This study was conducted to investigate the farm situation about bovine leukemia virus(BLV) infection that greatly influence productivity in dairy cattle and compare the accuracy of diagnosis for BLV infection between PCR and ELISA techniques. Blood samples of 193 heads from 5 herds in Chungnam and Chungbuk area were used to analyze BLV gene and serum, and the results were obtained as follows. The amplified BLV gene in dairy cattle by PCR technique resulted in 226 bp, 596 bp and 434 bp, respectively, for gag, pol and env, which were well amplified. The infection rates of BLV virus diagnosed by PCR and ELISA techniques ranged from 80.55 to 100% and from 22.22 to 86.95%, respectively, and the infection rates among 5 herds were significantly different in both methods (P<0.05). Further, the average infection rates of 5 herds were 87.05 and 63.21%, respectively, for PCR and ELISA techniques. Kappa statistics for examining consistency of diagnosis by PCR and ELISA techniques showed 0.246, which represents low consistency. Consequently, PCR based BLV technique was considered as a corrective measure for diagnosis of BLV infection in Holstein dairy cattle.
한국수의병리학회 2005년도 Proceedings of The 2nd Asian Society of Veterinary Pathology Symposium(Vol.2) and 2005 Annual Meeting of The Korean Society of Veterinary Pathology(Vol.9)
한국수의병리학회 2005년도 Proceedings of The 2nd Asian Society of Veterinary Pathology Symposium(Vol.2) and 2005 Annual Meeting of The Korean Society of Veterinary Pathology(Vol.9)
본 연구는 형질전화우의 생산성 제고를 위한 일환으로서 새로운 기법인 retrovirus vector system의 이용성을 검토하고자 실시하였다. Retrovirus-producing cell은 미세주입법을 이용하여 체외생산된 1.5일(1~4-세포기) 수정란의 위란강에 주입(5~10 cells/embryo) 되었으며, 이때 사용된 retrovirus-producing cell line은 Gibbon ape leukemia virus (GaLV) envelope protein에 encapsidation되어 replication-defective retrovirus를 분비하도록 제작되었다. 주입된 유전자의 표지유전자로서 E. coli LacZ 유전자를 사용하였으며, X-gal 염색법은 발달이 유도된 상실배와 배반포 단계에 실시하여 LacZ 유전자의 발현 유무를 확인하였다. 이 실험의 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. Virus의 infectivity를 높이기 위해 사용된 polybrene의 최저농도는 5$\mu\textrm{g}$/ml이었다. 2. Retrovirus-producing cell이 주입된 1.5일 수정란의 상실배기와 배반포기로의 발달율은 29%였다. 3. 이 때의 LacZ+ 발현율은 21%였다. 4. 본 실험에 사용된 retrovirus-producing cell은 replication-competent retroviruses를 생산해 내지않는다는 것을 확인할 수 있었다.
Kwon, Oh-Sik;Kang, Jung-Soon;Park, Hyun-Jin;Yoo, Min
대한의생명과학회지
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제10권1호
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pp.55-63
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2004
Bovine leukemia virus (BLV) is a causative agent for lymphoma disease in cattle including cows worldwide. BLV shares similar virion structure and characteristics with other retroviruses. The pol gene of the BLV genome produced reverse transcriptase (RT) and integrase (IN) for important roles for BLV genome integration into host cell chromosomes that is known to be coded in the 3' side of the BLV pol gene (one third portion). In this study, we have sequenced 978 bp in the 3' side of the BLV pol gene from BLV 10C3 in order to determine the BLV IN region of it. And we compared it to the nucleotide sequences of an Australian BLV isolate. As a result, nucleotide sequences of the IN region of the Korean-type BLV pol gene were mutated at a rate of 3.7%. We can confirm that the typical mutations are such as Arg (AGG) $\rightarrow$ Lys (AAG), Thr (ACG) $\rightarrow$ Met (ATG), Ile (ATT) $\rightarrow$ Val (GTT), Asn (ACC) $\rightarrow$ His (CAC), Phe (TTT) $\rightarrow$ Leu (TTG) and Asn (ACC) $\rightarrow$ Asp (GAC). From the analysis of the sequencing data, we were able to determine the zinc-finger-like "HHCC" motif in the amino terminus of BLV IN, that was H-$X_3$-H-$X_{25}-C-X_2$-C. It was also found the DD35E motif in the IN catalytic domain as D-$X_{56}$-D-$X_{35}$-E. It fits very well to the consensus sequences of retroviral IN as well as HHCC motif.
