This study was designed to investigate the ultrastructural alterations of the hepatocyte and bile canaliculus of the fasted mice with transmission and scanning electron microscopes. The morphometry was also carried out for the caliber of the bile canaliculus and the number, length and thickness of the microvillus. The hepatocyte observed in the three day fasting group showed ultrastructural images of active function. The dilated bile canaliculi, especially of type II were increased in number as compared with those seen in the normal group. However, the hepatocyte observed in the six day fasting group showed ultrastructural images of inactive function. The bile canaliculi without dilation (type I) were increased in number. The number of microvilli were identical with one another among the different types of bile canaliculi, while their length and thickness were reduced in the dilated bile canaliculi. From the evidence, the luminal size of the bile canaliculi seems to be easily changeable according to the functional state of the hepatocyte. However, the microvilli may not be changed in number but may be changed length and thickness when the bile canaliculi are dilated.
Opisthorchis viverrini infection causes inflammation and liver injury leading to periductal fibrosis. Little is known about the pathological alterations in bile canaliculi in opisthorchiasis. This study aimed to investigate bile canalicular alterations in O. viverrini-infected hamsters and to examine the chemopreventive effects of curcumin on such changes. Hamsters were infected with O. viverrini and one group of animals was fed with 1% dietary curcumin supplement. Animals were examined during the acute infection phase, days 21 and 30 post-infection (PI) and chronic infection phase (day 90 PI). Scanning electron microscopy revealed that in the infected group fed with a normal diet, bile canaliculi became slightly tortuous by 30 day PI and more tortuous at day 90 PI. Transmission electron microscopy showed a reduction in microvilli density of canaliculi starting at day 30 PI, with a marked loss of microvilli at day 90 PI. These ultrastructral changes were slightly seen at day 21 PI, which was similar to that found in infected animals fed with 1% curcumin-supplemented diet. Notably, curcumin treatment prevented the reduction of microvilli density, reduced the dilation of bile canaliculi, and decreased the tortuosity of the bile canaliculi relative to non-infected animals on a normal diet at days 30 and 90 PI. These results suggest that curcumin reduces alteration of bile canaliculi and may be a promising agent to prevent the onset of bile duct abnormalities induced by O. viverrini infection.
Cyclosporin A extracted from fungus Trichoderma polysporum Rifai and Cyclindrocarpon lucidum Booth serves as an important immunosuppressive drug in transplantation surgery. Systemic treatment with cyclosporin A induces an impairment of the biliary excretion of the bile salts and cholestasis. This study was designed to observe the Ultrastural changes of the hepatocytes and the bile canaliculi in cyclosporin A-induced intrahepatic cholestasis in rats. Cyclosporin A was injected into male Wistar rats intraperitoneally 50mg per kg body weight and rats were necropsied at 1, 3, 6, 9, 12, 24 hours. The liver tissues were observed with transmission and scanning electron microscopes and the results were as follows. Transmission electron microscopy: After cyclosporin A injection, SER and lysosomes were increased in the hepatocytes until 9 hours. At 12 hours after injection of cyclosporin A, RER with dilated cistern were increased, and SER, lysosomes in the cytoplasm were decreased. From 1 hour to 24 hours after injection of cyclosporin A, there were dilation of bile canalliculi and decreased or lost microvilli. At 24 hours the dilation of bile canaliculi were decreased. Scanning electron microsocopy: After cyclosporin A injection, the bile canaliculi were dilated and the microvilli were shortened, decreased or lost according to the sites. At 24 hours, the microvilli packing the bile canaliculi were observed. These observations suggest that cyclosporin A-induced cholestasis is associated with the dilation of bile canaliculi, increased microfilaments of the pericanalicular region and decreased or lost microvilli.
간세포의 기능적 연구를 위한 배양계를 확립하기 위하여 Sprague-Dawley계 흰쥐의 간장에서 collagenase와 hyaluronidase의 혼합액을 이용하여 간세포를 분리하고 배양하여, 배양중인 간세포의 구조적인 변화와 담세관의 형성 과정을 확인하고, cytochalasin D를 배양계에 첨가한 경우 발생되는 간세포 및 담세관의 구조적인 변화를 살펴보아 다음과 같은 결과를 얻었다. 분리 배양한 흰쥐의 간세포는 원형이었고, 표면에 미세융모를 가지고 있었으며. 배양중 서로 부착되어 세포띠를 형성하였다. Cytochalasin D처리후 간세포의 표면은 미세융모가 소실되어 편평하게 변화되었으며, 소포성 돌출물이 자주 관찰되었다. 담세관은 부착된 간세포의 사이에서 형성되었으며, 간세포 표면의 작은 융기에서 기시하는 다양한 길이 및 형태의 미세융모로 채워져 있었고, 양단에는 치밀결합 및 부착만 등으로 구성된 연접복합체가 존재하였다. Cytochalasin D 처리후 당세관의 내강은 팽창되었으며 미세융모는 소실되어 거의 존재하지 많았고, 양단에 존재하는 연접복합체는 파괴되어 간격이 벌어진 곳이 많았다. 담세관내에 존재하는 미세융모 속에 존재하는 액틴미세섬유심은 완전하게 형성되어 있는 경우, 불완전하게 적은 양만 존재하는 경우, 그리고 전혀 존재하지 않는 경우가 있었다. 담세관주변세포질에 존재하는 액틴미세섬유얼기의 형성은 불완전하여 부위에 따라 없는 곳도 있었다. Cytochalasin D처리후 담세관주변세포질의 액면미세섬유얼기는 존재하지 많았다. 이상의 결과로 흰쥐의 간장에서 분리한 간세포는 배양중 성장하면서 정상적인 담세관을 형성함을 알 수 있었으며, 담세관의 형성은 접착부위의 연접복합체의 형성 및 미세융모의 형성,담세관 내 액틴미세섬유심 및 담세관주변세포질내 액틴미세섬유얼기의 형성 등을 특정으로 하는 것으로 판단된다.
