청국장 점질물인 PGA의 갈변 및 갈변 반응물질의 분획에 따른 갈변도와 전자 공여능에 따른 항산화력을 알아보았다. PGA의 갈변은 자체적으로는 갈변이 잘 일어나지 않고, 염기적 조건 하에서 glucose을 첨가하고 가열하면 갈변이 급격하게 일어나며 전자 공여능 또한 높게 나타났다. 염기적 조건 하에서 얻은 PGA 갈변 반응 물질(Glu-PGA, pH 8.2)을 Sephadex G-50을 이용하여 분획하고, 분획에 따른 갈변도 및 DPPH를 이용한 전자 공여능을 측정하였다. 분획된 갈변 반응 물질들은 비교적 광범위한 갈변도 및 전자 공여능을 보여 주었다. 이들 중 갈변도 및 전자 공여능이 상대적으로 높은 F-7과 F-20의 UV-VIS 흡수대에 있어서는 F-20은 멜라노이딘의 흡수대인 260-320nm에 걸쳐 완만한 흡수곡선을 나타내었고, F-7은 270nm 부근에서 특징적인 최대 흡수대를 나타내었다. 두 분획 물질의 분자량은 SDS-PAGE로 분석한 결과 F-7은 대략 35kDa 이상으로 나타났고, F-20은 SDS-PAGE상에서 뚜렷한 크기는 알 수 없었으나, F-7 보다는 비교적 저분자량을 갖는 물질이라는 것을 알 수 있었다.
The chemistry background of the Maillard reaction focused on pyrazines and factors affecting the reaction products were reviewed. The Maillard reaction, also called a non-enzymatic browning reaction, is quite complex and generates numerous reaction products. In processed foods, it is generally accepted as a key reaction to produce flavor components. Specially, pyrazines possess an important impact character on the roasted foods with other heterocyclic compounds. The Maillard reaction is initiated by condensation between reducing sugar and amino group, and N-glycosylamines are produced via Schiff base with dehydration of water. After the rearrangement of the N-glycosylamines, they follow transformation into deoxyhexosones which are reactive intermediates. Degradation and fragmentation are facilitated by rearranged compounds. By condensation, pyrazine, one of the final Maillard products, is generated as a relatively stable form to provide specific aromas. During the processes of the reaction, chemical or physical environmental parameters affect the formation of the products.
In this work the antioxidant effects of browning reaction products prepared by xylose-tryrtophan reaction system were discussed. The antioxygenic brown pigments were separated by solvent extraction, and column chromatography and isolated by gel filteration. The functional groups of the brown pigments which had antioxidant activity were examined. The brown pigments extracted with methanol showed antioxidant effect and were fractionated in 5portions on DEAE-cellulose column. The elutes with methanol: acetic acid(10:30 v/v sol n(A), methanol: chloroform(95:5 v/v) sol n(C), and chloroform: acetic acid(10:30 v/v) sol n(E) only showed antioxidant activity and their compositions were 22.43, 21.51 and $34.43\%$ respectively. When each fraction on DEAE-cellulose column was reseparated on Sephadex LH-20 column, 2 fractions were obtained from portion A and C respectively. Molecular weights of A, C and E fraction of brown pigments were from 2,600 to 3,700. By elucidation of IR spectra, the pigment fractions which showed a strong antioxidant activity were tearing the indole group. It is suggested that the antioxidant function of the brown pigment is due to hydroxy and amino group. A higher activity of the brown pigment fraction E might be attributed to carboxylic acid or carboxylic ester compounds.
홍삼에서 분리한 수용성 갈변물질의 항산화 활성을 DPPH 수소공여능 및 hydrogen peroxide 시스템에서 조사한 결과를 다음과 같다. 1. DPPH 수소공여능 수용성 갈변물질 S-1, S-2는 반응시간이 경과함에 따라 완만하게 감소하였고, L은 S-1, S-2보다 시간이 경과 함에 따라 감소폭이 증가하였다. L의 경우 BHT, BHA $5{\times}10^{-4}M,\;{\alpha}-tocopherol\;1{\times}10^{-4}M$ 및 ascorbic acid $5.7{\times}10^{-3}M$ 보다 감소폭이 증가하였으나, S-1, S-2는 합성 항산화제와 감소폭이 비슷하였다. 2. Synergist 효과 L, S-1 및 S-2 와 상기의 합성 항산화제 농도와 시너지스트 효과를 조사한 결과, 모든 시험구에서 반응 시간이 경과 함에 따라 감소폭이 증가하여 시너지스트 효과가 나타났다. 3. Hydrogen Peroxide 소거능 :수용성 갈변물질의 hydrgen peroxide 소거능을 조사한 결과, L은 $50\~80\%$, S-1은 $70\~100\%,$ S-1은 모든 첨가구에서 반응 초기부터 $100\%$로 완전히 소거되었다.
