• 한국환경성돌연변이발암원학회지
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• 제21권1호
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• pp.1-8
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• 2001

We have synthesized $^{99m}$Tc-mercaptoacetyltriglycine (MAG3)-biocytin as a new imaging agent for hepatobiliary scintigraphy. The aim of this study was to evaluate the usefulness of $^{99m}$Tc-MAG3-biocytin scintigraphy in differentiating carbon tetrachloride ( $CCl_4$)-induced hepatotoxicity from $\alpha$-naphthylisothiocyanate (ANIT)-induced cholestasis in mice, which reflecting the differential diagnosis of neonatal jaundice caused by neonatal hepatitis from congenital biliary atresia in humans. Methods: Balb/c mice (female, 20 g, n=4-6) were pretreated with $CCl_4$(0.5 or $1.0m\ell$/kg) and ANIT ($150 or 300 m\ell$/kg) 18 h before scintigraphy. Biochemical and histopathological examinations showed a pattern of typical acute hepatitis (increase of transaminases and hepatocellular necnsis) in $CCl_4$-treated mice and cholestasis (increase of alkaline phosphatase and ${\gamma}$-glutamyltransferase, and biliary hyperplasia) in ANIT-treated mice, respectively, Mice were fasted at least 4 hr prior to the intravenous injection of $^{99m}$Tc-MAG3-biocytin (18.5 MBq/20$\mu\textrm{g}$) in 2% human serum albumin in saline. Scintigraphy was performed with a ${\gamma}$-camera equipped with a 1-mm diameter pin-hole collimator for 30 min and images were acquired every 15 s. We compared the values of physical parameters, such as peak liver/heart ratio ($${\gamma}$_{max}$) and peak ratio time ($t_{max}$) far $^{99m}$Tc-MAG3-biocytin scintigraphy. Results: Scintigraphic parameters of the $CCl_4$-pretreated (0.5 $m\ell$/kg) group showed a 81.9% decrease of r$_{max}$, and 42.2% decrease of $t_{max}$, whereas the ANIT-pretreated ( $150m\ell$/kg) group showed a 53% decrease of $r_{max}$, and 2.36-fold increase of $t_{max}$, (P<0.05). These results demonstrate that the decrease of $r_{max}$ and the shortening of $t_{max}$ are characteristic features for hepatotoxicity, in contrast to the increase of $t_{max}$ and decrease of $r_{max}$ for biliary hyperplasia. Conclusion: $^{99m}$Tc-MAG3-biocytin hepatobiliary scintigraphy can distinguish hepatitis from cholestasis in mice model and may be similarly useful in humans which differentiating the cause of neonatal jaundice in clinical study.cal study.cal study.cal study.

• 대한핵의학회지
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• 제27권2호
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• pp.285-292
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• 1993

Avidin과 biotin의 높은 결합력을 이용하여 종양 영상을 개선하는 방법이 많이 연구되고 있다. 본 실험에서는 이러한 목적으로 쓰기 위하여 적당한 $^{99m}Tc$ 표지 avidin을 제조하였다. Avidin을 표지하기 위하여 우선 $^{99m}Tc$과 안정한 킬레이트를 형성할 수 있는 benzoylmercaptoacetyltriglycine (Bz-MAG3)과 biocytin을 화학적으로 결합시킨 Bz-MAG3-biocytin을 합성하였다. 이 화합물을 Tc-99m으로 표지시켜 avidin 또는 streptavidin을 1:1로 섞어 줌으로서 Tc-99m으로 표지된 avidin과 streptavidin을 제조하였다. 이들의 생쥐 생체내 분포를 조사한 결과 avidin의 경우 높은 간(56.6%, 10min)과 신장(28.5%, 10min) 축적을 보였고 streptavidin의 경우 높은 신장 축적 (28.9%, 21hr)을 보였다. Avidin의 높은 정상 조직 축적을 줄이기 위하여 succinic acid를 결합시켜 등전점(pI)을 낮춘 다음 같은 실험을 하여 본 결과 신장 축적율은 pI가 $7.0{\sim}9.3,\;5.5{\sim}6.2,\;4.0{\sim}4.8$로 낮아졌을 경우 19.0%, 3.1%, 1.7%로 각각 떨어졌지만 간에의 축적은 pI 변화에 따른 상관성을 찾아 볼 수가 없었다. 체내 제거율을 측정하여 본 결과 pI를 변화시킨 avidin과 변화시키지 않은 avdin들은 반감기가 13.5에서 16.0시간 사이로 큰 차이점을 보이지 않았는데 streptavidin은 반감기 61.5시간 정도로 느리게 제거된다는 것을 알았다. 이 실험의 결과 1. Avidin을 $^{99m}Tc$-MAG3-biocytin으로 안정하게 표지할 수 있었고, 2. pI가 낮아진 avidin은 신장에의 축적율이 크게 감소되었으며, 3. $^{99m}Tc$으로 표지된 avidin과 streptavidin은 먼저 간으로 흡수된 후 대사된 다음 신장으로 배설된다는 사실을 알았다.