To investigate bovine leukosis virus (BLV) infection in the cattle rearing in a dairy farm where a case of bovine lymphosarcoma had been identified several years ago, the 196 Holstein cattle including newborn calves to 12 years of age were tested. The BLV antibody test and peripheral lymphocyte count for bovine leukosis were carried out by the immunodiffusion (ID) test and Bendixen's Kep. These tests were performed 2 to 4 times at the interval of 3 to 5 months. The observed results were as follows: 1. The positive rates of BLV-antibody in the 1st, the 2nd, the 3rd and the 4th tests were 23.3%, 28.1%, 49.0% and 55.7%, respectively. The conversion rates from negative to positive in the 2nd, the 3rd and the 4th tests were 8.9%, 41.4%, and 20.0%, respectively. Results showed that the highest conversion rate was observed at the 3rd test which was conducted after winter. The highest positive rate by ID test were observed in 4 year old cattle in the 1st and 2nd tests, and in 2 year old herd in the 3rd and 4th tests. 2. In hematological test by Bendixen's Key, the positive and suspicious rates in the 1st, the 2nd, the 3rd and the 4th tests were 5.8 and 7.8%, 8.3 and 6.6%, 8.7 and 10.1%, 10.8 and 19.6% respectively. Results showed that the positive and. suspicious rates increased in course of time. 3. 70 to 100% of the positive cattle in hematological test were positive for BLV-antibody test. All of 13 cattle with persistent lymphocytosis (PL) were also positive for BLV-antibody, indicating the high relationship between PL and BLV-antibody. 4. The number of total leukocytes and absolute lymphocytes in the BLV-antibody positive cattle appeared significantly higher than those of the negative cattle. The markedly increased cell counts were observed in the cattle over one year old. 5. The mean of total leukocytes and absolute lymphocytes in the negative cattle for BLV-antibody increased slightly after sero-conversion into positive. 6. In the clinical examinations during experimental periods, none of the 72 positive cattle for BLV-antibody showed any lesions for bovine leukosis.
우백혈청(牛白血病)virus에 대한 혈청항체의 측정(測定)을 위한 간접효소면역법(間接酵素免疫法)(ELISA)의 확립(確立) 및 ELISA법(法)의 감도(感度)를 알기 위하여 한천(寒天) gel 면역확산법(免疫擴散法)(ID)과 비교검토(比較檢討)하였으며 한우(韓牛), 유우(乳牛) 및 육우(肉牛)등 264두(頭)의 혈청(血淸)을 공시(供試)하였다. 혈청(血淸)을 가(加)하지 않은 공(孔)의 흡광치(吸光値)(C)로서 혈청치(血淸値)를 제(除)한 후, 표준(標準)BLV항체흡성혈청치(N)로서 피검혈청치(被檢血淸値)(T)를 나눈치(値)(T-C/N-C)가 1.5이상(以上)인 것을 BLV항체 양성(陽性)으로 하였을 때 gp-ID의 성적(成績)과 98.5%(259/263)가 일치(一致)되었다. gp-ID 향성혈청(陽性血淸) 145예(例)중 144예(例)가 ELISA 양성(陽性)으로 99.6%, gp-ID 음성혈청(陰性血淸) 118예(例)중 115예(例)가 ELISA음성(陰性)으로 97.5%가 일치(一致)되었다. 이상에서와 같이 gp-ID용(用)의 BLV 항원(抗原)을 사용한 ELISA법(法)을 gp-ID와 동등(同等) 또는 더 감도(感度)가 우수한 BLV의 혈청항체측정법 임이 입증되었으며 실용성(實用性)이 충분(充分)하다고 사료(思料)된다.
