Objective: Graves' disease encompasses hyperthyroidism and diffused goiter associated with auto-antibodies to the thyroid stimulating hormone(TSH) receptors. In clinical environment, treatments of Graves' disease have many side effects such as recurrence and hypothyroidism. We've studied the effects of Sipyukmiyukieum on DNA synthesis, cAMP synthesis, and MHC-class II expression of FRTL-5 thyroid cells were studied. Methods: DNA synthesis was investigated by using BrdU staining and cAMP synthesis by ELISA kit, and expression of $interferon-{\gamma}$ activated MHC class II by Flow cytometer. Results: After introduction of Sipyukmiyukieum, significant inhibition of DNA synthesis. cAMP synthesis, and expression of $interferon-{\gamma}$ activated MHC class II of FRTL-5 thyroid cells was observed. Conclusions: Judging from these results, Sipyukmiyukieum has potential as a potent herbal treatment for inhibiting the enlargement of goiter, synthesis of abnormal thyroidal hormones, and autoimmuine responses of Graves' disease.
HeLa $S_3$세포에서 MMC에 의해 유발된 DNA회복합성은 농도$(0.05\\sim 0.5\\mu g/ml)$에 따른 증가를 보이지 않고 그 율도 비\ulcorner적 낮아 $0.1\\sim 0.5\\mu g/ml$ 농도에서 조사한 전 세포의 $7\\sim 9%$를 나타내고 있다. 시간 변화에 따른 실험에서는 MMC를 제거한 후 24시간까지 거의 비슷한 율로 DNA회복합성이 계속되고 있다. thymidine 상사체중 BUdR을 전처리한 군에서만이 MMC에 의한 DNA회복합성을 증가시켰다. 그러나 BUdR 또는 IUdR과 MMC를 복합처리 할 경우 시간경과에 따라 정상 DNA합성은 감소된다. 이들 결과는 MMC에 의해 유발된 DNA손상은 빠르고 느린 두단계로 회복됨을 암시하는 것이라 생각된다.
신경아세포종 세포 분화의 조절에 대한 연구는 아직 초기 단계에 불과하나 신경아세포종양의 임상적인 치료에 매우 중요한 기초가 된다. 본 연구는 신경아세포종 세포의 분화를 유도 할 수 있는 유용한 시약을 찾아내고자 하는 노력의 일환으로, 잘 알려진 DNA 합성 억제제가 신경 아세포종의 분화를 유도할 수 있는지를 살펴보고자 신경아세포종양 세포의 형태적, 생화학적 및 유전자 발현에 미치는 효과를 살펴보았다. 신경아세포종양으로부터 수립된 세포주, IMR-32 세포에 DNA 합성 억제제인 sodium butyrate, hydroxyurea, cytosine arabinoside를 각각 처리한 결과 처리하지 않은 대조군과는 달리 정상신경 세포 분화시 볼 수 있는 신경 돌기의 성장이 유도됨을 관찰할 수 있었으며 ,신경 전달 물질인 acetylcholine의 합성 효소인 choline acetyltransferase의 활성도가 현저히 증가되었다. 또한DNA합성 억제제를 처리하지 않은 IMR-32세포에서 탐지되지 않았던 c-myc 유전자의 발현이 시약 처리시 확연히 탐지됨을 관찰할 수 있었다. 이러한 실험 결과들은 DNA합성 억제제가 IMR-32세포의 성장을 억제하고 분화를 유도했음을 보여준 것이며, 어린 아이 시기에 많이 발병되는 신경아세포종양의 급속한 악성화나 전이의 억제기전을 제시해 줄 수 있으리라 생각한다.
As one of the starting materials, methylthioacetyl chloride(7) was synthesized in fair yield from mercaptoacetic acid via methyl methylthioacetate(5) prepared by alkylation employing N, N'-dicyclohexyl-O-methylisourea(4). Then 1-$\beta$-D-arabinofuranosylcytosine-5'-methylthioacetate (3) was prepared by esterification of ara-C with obtained methylthioacetyl chloride and tested for inhibitory activity on DNA synthesis in the growing primary hepatocytes and hepatoma strains($H_4$-II-E and HTC cells). In these in vitro cell lines, the inhibitory effect of ara-C-MTA(3) on DNA synthesis was similar to that of its parent ara-C but slightly lower.
