• Journal of Microbiology
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• 제34권4호
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• pp.316-319
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• 1996

Mycelia of Streptomyces viridochromogenes grown under different pH were analysed for the fatty acid composition. The low relative proportion of 12-methyltetradecanoic acid and the high relative proportion of palmitic acid were characteristic for the young culture under slight acidic pH that caused delay of the aerial mycelium formation. The addition of L-arginine to the culture medium enabled an arginine auxotroph with bald phenotype to have the fatty acid composition similar to that of the wild type and to develop aerial mycelium. The ratio of 12-methyltetradecanoic acid to palmitic acid might be used as a parameter to explain the optimum grwoth in the respect of membrane fluidity.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제2권2호
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• pp.102-107
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• 1992

For the purpose of producing L-ornithine by microbial fermentation, mutant strains were developed from glutamate-producing bacteria by mutagenesis using N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG) and UV irradiation. Brevibacterium ketoglutamicum BK1046, a L-citrulline auxotroph which is also resistant to arginine hydroxamate (Arghx), was isolated and selected as the best producer of L-ornithine. This strain was capable of producing L-ornithine at a concentration of 24 g/l after 69 hours of cultivation in the 21 jar fermentor. The optimum supplementary level of L-arginine, a substitute for L-citrulline, was found to be about 0.2 g/l in the shake-flask fermentation.

• 미생물학회지
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• 제25권3호
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• pp.249-253
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• 1987

Effects of Ac pulse at low voltage on Saccharomyces cerevisiae were studied. The treatment of yeast suspensions contained 0.2m NaCl with 500mA for 350 sec at $40^{\circ}C$ was shown about 50% of lethality, whereas in the treatment of the same suspensions with 250mA for 250 sec at the temperature ($10^{\circ}C$) corresponding to about 10% of lethality, growth was completely inhibited instead of lethality. The effect of growth inhibition was due to occurrence of auxotrophic strains under experimental conditions. Detection of auxotrophic yeasts was done tentatively with the difference of the number of viable yeast cells between direct counting by methylene blue staining and plate-count on yeast morphology agar.

• Current Research on Agriculture and Life Sciences
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• 제5권
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• pp.119-126
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• 1987

사과나무 부란병균 병반상에서 검출된 비병원성 Valsa속 균의 비병원균 인자가 부란병균으로 전이되는지의 여부를 밝히기 위해서는 적당한 유전표식(遺傳標識)이 필요하므로 두 균종(菌種)에서 영양요구성 돌연변이주를 작출(作出)하기 위해 수행한 실험결과는 다음과 같이 요약된다. 본 균의 영양요구성 돌연변이주의 검출에 가장 적합한 합성배지로는 E. Parasitica의 연구에 사용되었던 최소배지 및 완전배지가 선발되었고 단집락형성용 배지로는 이 최소배지에 0.5%의 L-sorbose를 첨가한 것이 가장 좋았다. 단집락형성용 배지상에서 포자가 발아하기까지는 약 96시간이 소요되는 것으로 밝혀져 자외선 조사후 완전배지를 중층(重層), putative auxotrophs를 선발하기 위해서는 적어도 96시간 이상 야생형(野生型)을 지속적으로 제거해야 될 것으로 나타났다. 병포자 발아과정의 핵의 행동을 추적해 본 결과, 1차 핵분열이 일어나는데 소요되는 시간은 약 60시간으로 자외선 처리 후 photoreactivation에 의한 reversion을 최소화하기 위해서는 조사(照射) 후(後) 60시간(時間) 이상 암상태(暗狀態)에 보존해야 하는 것으로 나타났다. 적절한 자외선 조사방법(照射方法)을 선정하기 위하여 병포자현탁액에 조사(照射)하는 방법과 단집락형성용 배지에 포자를 도말하고 그 위에 자외선을 조사(照射)하는 방법(方法)을 비교 검정해 보았다. 병포자현탁액에 자외선을 조사(照射)한 방법에서는 130초에서 포자의 발아능력이 완전히 상실되었고 생존율이 0.1%에서 7%의 범위인 80초~120초 사이에서 putative auxotrophs를 선발할 수 있었다. 한편, 단집락형성용 배지상에 도말된 병표자에 자외선을 조사(照射)한 방법에서는 90초의 조사(照射)에서 포자의 발아능력이 완전히 상실되었고 50초 정도의 조사(照射)에서 가장 많은 수의 putative auxotrophs를 선발할 수 있었으며, 조사(照射)시간에 따른 포자생존율에 있어서 균주간에 큰 변이가 없는 후자의 방법이 우수한 것으로 나타났다. 본 실험에서 선발한 161개의 putative auxotrophs 중 10개의 영양요구성이 확인이 되었는데 nucleic acid base 요구성 4균주, amino acid 요구성 4균주 vitamine 요구성 2균주가 얻어졌다. 이들 영양요구성 돌연변이주의 병원성을 조사한 결과, 병원성이 상실된 것이 5균주, 약병원성 3균주, 여전히 강한 병원성을 유지하고 있는 것이 2균주로 나타났는데 약병원성 또는 강병원성을 나타낸 5균주중 nicotine 요구성인 AM513만 병반상에서 포자가 내장된 병자각을 형성하였고 여타의 균주는 포자형성능(胞子形成能)이 상실되었다.