Antimutagenic activity of the enzymatic browning reaction products (EBRPs) was investigated by using the spore rec-assay with Bacillus subtilis strains H17 $(rec^+)\;and\;M45 (rec^-)$. The EBRPs tested were prepared from the reactions of five different kinds of polyphenols with polyphenol oxidase isolated from the leaves Perilla frutescens. In the spore rec-assay, most of the polyphenolic compounds tested showed positive, whereas only their tested compound showed negative respectively. In addition of polyphenol oxidase inhibitors such as cysteine, glutathione and ascorbic acid to the reaction mixtures consisted with the polyphenol oxidase and polyphenols, the mutagenic effects were increased in the spore recassay. These results show that the activity of polyphenol oxidase may play an important role in the reduction of mutagenicity of polyphenols.
고구마효소 갈변반응생성물(SPEBRP)의 항돌연변이 효과를 검토하기 위하여 DNA breaking test, spore rec assay, Ames test를 행하였다. DNA breaking test에서 catechol- 및 hydroxyhydroquinone-SPEB-RPs는 $Fe^{2+}$ 존재하에서 DNA breaking effect를 저해하였다. Bacillus subtilis H17(rec+) 및 M45(rec-)를 이용한 spore rec assay엣 3,4-dihydroxytoluene-SPEBRP는 MNNG에 대하여 강한 돌연변이 효과를 나타내었다. Salmonella typhimurium TA98 및 TA 100를 이용한 Ames test에서 pyrogallol-, 3,4-dihyd-roxytoluene-, hydroxyhydroquinone-SPEBRPs 들은 발암물질인 Benzo($\alpha$)Pyrene에 대하여 67.71, 63%의 강한 활성억제를 나타내었다.
전통발효 식품인 간장으로부터 chitinase활성이 높으면서 갈변반응을 일으키는 균주인 CJ-3를 분리하여 갈변반응생성물이 면역기능, 항산화력 및 세포활성에 미치는 영향과 생화학적 특성을 규명하였다. 분리된 CJ-3 균주는 16S rDNA 염기서열분석에 의하여 Bacillus atrophaeus로 동정되었으며 분리된 균주의 분자량은 대략 31.0 kDa으로 colloidal chitin(0.5, 1.0, 2.0%)의 첨가에 의하여 chitinase 활성이 현저히 증가되었다 B. atrophaeus CJ-3에 의해서 유도되는 갈변반응물 200${\mu}\ell$ 첨가로 LPS에 의하여 유도되는 nitric oxide (NO) 활성을 45%까지 감소시켰다. MTT 분석을 통한 세포활성에서도 갈변반응물은 LPS에 의하여 세포활성을 정상수준으로 회복하였다. CJ-3. 균주의 DPPH 전자공여능법에 의한 항산화력은 갈변반응에 의하여 약 55% 증가하였다 . 이러한 결과들은 갈변반응생성물은 면역기능 및 세포활성을 증가시키는 것으로 추정된다. 분리된 균주의 최적 생육조건은 최적온도 37$^{\circ}C$, 최적 pH 7.0 및 염 농도는 9% NaCl농도까지는 잘 생육하는 것으로 나타났으며 분리된 균주의 주요 intracellular 유리아미노산은 glutamate로 나타났다.
건조된 명태들은 전반적으로 다가불포화지방산이 감소하고 단일불포화지방산은 증가하는 경향을 보였다. 특히 주기적인 자연냉동과 해동을 반복하면서 건조된 명태(미숙성황태)를 장기간 숙성하여 완성한 황태의 지방산 조성은 북어나 미숙성황태와 비교해 볼 때, 원료시료(명태)간의 차이를 감안하더라도 특징적인 차이를 보였다. 총 유리아미노산 함량도 황태가 북어나 미숙성황태보다 낮게 나타나 불포화지방산과 유리아미노산의 반응에 의한 점진적인 갈변화 현상을 설명해 주는 것으로 판단된다. 황태의 수용성 갈변물질은 주로 숙성단계에서 많이 형성되는 것으로 추정되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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