본 연구에서는 dehydrocholic acid를 투여한 흰쥐 간세포의 vacuolar apparatus를 세포화학적으로 관찰하고자 하였다. 박절편에서 Golgi 장치의 형성면 수조는 소낭상으로 팽대된 부분이 열지어 있었으며 어떤것은 돌출되어 있었다. 이러한 소낭 모양의 돌출부는 용해소체 표면에서도 관찰되었다. 소포들은 Golgi 장치의 형성면 수조와 용해소채 및 담세관 주위에서 볼 수 있었으며 소포가 담세관에 융합되어 있는 것도 관찰되었다. 이러한 소견들은 dehydrocholic acid 투여 후 20분이 경과된 흰쥐에서 현저하였다. 정상군이나 실험군에서 거의 모든 Golgi 장치의 형성면은 담세관을 향하고 있었다. 박절편에서 Golgi 장치의 형성면 수조와 소낭 모양의 돌출부 및 소포는 가시물질을 거의 함유하고 있지 않았다. Osmium은 이들구조에서 심하게 침착되어 있었다. 용해소체와 그 주위에 있는 소포에서는 acid phosphatase 활성이 나타났다. 그러나 담세관 주위에 있는 소포에서는 osmium의 침착이나 acid phosphatase 활성이 경하게 나타나거나 관찰되지 않았다. 이러한 증거들로 미루어 소포는 Golgi 장치의 형성면과 용해소체에서 유래되며 이들소포가 담세관에 융합됨으로서 담즙산이 분비될 것으로 생각된다. 그러나 소포가 담세관에 접근해 감에 따라 소포의 효소활성은 저하되는 것 같이 보인다.
본 연구에서는 급속동결 deep etching법을 이용하여 흰쥐에서 담세관주위세포질에 있는 미세사와 용해소체 및 소포등 세포내소기관들이 어떻게 담즙분비에 관여하는지를 알아 보고자 하였다. Taurocholic acid를 투여한 군은 정상군에 있어서와 같이 미세사가 담세관 주위를 둘러싸면서 담세관 원형질막과 다른 세포내소기관에 부착되어 있었다. 이들 담세관 주위의 미세사들은 미세융모속에서 다발을 이루고 있었으며 담세관 둘레에서는 관주위직을 형성하면서 연접복합체에 결합되어 있었다. 미세사는 또한 담세관 원형질막과 소포사이에 걸쳐있는 것도 관찰되었다. 이상의 소견으로 미루어 미세사는 담세관에서의 담즙의 분비를 돕는 소기관임을 알 수 있는데 특히 담세관에 융합할 수 있도록 소포의 전위를 유도하는 기구로서 작용할 것으로 추정된다.