• 미생물학회지
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• 제24권3호
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• pp.243-250
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• 1986

Candida pseudotropicalis CBS 607에서의 야생형과 영양요구성 돌연변이 균주에 대한 원형질체 형성 및 재생과 상보적 영양요구성 균주간의 융합에 관해서 연구하였다. 야생형과 his tidine 혹은 adenine요구성 균주에서 원형질체 형성율은 96-100%이였으나 methionine과 tryptophan요구성 균주는 각각 52%와 72%였다. Myoinositol (0.5 mg/ml)을 첨가한 배지에서 전배양한 methionine과 tryptophan조 구성 균주는 원형질체 형성시 bovine serum albumin (BSA, 4 mg/ml)을 첨가하면 96-98%의 원형질체 형성율이 얻어졌다. 원형질체 재생 빈도는 18-20% 였으나. BSA와 myoinositol을 첨가하면 adenine요구성 균주(약 20%)을 제외한 나머지 영양요구성 균주에서는 재생율이 20% 이상 증가했다. 원형질체 융합에 대한 PEG와 $CaCl_2$,최적농도는 20%와 100mM이었고 최적 pH와 반 응시간은 각각 6.0과 30분이 있다. 상보적 영양요구성 균수의 융합빈도는 $1.5{\times}10^{-3}\;to\;8.8{\times}10^{-3}$ 였으며 원행점체의 재생 증진으로 인해 융합율이 현저히 증가했다. Histidine요구성 균주와 tryptophan 요구성 균주을 융합시켰을 때 몇개의 융합세포를 얻었는데 측정된 DNA양과 액상의 차이로 보아 aneuploid나 diploid상태임을 알 수 있었다.

• 한국균학회지
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• 제15권2호
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• pp.80-86
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• 1987

자연계에서 섬유소분해능이 우수한 균을 분리하였고 섬유소분해능을 더욱 증진시키기 위한 기초단계로서 그 분리균주의 원형질체 생성과 융합의 최적조건을 조사하였다. 토양에서 채취한 시료로부터 섬유소분해능력이 우수한 Aspergillus sp., Penicillium sp., Trichoderma sp., 3균주를 분리 동정하였고 산업적으로 유용한 균주이며 cellulase activity가 있는 Aspergillus niger를 비교균주로 선택하여 각각의 효소활성도를 비교 조사한 결과, Aspergillus sp.가 가장 좋은 효소활성도를 보였으며 그 다음 Penicillium sp., Trichoderma sp., 그리고 Aspergillus niger 순이었다. 효소활성도가 가장 좋은 Aspergillus sp.에 자외선$(12erg/sec/mm^2)$을 4 분 30초 동안 조사하여 영양요구성 변이주를 유도, 분리하였다. 세포벽분해효소로는 pH6.0에서 ${\beta}-glucuronidase$가 효과적이었고 그 효소를 농도별로 처리해본 결과 5, 000unit/ml가 최적농도이었다. 재생률은 삼투안정제로 0.6M KCI을 사응하여 pH6.0에서보았을 때 야생형은 7.0%, met. 영양요구주는 7.5%, arg. 영양요구주는 5.2%이있다. 영양요구성변이주간의 원형질체융합에 필요한 PEG는 분자량이 6,000인 것이 좋았으며 최적농도는 $30^{\circ}C$ 이었다. 이때 융합율은 1.2%까지 획득하었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제26권1호
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• pp.68-75
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• 1998