본 연구는 낙농가의 소득과 직결된 원유 품질과 관계가 깊은 체세포 수(Somatic Cell Count, SCC)과 주요 우유 성분에 대하여 영향을 미치는 여러 요인 즉 아비 종모우, BLV type의 감수성 여부, 산차, 분만 월, 비유기 등에 대한 효과를 구명하였다. 조사기간은 2001년 1월부터 2004년 3월까지 분만한 홀스타인 젖소로부터 30$\pm$5일의 간격으로 시료를 채취하였으며, 우유성분과 체세포 분석은 Somascope MK2와 Lactoscope FTIR을 이용하여 총 3,897 개의 기록을 분석하였다. 비유기는 비유초기(30일 미만), 최고 비유기(30~60), 비유 중기(60~120), 비유 후기(120~180), 비유 말기(180일 이후)로 편의상 구분하였다. 분석 결과 대부분의 요인들이 모든 비유기에 걸쳐 유의적인 것으로 나타났으나 BLV type은 비유기에 따라서 차이를 나타내었다. 특히, BLV 감수성 여부는 조기에 검사를 통하여 보유 인자를 제거시키는 것이 장기적으로는 축군의 유질의 개선에 도움이 될 것으로 기대된다. 단백질에 대하여 BLV type은 각 비유기에 영향을 미치지 않았으며, 산차는 30일 이상에서 영향을 미쳤고, 분만월은 전 유기에 걸쳐 영향을 미치는 것으로 나타났다. 기타 유성분도 비유기에 따라서 각 각 다른 영향을 받는 것으로 나타났다.
Bovine leukemia virus (BLV) is an etiological agent of chronic diseases in cows worldwide. The BLV is one of retroviruses that contain a multi-functional enzyme, reverse transcriptase produced from the pol gene in its genome. We have sequenced some regions in the pol gene of BLV proviruses found in the Southern province of Korea from samples that turned out to be BL V positives by a PCR analysis. On the 5' side of the BLV pol gene (polymerase region), it was found that there were four leucines located at every 7 amino acids. They can form a leucine zipper motif that was not same as the pol gene of Japanese BLV isolate. The sequencing result of the proviral pol gene in Korean-type BLV also revealed some mutations leading to amino acid changes such as $CCT(Pro){\to}CTC(Leu)$, $AAT(Asn){\to}AAA(Lys)$, and non-sensible variations i.e., $TCT(Ser){\to}TCC(Ser)$, $ATT(Ile){\to}ATC(I1e)$ and $ACG(Thr){\to}ACA(Thr)$. On the 3' side of the pol gene (integrase region), some nucleotide sequences were mutated and led to amino acid changes. Among them, a mutation, $GAA(Glu){\to}GAC(Asp)$ occurred in many Korean-type BLV proviruses was very interesting because the amino acid was regarded as one of the most conserved amino acids in the retroviral integrase. It was also notable that the mutation on any leucine residue did not occur, in spite of its frequent appearance.
한건(韓件) 및 유우(乳牛)의 우백혈병(牛白血病) 바이러스의 감염상태(感染狀態)와 목장(牧場)의 오염상황(汚染狀況) 등 역학적(疫學的)인 연구(硏究)를 위하여, 경북지방(慶北地方)의 14개목장(個牧場) 유우(乳牛) 106두(頭)와 대구(大邱) 도축장(屠畜場)에서 한우(韓牛) 699두(頭)의 혈청항체(血淸抗體)를 조사(調査)하였다. 우백혈병(牛白血病) 바이러스의 바이러스의 본(本) 바이러스의 단백항원(蛋白抗原)(P)과 당단백항원(糖蛋白抗原)(gp)를 가지고 한천(寒天) Gel 내침강반응(內沈降反應)(ID)을 실시하였고 그 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 유우(乳牛) 106두(頭)에 있어서 gp-ID 양성(陽性)인 것은 30두(頭)(28.3%)이었고, 14개목장(個牧場)중 12개(個) 목장(牧場)이 본(本) 바이러스에 오염(汚染)되어 있었으며, 목장별(牧場別) 오염률(汚染率)은 12.5에서 60%로 높은 감염률(感染率)을 나타내었다. 2. 한건(韓件) 699두(頭)에서 gp-ID에 양성(陽性)인 것은 17두(頭)(2.4%)로 낮았다. 3. gp-ID 양성혈청(陽性血淸) 47례(例)중 P 항원(抗原)을 가지고 있는 것은 유우(乳牛) 5두(頭)에서만 인정(認定)되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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