Objective: The conservation of Bali bulls, the Indonesian native breed of cattle, is crucial for cattle breeding in Indonesia. To guarantee the spread of Bali bulls through artificial insemination the quality of the frozen semen must be high. To this end, adding an extender material to semen that increases spermatozoa's survival during cryopreservation is important. Green tea extract (GTE) can be used as cryoprotectant because its high antioxidant activity can help avoid reactive oxygen species formation. Methods: Semen of five Bali bulls from the National Artificial Insemination Center at Singosari, Indonesia was collected routinely twice a week. First, fresh semen inspection was performed to determine the feasibility of using Bali bulls as animal samples. The extender used in this study was Tris-based egg yolk. The samples were divided into four treatments: T0, no GTE added to the extender; T1, 0.05 mg GTE plus 100 mL extender; T2, 0.10 mg GTE plus 100 mL extender; and T3, 0.15 mg GTE plus 100 mL extender. The semen freezing process was conducted according to standard procedures and sperm quality parameters, i.e., sperm motility, viability, abnormalities, and membrane integrity observed pre-freezing and post-thawing. Results: There were significant differences in total motility, progressive motility, viability, and integrity membrane of Bali bull sperm at both pre-freezing and post-thawing after adding GTE into the extender. In contrast, there were no differences in abnormalities among treatments. Conclusion: Adding GTE at a 0.15 mg into 100 mL Tris-based egg yolk extender can improve the quality of cryopreserved Bali bull sperm.
Objective: This study aims to identify heat shock protein70-2 (HSP70-2) and protamine-1 (PRM1) mRNA and protein in Madura bull sperm and demonstrate their relation as bull fertility biomarkers. Methods: The Madura bull fertility rates were grouped based on the percentage of first service conception rate (%FSCR) as high fertility (HF) (79.04%; n = 4), and low fertility (LF) (65.84%; n = 4). mRNA of HSP70-2 and PRM1 with peptidylprolyl isomerase A (PPIA) as a housekeeping gene were determined by quantitative real-time polymerase chain reaction, while enzyme-linked immunoassay was used to measure protein abundance. In the post-thawed semen samples, sperm motility, viability, acrosome integrity, and sperm DNA fragmentation index were analyzed. Data analysis was performed on the measured parameters of semen quality, relative mRNA expression, and protein abundance of HSP70-2 and PRM1, among the bulls with various fertility levels (HF and LF) in a one-way analysis of variance analysis. The Pearson correlation was used to analyze the relationship between semen quality, mRNA, proteins, and fertility rate. Results: Relative mRNA expression and protein abundance of HSP70-2 and PRM1 were detected and were found to be highly expressed in bulls with HF (p<0.05) and were associated with several parameters of semen quality. Conclusion: HSP70-2 and PRM1 mRNA and protein molecules have great potential to serve as molecular markers for determining bull fertility.
본 연구는 종모우의 정자수정능력 평가방법의 개발과 정자 기능 및 성상 변화에 영향을 미치는 요인을 알아보기 위하여 시행하였다. 동결-융해된 종모우 정액을 대상으로 정자의 운동성과 정자의 형태를 분석하였고, 정자의 기능 검 사 항목으로서 체외수정(IVF), HOST, Ca-ionophore에 의한 첨체반응율, 정자의 ROS 측정을 위한 luminol, lucigenin-dependent chemiluminescence, LPO 분석을 위한 malondialdehyde의 측정 및 TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT) dUTP nick end labelling) 기법을 이용한 정자의 DNA fragmentation를 측정하였으며 이들 각각의 조사 항목들의 분석치들과 체외수정율 및 배발생율과의 상관관계를 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 고수정군과 저수정군의 체외수정율과 배반포 발생율의 평균은 각각 64.4%와 34.3%, 18.50%와 6.2%였으며 두 군간에 통계학적으로 유의한 차이를 보였다(P<0.05). 고수정군과 저수정군의 정자운동성과 첨체반응률은 각각 평균79.0 %와 66.2%, 40.7%와 22.9%로 두 군간에 통계학적으로 유의한 차이를 보였으나(P<0.05), 정상형태 정자의 비율과 HOST는 각각 평균 94.6%와 92.7%, 69.4%와 59.8%로 두 군간 유의한 차이를 보이지 않았다. 2. Luminol dependent chemiluminescence, LPO 및 DNA fragmentation의 평균은 고수정군과 저수정군에 있어서 각각 6.4와 6.5, 2.Onmol와 3.Inmol 및 2.6%와 7.4%로 두 군간 통계학적으로 유의한 차이를 보였으나(P<0.05), lucigenin dependent chemiluminescence는 4.7와 4.6로 두 군간 유의한 차이를 보이지 않았다. 3. 체외 수정율은 정자의 운동성 및 첨체반응율과 통계학적으로 유의한 정(positive)의 상관관계(r=0.87, p<0.01; r=0.81, p<0.05)를 나타내었으며, luminol dependent chemiluminescence, lipid peroxldation 및 DNA fragmentation과는 통계학적으로 유의한 부(negative)의 상관관계 (r= -0.81, p<0.05; r: -0.74, p<0.05; r : 0.81, p<0.05)를 나타내었다. 그러나 체외수정율은 정상형태 정자의 비율, HOST 및 lucigenin dependent chemiluminescence와는 유의한 상관 관계를 나타내지 않았다. 4. 배반포 발생율은 첨체반응율과 통계학적으로 유의한 정의 상관관계(r=0.71, p<0.05)를 나타내었으며, luminol dependent chemiluminescence, lipid peroxidation 및 DNA fragmentation과는 통계학적으로 유의한 부의 상관관계(r= -0.71, p<0.05; r= -0.89, p<0.01; r= -0.71, P<0.05)를 나타내었다. 배반포 발생율은 정자의 운동성, 정상형태 정자의 비율 및 HOST, lucigenin dependent chemilumihescence와는 유의한 상관관계를 나타내지 않았다. 이상의 결과를 종합해 보면 정액질의 저하에 ROS의 영향이 밀접히 연관되어 있음을 알 수 있으며, 또한 본 연구에서 적용된 기법들은 정액질의 평가 및 정자 수정능력 향상을 위한 기술개발에 있어서 유용한 평가 방법으로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