본 연구에서는 dehydrocholic acid와 biligrafin 투여 20분 후, 기아 8일 후 및 담관결찰 48시간 후의 흰쥐 간을 동결할단하여 담세관 주위 폐쇠띠의 미세구조를 관찰하였다. 정상대조군에서 폐쇠띠는 여러부위에서 $1\sim4$개의 줄로 이루어진 망상구조를 보였다. dehydrocholic acid 투여군에서는 폐쇠띠의 폭이 넓어져서 망상구조의 줄은 $6\sim9$개로 증가된 부위가 많이 나타났다. 그러나 biligrafin 투여군에서는 줄이 감축되어 있었으며 망상구조는 흩으러져 있었다. 기아군에서는 많은 부위에서 폐쇠띠가 $2\sim3$개의 줄로 이루어져 있었으며 이들 줄은 느슨하게 연결되어 있었다. 결찰군에서도 많은 부위에서 폐쇠띠의 망상구조는 흩으러져 있었으며 줄들이 감축되어 있거나 아직 감축되지 않은 상태로 있는 부위도 관찰되었다. 그러나 모든군에서 줄들은 틈을 보이면서 단절되어 나타나거나 선상으로 배열된 입자로 이루어져 있었는데 특히 biligrafin군과 결찰군에서 이러한 소견이 현저하였다. 줄의 끝이 유리되어 있는 것들은 기아군에서 많이 관찰되었는데 dehydrocholic acid군에서는 줄의 끝이 교통반에 접해 있거나 그 주위를 둘러싸고 있는 것들을 많이 볼 수 있었다. 줄들이 불연속적으로 나타나거나 끝이 유리된 것은 정상군에서도 드물지 않게 관찰되었다. 결찰군을 제외한 모든 군에서 담세관 주위 폐쇠띠가 그망안에 입자의 집괴를 함유하고 있었다. 이상의 증거로 미루어 담세관 주위의 폐쇠띠는 담세판의 상태에 따라 쉽게 변하는 것 같이 보이며 같은 담세관에서 일지라도 부위에 따라 구조적 변화에 차이가 있는데 이러한 소견은 정상상태하에서도 비슷하게 나타나고 있어 폐쇠띠가 완전한 장벽으로서의 역할을 하고 있지 않는 경우도 있는 것 같이 보인다. 또한 폐쇠띠는 기계적 자극이나 다른 어떠한 인자에 의해서 쉽게 영향을 받는 것 같이 보이며 폐쇠띠의 변화에 연관하여 줄과 입자의 집괴 사이에도 어떠한 관계가 있을 것으로 추정된다.
본 연구에서는 박절편과 동결할단복제법을 이용하여 흰쥐 간세포에서 dehydrocholic acid가 수송되는 경로를 전자현미경적으로 조사하고자 하였다. 정상군이나 dehydrocholic acid 투여군에서 대부분의 Golgi 장치는 형성면을 담세관으로 향하고 있었다. Dehydrocholic acid 투여 20분 후에 세포질내세망과 Golgi 장치 및 소포 등이 담세관 주위에 증가되어 있었는데 특히 Golgi 장치 형성면에서는 소포가 될 것으로 추정되는 싹이 돌출되어 있었으며 소포들은 담세관에 융합된 것들도 관찰되었다. 이러한 소견으로 미루어 담즙산의 분비는 Golgi 장치 형성면의 쌀이 유리되어 형성된 소포가 담세관막에 융합되므로서 이루어질 것으로 추정된다.
Clinical signs, serum chemical values and histological findings of hepatic tissue after partial and complete obstruction of common bile duct in Korean goats were investigated. Abnormal clinical signs were not observed in partial obstruction of common bile duct, but in complete obstruction clinical signs such as jaundice, urine color change, were observed. Serum total bilirubin, total cholesterol, aspartate aminotransferase, sorbitol dehydrogenase, gamma glutamyltranspeptidase, and total protein values increased on the 1-4th day and then gradually decreased to normal level in partial obstruction. However, they tend to increase persistently by the 24th day in complete obstruction of common bileduct. Histologic features of hepatic tissue in partial obstruction were not changed as compared with normal hepatic tissue. On the other hand, in complete obstruction of common bite duct there were moderate bile duct proliferation in a portal area, rupture of bile canaliculi, phagocytosis of bile pigment by Kupffer cells, periportal fibrosis, intrahepatic bile stasis and hepatic cell necrosis.
본 연구에서는 담즙산과 cholesterol 및 phospholipid가 흰쥐 간세포내 소기관에 미치는 영향을 조사하여 이들 담즙물의 수송기전을 알아 보고져 하였다. 정상군과 각 실험군에서 관찰된 Golgi장치는 거의가 cis side를 담세관으로 향하고 있었다. 각 실험군에서는 ER과 Golgi 장치 및 용해소체 등 소기관의 수적 증가, 소조의 팽대, budding 등이 관찰되었다. Dehydrocholic acid 투여군에서는 cis Golgi cistern의 선상 팽대을 많이 볼 수 있었는데 공포(vacuole)들은 담세관과 Golgi 장치사이에서 관찰되었으며 ER과 담세관 사이에서도 관찰할 수 있었다. Cholesterol 투여군과 Phosphotidylcholine 투여군에는 Golgi 장치의 모든 소조들이 팽대되어 있었으며 ER 유래의 공포와 용헤소체가 증가되어 있었는데 용해소체의 증가는 특히 cholesterol 투여군에서 현져하였다. 이상의 소견으로 미루어 담즙성분의 분비에 관여하는 주된 세포내 소기관은 ER과 Golgi 장치 및 용해소체로 추정된다. 그러나 dehydrocholic acid는 ER과 cis Golgi 소조 유래의 공포에 의해 분비되며 Cholesterol과 phosphatidylcholine은 ER에서 또는 trans Golgi 소조을 거친 후 용해소체를 통해서 배출될 것으로 추정되는데 특히 cholesterol은 용해소체를 통해서 빈번히 배출될 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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