemical characteristics and confirmed by the cellular fatty acid composition and Biolog analyses. Artificial inoculation of the bacterium produced the same soft rot symptoms on the cactus stems, from which the same bacterium was isolated and identified. This is the first report of the P. carotovorum subsp. carotovorum in the graft-cactus C. silvestrii in Korea.
In order to control Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum, a novel virulent bacteriophage PM2 was isolated. Bacteriophage PM2 can infect 48% of P. carotovorum subsp. carotovorum and 78% of P. carotovorum subsp. brasilliensis but none of atrosepticum, betavasculorum, odoriferum and wasabiae isolates had been infected with PM2. PM2 phage belongs to the family Myoviridae, and contains a large head and contractile tail. It has a 170,286 base pair genome that encodes 291 open reading frames (ORFs) and 12 tRNAs. Most ORFs in bacteriophage PM2 share a high level of homology with T4-like phages including IME08, RB69, and JS98. Phylogenetic analysis based on the amino acid sequence of terminase large subunits confirmed that PM2 is classified as a T4-like phage. It contains no integrase- or no repressor-coding genes related to the lysogenic cycle, and lifestyle prediction using PHACT software suggested that PM2 is a virulent bacteriophage.
Soft rot symptom was observed on lily bulb in the fields and at a low temperature storage house from 1999 to 2000 in Korea. The small dark-brown lesion appeared on the bulb, and enlarged and developed into the inner scales of the bulb. The bulb became water soaked and gave out unpleasant odor. Two different pathogenic bacteria were isolated from infected tissues. The causal bacteria were identified as Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum (Erwinia carotovora subsp. carotovora) and Pseudomonas marginalis based on bacteriological characteristics. Pathogenicity of the bacteria was proven by Koch's postulations. This is the first report of bacterial soft rot of lily bulb in Korea caused by the two bacteria.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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