A 15 months old male pit bull terrier was shown submandibular swelling, which was extended from left submandibular area through mandibular symphysis to right submandibular area and toward around left neck. In history taking, recurrence of swelling was recorded after conservative surgical incision, drainage and dressing. Palpation revealed no pain and heating, partial flutuation and hardness. By paracentesis, it was showed blood-tinged tenacious exudate without bad-smelling. Left submandibular salivary gland was able to be movable freely and the size decreased to half of that of right submandibular salivary gland. It was diagnosed as cervical salivary mucocele. In operation, rostral portion of left sublingual salivary gland was observed to be damaged transversely, showed black color and leaked saliva. Submandibular gland and rostral portion of sublingual salivary gland were resected, after ligation of ducts of submandibular and sublingual salivary glands. At 15 days postoperation, serosanguineous exudate from operation wound was dramatically decreased and stable granulation tissue mass at this area was first palpated. At 39 days after operation, outline of left and right mandibular was appeared normal and skin tenderness of mandibular area was equal to that of the other body wall.
Artificial insemination technique has been contributed immensely for production of livestock worldwide as a critical assisted reproductive technique to preserve and propagate excellent genes in domestic animal industry. In the past decade, methods for semen preservation have been improved mostly in liquid preservation method for boar semen and freezing method for bull semen. Among many factors affecting semen quality during preservation, reactive oxygen species, produced by aerobic respiration in sperm for survival and motility, are unfavorable to sperm physiology. In mammalian cell as well as in the sperm, antioxidant system plays a role in degradation of reactive oxygen species. Magnetized water forms smaller stabilizing water clusters, resulting in high absorption and permeability of the cell for water, implicating its application for semen preservation. Therefore, this review focuses on preservation methods of boar and bull semen with respect to improvement of extender and reduction of reactive oxygen species by using magnetized water and supplementation of antioxidants.
The present investigation was carried out to assess the effect of Sephadex (G-15) filtration on the post thaw bull semen quality and conception rate. Post thaw unfiltered (control) and Sephadex filtered semen from four healthy bulls (three cross bred and one pure bred Holstein Friesian) were subjected to microscopic examination viz. sperm concentration, individual motility, live sperm count and sperm morphology. Sixty-two healthy, normal cycling crossbred cows were inseminated with post thaw unfiltered (n=32) and filtered semen (n=30). Sephadex filtration of post thaw semen significantly (p<0.05) decreased total sperm concentration and sperm with abnormal head, mid piece and tail. The overall average total sperm concentration, head and tail defects in filtered semen decreased significantly (53.4, 1.2 and 6.4 million) than in the unfiltered semen (80.4, 2.4 and 15.7 million, respectively). However, after filtration significant (p<0.05) increase in overall average motile and live sperm concentration were observed (38.8 and 38.0) as compared to unfiltered semen (29.2 and 32.0 million, respectively). The overall conception rate recorded was 21.9% with post thaw unfiltered semen and 56.7% with filtered semen. It was concluded that Sephadex filtration of post thaw semen improved its quality and conception rate.