• 한국식품과학회지
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• 제30권6호
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• pp.1273-1278
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• 1998

Biotin의 분석에 사용되는 기존의 미생물 분석법보다 신속하고 간편한 효소-단백질결합 분석법(enzyme protein binding assay; EPBA)을 개발하였다. Biotin-KLH conjugate와 streptavidin을 이용한 EPBA에서, biotin의 활성을 갖는 biocytin에 대하여 각각 109% $(IC_{50}=0.3\;ppb)$와 197% $(IC_{50}=0.8\;ppb)$의 교차반응을 보였으나 desthiobiotin과 diaminobiotin 그리고 2-iminobiotin에서는 교차반응을 보이지 않았다. Streptavidin과 biotin-KLH conjugate를 이용한 EPBA에서 검출범위는 각각 $0.01{\sim}30\;ng/mL$과 $0.01{\sim}1.0\;ng/mL(ppb)$로 나타났다. 우유시료와 과일 플레이크 그리고 당근-파인애플 쥬스에 대한 spike test에서 EPBA(biotin-KLH conjugate)와 미생물 분석법(microbiological assay; MBA)간의 상관관계는 r=0.994로 매우 높은 것으로 나타났다. 그러나 MBA는 biocytin과 desthiobiotin에 대하여 각각 80.1%, 66.7%의 교차반응을 나타냈다. 검출범위도 $0.1{\sim}0.5\;ng/mL(ppb)$로 분석 범위가 매우 제한되어 있었다. 그러므로 EPBA에 의하여 biotin을 분석하는 것이 기존의 미생물 분석법에 비하여 검출 감도나 검출 범위, 교차반응 그리고 분석시간 등의 여러 가지 면에서 우수한 것으로 확인되었다.

• 대한핵의학회:학술대회논문집
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• 대한핵의학회 1998년도 제37차 추계학술대회
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• pp.23.2-23.2
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• 1998

• 한국식품영양과학회지
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• 제27권6호
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• pp.1152-1159
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• 1998

In order to develop more rapid and reproducible analysis of biotin known as vitamin H, attempts were made to establish the condition for enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) compared with traditional microbiological assay(MBA). Antibiotin and antiserum were obtained from the immunized rabbits injected with emulsion of biotin KLH conjugate and Freund's adjuvant. The antiserum showed cross reactivity on biocytin, a derivative of biotin, which is converted to biotin in intestine, at the rate of 177%(median inhibitory concentration(IC50)=12.58ppb), but not on other derivatives such as desthiobiotin, diaminobiotin and 2 imino biotin. Specific antibody for biotin was purified from the antiserum through protein A column and desalting column. The conditions of competitive direct ELISA (cdELISA) were established. Detection range of biotin concentration by cdELISA was 0.01∼300ng/ ml(ppb). In the spike test with milk, fruit flake and pine carrot juice, the correlation coefficient between two methods of MBA and ELISA was reliably consistent at the value of r=0.992. But detection of biotin by microbiological assay(MBA) was rather restricted in range and nonspecific. Detection range of biotin by MBA was 0.1∼0.5ng/ml(ppb). It showed cross reactivities on biocytin and desthiobiotin at the rate of 80.1% and 66.7%, respectively. In conclusion, ELISA revealed a significant improvement compared with MBA for the biotin detection in terms of sensitivity, detection range and cross reactivity. In addition, a variety of samples could be analyzed rapidly and conveniently at one time by using ELISA. These results strongly suggest that the ELISA is very promising for the practical application to detect biotin contents in a wide range of food stuffs.

• 한국원자력학회:학술대회논문집
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• 한국원자력학회 2005년도 춘계학술발표회
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• pp.1016-1017
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• 2005