본 연구에서는 유전자 복제기작을 생화학적, 분자생물학적 방법을 사용하여 bacteriphage T7을 대상으로 연구하였다. Bacteriophage T7의 유전자 복제, 재조합, 수선시 필수 단백질로 작용하는 gene 2.5 단백질의 생체내 기능에 대한 유전학적 연구와 단백질을 분리 정제하여 복제 단백질들과의 상호작용에 대한 연구를 수행하였다. 연구결과 gene 2.5 단백질은 DNA복제시 필수 구성단백질로 작용하며, 복제과정에서 유전자 복제에 관여하는 핵심 단백질들인 DNA polymerase, helicase/primase와 직접 단백질-단백질 상호 협동 작용을 하는 r것을 증명하였다. 특히 gene 2.5 단백질의 C-terminal domain이 절편된 변이체의 경우 복제 단백질들과 상호작용이 결여되었다. 따라서 C-terminal domain이 gene 2.5 단백질의 기능에 필수적으로 관여함을 입증하였다.
Mouse mammary epithelial cells(NMuMG) were plated onto 24 well phates(100,000 cells/well), in DMEM supplemented with 10% fetal calf serum. After serum starvation for 24 hours, EGF)0~100ng/ml) was added simultaneously with IGF-I(10ng/ml), 1$\mu$M photoreactive cAMP(4,5-dimethoxy-2-nitrobenzyl adenosine-3',5' cyclic monophosphate, DMNB) or IGF-I plus DMNB. After 2 hours, the cells were expposed to UV light(300nm, 3 second pulse0 in order to activate DMNB which induces a rapid transient increase in intracellular cAMP upon UV irradiation. DNA synthesis was estimated as incorporation of 3H-thymidine into DNA(1 hour pulse with 1$\mu$Ci/ml, 18~19 hours after UV exposure). Without IGF-I or DMNB, EGF(10 or 100ng/ml) increased DNA synthesis from 8,362 dpm/well in control to 16,345 or 18,684 dpm/well with EGF(pooled SE=1,239 dpm/well, P<0.05). IGF-I or IGF-I plus DMNB alone increased DNA synthesis from 8,362 dpm/well in control to 17,307 or 20,427 dpm/well, respectively(P<0.05). Addition of IGF-I, DMNB or IGF-I plus DMNB into 0~100ng/ml EGF did not significantly change the shape of dose response curve of EGF alone. In other experiment, EGF or IGF-I plus DMNB into 10ng/ml EGF group exhibited interaction effect in DNAsynthesis [EGF(10ng/ml)=18,497; IGF-I+EGF=22,837; DMNB+EGF=20,658 ; IGF-I+DMNB+EGF=29,658, pooled SE=1,055, P<0.05]. These results indicate that simultaneous activation of EGF, IGF-I and intracellular cAMP interact in DNA synthesis of mouse mammary epithelial cells.
자궁경부암은 전 세계적으로 네번째를 차지하는 여성암이다. 자궁경부암의 대부분 원인은 인유두종 바이러스의 감염이다. 인유두종 바이러스를 검출하기 위해 다양한 분자진단학적 방법들이 고안되었다. 분자진단학적 방법 중의 real-time PCR은 목표 DNA 또는 RNA의 정량과 민감도 향상을 목표로 도입되었다. 특히, real-time PCR 과정은 수행 전에 RNA 추출 및 상보적인 DNA 합성 과정이 필요하다. 따라서 본 연구에서는 민감하고 적합한 상보적인 DNA 합성 키트를 알아보기 위해서 상보적인 DNA 합성에 이용되는 두 개의 상용화된 키트를 평가하였다. 자궁경부암 세포주에서 두개의 상보적인 DNA 합성 키트의 $R^2$과 효율성을 비교한 결과 차이가 없었다. 그러나 Invitrogen 키트보다 Takara 키트가 $10^2$ 및 $10^3$ SiHa 세포주에서 P<0.001를 나타내었고 $10^1$ 및 $10^2$ HeLa 세포주에서도 P<0.001를 나타내었다. 이를 통해 Takara 키트가 Invitrogen키트보다 민감도가 높음을 알 수 있었다. 또한 40개의 탈락세포검체의 8, 4, 2, 1 mL을 이용하여 상보적인 DNA 합성 키트를 비교한 결과 Invitrogen 키트보다 Takara 키트가 8, 4, 1 mL에서 P<0.01 및 0.5 mL에서 P<0.05을 나타내어 임상 검체를 이용하였을 때에도 Takara 키트가 Invitrogen 키트보다 민감도가 높음을 알 수 있었다. 본 연구는 적합한 상보적인 DNA 합성 키트를 확인하기 위해 수행되었으며, 상보적인 DNA 합성 키트가 real-time PCR 결과 다양성에 영향을 미친다는 것을 시사하였다.