These experiments were carried out to develop new techniques for In Vitro separatin of X-and Y-bearing spermatozoa. The bull semen was applied to the various Gel-Columns filled with swellen Sephadex G-50 Fine and then elutriated wtih Locke solution (elutriation rate; 1ml/3-4min., 1ml/1-2min.). Elutriated solution was fractionated into 1ml by automatic Fraction Collector and spermatozoa included in each fraction were subjected to the estimation of viability and recovery rate, and to B-body test. The results obtained in these experiments were summarized as follows: 1. When the column size and the elutriation rate were adjusted to 15$\times$1.6cm and 1ml/3-4min., respectively, the highest sperm concentration was obtained from the 8th to the 12th fraction. 2. As a trend, the viability of spermatozoa was improved by chromatography, and the degree of improvement ranged 5 to 10 percentage. 3. The average recovery rate of spermatozoa applied to column was 73.2 percentage and ranged 52.6 to 81.3 percentage. 4. The lowest rate of B-body bearing spermatozoa following chromatography was obtained when the column size and the elutriation rate were adjusted to 15$\times$0.8cm and 1ml/1-2min., respectively.
This paper deals with a control technique of eliminating the transient vibration of a geared mechanical system. This technique is based on a model-based control with a rotational speed sensor in order to establish the damping effect at the driven machine part. A rotational speed sensor is installed in a driven gear, namely a bull gear. A control model is composed of a reduced-order mechanical part expressed as a transfer function between the rotational speed of the motor and that of the bull gear. This control model estimates a load speed after the rotational speed of the bull gear is acted on the transfer function. The difference between the estimated load speed and the motor speed is calculated dynamically and it is added to the velocity command to suppress the transient vibration generated at the load. This control technique is applied to a dies driving spindle of a form rolling machine. In this paper, the performance of this control method is examined by simulations. The settling time of the residual vibration generated at the loading inertia can be shortened down to about 1/2 of the uncompensated vibration level.
A large number of toxicological substances and pharmacological and physical agents can cause reproductive intervention at the cellular and molecular level. The present study was designed to assess the effect of mercury ($HgCl_2$) at 50 to $550{\mu}M$ concentration ranges, in vitro, on the sperm membrane and DNA integrity, viability, and acrosomal status of normal bull spermatozoa. The samples were processed for sperm analyses using semen-diluting fluid (PBS, pH 7.2). We recorded a sharp increase in the lipid peroxidation/LPO rate; the highest was at $550{\mu}M$ mercury concentration, indicating a deleterious effect of mercury on the sperm membrane intactness. There was also a strong negative correlation between LPO rate and % viable spermatozoa (R = 0.987, p<0.001). Data obtained from a comet assay technique revealed that mercury is capable of inducing DNA breaks in the sperm nuclei. Interestingly, 92% of DNA breaks were double-stranded. The correlation between LPO rate and % DNA breaks was 0.984. Performing the gelatin test indicates that mercury is able to alter the integrity of acrosomal membranes showing an abnormal acrosome reaction. In this regard, a strong link was found between LPO rate and % halos (R = 0.990, p<0.001). Collectively, mercury proved to be a potent oxidant in the category of environmental factors affecting bull spermatozoa. Hence, considering the wide spread use of mercury and its compounds, these metals should be regarded with more concern.
A 2-month-old, intact female white Bull Terrier presented because of suspected deafness. The coat color was predominantly white and the iris color, of both eyes, was brown. The dog did not respond to the owner's voice when the sound stimuli were presented outside of the visual field; however, the dog responded to visual gestures. The other physical, neurological, otoscopic, radiographic, and blood examinations were unremarkable. To assess the apparent deafness, brainstem auditory evoked responses (BAER) were recorded and analyzed in the dog with suspected deafness as well as a normal littermate. The response in the normal littermate consisted of a series of five wave peaks (I-V) with decreased amplitude and prolonged latency as the stimulus intensity decreased. The BAER from the dog suspected of deafness appeared as a flat line and did not reveal identifiable peaks that corresponded to those found in the normal littermate. Thus, congenital, sensorineural and bilateral deafness was confirmed by the BAER.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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