A. niger의 GOD(Glucose Oxidase) 대량생산과 효율적인 분비를 protein의 대량생산에 많이 사용되는 strain인 S. cerevisiae에서 시도하였다. S. cerevisiae의 ADH1과 GAL 10 promotor, 그리고 ${alpha}$-MF signal sequence와 A. oryzae의 ${alpha}$-amylase signal sequence 및 S. cerevisiae의 GAL7과 A. niger의 GOD terminator를 이용하여 4개의 expression vector를 합성한 후 S. cerevisiae 2805에 auxotroph 방법으로 형질변환시켰다. 변이체들을 배양하여 세포내와 세포외의 GOD활성도를 분석한 결과 GAL 10 promotor가 삽입된 pGAL변이체들이 ADH1 promotor가 삽입된 pADH 변이체들 보다 GOD 생산성이 높았다. GAL 10 promotor와 A. oryzae의 ${alpha}$-amylase signal sequence가 삽입된 pGALGO2에서 115시간 배양시 GOD의 생산이 가장 높았다($GOD_{total}$: 10.3 unit/mL, $GOD_{ex}$: 8.7 unit/mL). 이 수치는 같은 promotor인 GAL 10 promotor와 ${alpha}$-MF signal sequence가 삽입된 pGALGO1보다 3배정도 높다. 이 결과는 ADH 1 promotor를 사용하였을 경우에도 일치하였다. 또한 A. oryzae의 ${alpha}$-amylase signal sequence가 S. cerevisiae의 ${alpha}$-MF signal sequence보다 GOD를 더 효과적으로 분비시켰다. 상기 결과로 미루어 보면 signal sequence가 단백질의 분비 외에도 단백질 합성에도 많은 영향을 주는 것으로 추측된다. pGALGO1과 pGALGO2의 GOD분비효율은 각각 89%, 84%이었다. S. cerevisiae에서는 일반적으로 과당화가 일어나기 때문에 S. cerevisiae에서 합성된 재조합 GOD의 분자량은 250 kDa으로 A. niger의 GOD(170 kDa)보다 더 컸다.

• 한국균학회지
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• 제25권2호통권81호
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• pp.85-90
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• 1997

표고버섯(Lentinula edodes)의 동위효소 양상을 표고 연구의 기초 연구의 일환으로 실시하였다. 균사체의 Tris-HCl 완충액에 용해되는 세포내 효소를 nondenaturing polyacrylamide gel 전기영동 법으로 분리후, peroxidase, esterase, superoxide dismutase, acid phosphatase, alkaline phosphatase, alcohol dehydrogenase, ${\alpha}-amylase$ 효소 활성을 측정하였다. 표고는 peroxidase, esterase, superoxide dismutase, acid phosphatase 활성이 검출되었으며, 본 연구에서 사용한 방법으로 alkaline phosphatase, alcohol dehydrogenase, ${\alpha}-amylase$ 효소 활성은 검출되지 않았다. 표고버섯의 peroxidase, esterase band는 배양 기간에 따라 큰 차이가 없이 안정하였으며, 동위효소는 표고의 유전적 연구 및 원형질체 융합 후 융합체의 특성 연구에 중요하다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제48권4호
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• pp.183-186
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• 2005

Arabidopsis AHL gene encodes a 3'(2')-phosphoadenosine 5'-phosphate (PAP)-specific phosphatase that plays a role in the sulfate activation pathway. We complemented E. coli cysQ mutant defective in cysteine biosynthesis with the AHL gene. AHL cDNA was cloned into the prokaryotic expression vector pKK388-1 and transformed into the bacterial mutant. Since cysQ mutant is a leaky cysteine auxotroph only under aerobic conditions, the bacteria were grown in liquid media with vigorous shaking to provide more aeration. In cysteine-free medium, cysQ mutant and the mutant harboring empty vector did not grow well, whereas cells harboring AHL cDNA exhibited significantly improved growth with doubling time of approximately 3 h. cysQ is known to encode a 3'(2'),5'-diphosphonucleoside 3'(2')-phosphohydrolase (DPNPase). However, our data suggest that cysQ protein has PAP-specific phosphatase activity in addition to DPNPase activity. Microbial complementation procedure described in this paper is useful for structure-activity studies of PAP-specific phosphatases identified from microbes and plants.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제5권4호
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• pp.159-165
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• 1977

Salmonella typhimurium LT-2의 histididine auxotroph 중 base substitute mutant인 TA 1535와 TA100, 그리고 frame-shiftmutant인 TA 1538과 TA 98을 각각 사용하였고 microsomal enayme activation system을 병용하여 국내 사용농약 20종에 대한 돌연변이 유발성을 검하였다. 이중 다음 4종의 농약이 양성 및 의양성의 유발성을 나타냈다. (1) Captan은 강력한 돌연변이 유발성질로서 TA1535, TA100 및 TA98에 대해 직접적으로 10$\mu\textrm{g}$/plate의 농도에서 plate당 각각 205, 1012, 그리고 297의 돌연변이 균종의 출현을 나타냈으며 microsomal enzyme activation에 의해 그 유발능력이 약간 감소되는 경향을 보였다. (2) Micut는 TA100에 대해 직접적으로 10mg/plate의 농도에서 55 revertant 정도의 미비한 돌연변이 유발성을 나타냈다. (3) Dimethoate는 TA100에서 역시 직접성으로 처리가능 최고농도인 0.2λ/plate에서 55 revertant/plate 정도의 징약한 돌연변이 유발성을 바타냈다. (4) Triforing도 역시 TA 100에서 직접적으로 10mg/plate로 처리된 농도에서 78 revertant/plate정도의 약한 돌연변이 유발성을 나타했다.