Objective : Graves' disease, the most common cause of hyperthyroidism, is an autoimmune disorder associated with autoantibodies to the TSH receptor. The clinical features of Graves' disease are goiter and hypermetabolic symptoms induced by excessive hormones. Antithyroid drug therapy is the first-line treatment for Graves' disease in Korea, Japan and European countries. Yet in spite of a long period and high-dose of treatment, it is hard to achieve remission because of adverse effects, frequent recurrence and resistance to antithyroid drugs. Recently, it has been reported that the abnormal thyroid hormone and clinical symptoms of Graves' disease were reduced by Ahnjeonbaekho-tang (AJBHT). Methods : To investigate the effectiveness and action mechanism of AJBHT, we studied the influence of AJBHT on FRTL-5 thyroid cell proliferation, DNA synthesis and expression of T4, TSH, cAMP, Tg and TPO mRNA. Results : AJBHT significantly inhibited the FRTL-5 cell proliferation, DNA synthesis, T4 synthesis, cAMP production and the expression of Tg mRNA in comparison with control and MMI. Conclusions : These results suggest that AJBHT may inhibit the cell proliferation and DNA synthesis by regulating the cAMP, and suppress the T4 synthesis by modulating Tg mRNA expression and cAMP synthesis, and that it may be useful agent for treating the goiter and hormone abnormality of Graves' disease.
Using a flue- cured tobacco variety, KF 109, effect of growth regulators(fatty alcohol and C- MH) on the change of protein, DNA, and RNA were investigated. Generally, inhibition of DNA synthesis was observed soon after become notably reduced when checked on 14 days after the treatment. Fatty alcohol treatment appeared to alleviate the inhibition of DNA synthesis caused by the C - MH treatment. It was also observed that in the tips DNA content increased slightly at the early stage after the C - MH treatment but evident reduction of it was resulted from 7th day after the treatment. RNA content in cutters and tips was increased initially but variable transcription inhibitory activities - not so obvious as was observed in DNA synthesis - according to leaf positions were shown thereafter. Ripening of leaves probably due to senescence was advanced by the treatment of the growth regulators. DNA content in root was relatively higher in plants treated with the growth regulators while it was clearly decreased in stalk, However, RNA contents in tissue of stalk and root was not different with that of foliage. Increase of protein content in foliage as well as in stalk was evident 14 days after dual treatment of fatty alcohol and C - MH.
Cytosine arabinoside(AraC) inhibits DNA synthesis and ${\beta}$-DNA polymerase, an enzyme involved in DNA repair. This, a potent antimitotic agent, is clinically used as an anticancer drug with side effect of severe neurotoxicity. Earlier reports suggested that inhibition of neuronal survival by AraC in sympathetic neuron may be due to the inhibition of a 2'-deoxycytidine-dependent process that is independent of DNA synthesis or repair and AraC induced a signal that is triggers a cascade of new mRNA and protein synthesis, leading to apoptotic cell death in cultured cerebellar granule cells. The present study would suggest whether caspase family(ICE/CED-3-like protease) involved in AraC-induced apoptosis pathway of PC12 cells. It was observed that treatment of PC12 cells with AraC led to decrease of viability by MTT assay and morphology changes, which did not suggest that AraC induced apoptosis in PC12 cells. The mRNA of caspase-1/caspase-3 were expressed in PC12 cells constitutively, and AraC did not activate caspase family. These results suggest that caspase-1/caspase-3 may not be required for AraC-induced cell death pathway in PC12 cells.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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