• 한국균학회지
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• 제14권4호
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• pp.273-280
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• 1986

Rhizorus oryzae의 생장 및 autolysis에 따른 여러가지 autolytic enzymes의 활성도 변화와 이 autolytic enzyme system을 이용한 원형질체 생성에 관하여 조사하였다. Autolytic·phase의 culture filtrate 내에 함유된 autolytic enzyme은 Rh. oryzae 균사체로부터의 원형질체 생성에 효율적인 세포벽 분해효소로 작용하였으며 Autolytic enzyme중 원형질체 생성은 proteolytic 및 chitosanase activity와 가장 긴밀하게 관련되어 있었다. 이와같은 autolytic enzyme을 이용한 원형질체 생성은 10시간 배양한 균사체에 0.5M mannitol을 사용하였을 때 최고의 수율을 보였으며 원형질 생성의 최적온도 및 pH는 각각 $25{\sim}30^{\circ}C$ 및 $6.0{\sim}6.5$로 나타났다 한편 18시간 배양된 균사체를 osmotic stabilizer와 aut-olytic enzyme을 1 : 1이 되도록 처리하고 5시간 동안 $30^{\circ}C$에서 incubation하여 얻은 원형질체를 주사전자현미경으로 조사한 결과 효소에 의하여 가수분해되는 세포벽 주변으로부터 원형질체가 형성되는 것을 확인하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권1호
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• pp.69-73
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• 1989

자가분해 효소는 Cl. butyricum의 포자형성 배지에서 배양할 때 체외로 배출되어 배양액에도 존재하였다. 배양액으로부터 약 50배로 부분정제된 자가분해 효소를 사용하여 효소의 성질을 조사하였다. 자가분해 효소의 최적 pH와 온도는 각각 5.0과 37$^{\circ}C$였으며 중성 pH에서는 안정하나, 열에는 비교적 불안정하여 5$0^{\circ}C$에서 5분간 열처리한 후 효소활성의 70%가 소실되었다. 또한 Cu ion$^{++}$에 의해서 효소활성이 저하되었으나 그 밖의 금속이온에 의하여서는 큰 영향을 받지 않았다. 또한 자가분해 효소는 기질로서 영양세포에는 직접 활성을 나타내지 못하나, 세포벽 fraction에는 활성을 가지고 있었다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제30권5호
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• pp.782-786
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• 2001

본 연구는 수산가공용 풍미소재 검색 및 인스탄트식품용 조미소재의 개발, 연안에서 생산되는 저활용 수산자원의 유효이용이라는 관점에서 소형 창오징어를 원료로 열수추출엑스분, 자가소화엑스분 및 2단 효소분해엑스분의 조제하여 이들의 정미특성과 기능성을 분석.비교하였다. 소형 창오징어 열수추출 및 자가소화엑스분, 2단 효소분해엑스분의 유리아미노산 총량은 각각 2,792.5 mg%, 8,393.8 mg% 및 9,186.1 mg%이었고, 2단 효소분해엑스분에는 Asn, Gln, val, Ile 및 Lys이 다량 함유되어 있었다. ATP관련물질 중 AMP 함량은 34.6~51.6 mg% 함유되어 있었고, 추출에 따른 함량 차이는 크지 않았다. 무기이온 성분으로서 Na, Cl 및 PO$_4$의 함량이 많았고, 열수추출에 비해 효소분해엑스분 쪽의 함량이 훨씬 많았다. ACE 저해능의 경우, 열수추출엑스분이 10.1%, 자가소화엑스분은 80.2%, 1차효소분해엑스분은 87.5%, 2차 효소분해엑스분은 92.1%로, 효소분해엑스분들이 월등히 높은 ACE 저해능을 나타내었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권1호
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• pp.63-68
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• 1989

낙산균 Cl. butyricum ID의 자가분해 최적 조건과 특징을 조사하였다. 영양세포의 자가분해 최적 pH는 0.05M 완충용액에서 7.0 이었으며, 최적 온도는 37$^{\circ}C$였다. 자가분해 속도는 대수기의 영양세포가 가장 높았으며, 대수기 이후의 영양세포에서는 급격히 감소하였다. 대수기의 영양세포는 0.3M 이상의 NaCl, sucrose, glucose를 포함하는 배양액에서는 자가분해가 일어나 정상적인 증식을 할 수 없었다. 자가분해 효소는 균체내에서 세포벽에 결합된 상태로 존재하였고 배양중 대수 증식기에 체외로 배출되어 배양액에도 존재하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제11권6호
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• pp.957-963
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• 2001

Bacillus subtilis YL-1004 was isolated from soil for the development of agents to control dental caries. This strain produced an extracellular lytic enzyme that hydrolyzed the Streptococcus mutans cell wall. The lytic enzyme was purified to homogeneity by affinity chromatography and gel permeation chromatography to give a single band on SDS-PAGE and non-denaturing polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weight of the enzyme was deduced from SDS-PAGE and gel chromatography to be 38 kDa and the PI to be 4.3 from isoelectric focusing. Sirty $\%$ of its lytic activity remained after incubation at $50^{\circ}C$ for 30 min, and its optimal temperature was $37^{\circ}C$ . The enzyme showed its highest activity at pH 8.0 and was stable at pHs ranging from 4.0 to 9.0. Treatment with several modifiers showed that a cysteine residue was involved in the active site of the enzyme. This lytic enzyme from Bacillus subtilis YL-1004 exhibited specificity towards Streptococci and also showed autolytic activity on Bacillus subtilis YL-1004.

• 한국식품과학회지
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• 제30권6호
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• pp.1345-1349
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• 1998

새로운 수산가공용 풍미소재의 개발과 품질개선, 연안에서 생산되는 저활용 수산자원의 유효 이용이라는 관점에서, 소형 갈전갱이를 원료로 가공한 2단계 효소분해엑스분의 정미성분 및 기능성을 분석 평가하였다. 소형 갈전갱이의 열수추출 및 자가소화엑스분, 1, 2차 효소분해엑스분의 유리아미노산 총량은 각각 541.3, 8,245.3, 1,354.6 mg% 및 6,636.6 mg%이었고, hydroxyproline, glu, pro, leu, phe, lys 및 arg 등이 주요 아미노산이었다. IMP는 $292.2{\sim}335.2\;mg%$ 검출되어 각 엑스분간에 큰 차이는 없었으며, TMAO 함량은 $145.2{\sim}219.7\;mg%$로 비교적 많이 함유되어 있었다. 또한, total creatinine은 $290.7{\sim}342.6\;mg%$로 추출방법에 따른 함량 차이는 크지 않았고, betaine 함량은 $43.8{\sim}55.2\;mg%$로 역시 엑스분 추출에 따른 함량 차이는 거의 없었다. 소형 갈전갱이 엑스분에는 양이온으로서 Na, K 및 P가 양적으로 많았으며, 음이온으로는 Cl과 $PO_4$의 함량이 많았고, 추출방법에 따라 무기성분의 함량 차이가 심했다. 시료 엑스분의 펩티드함량은 열수추출, 자가소화, 효소소화엑스분 순으로 함량이 많았으며, ACE 저해효과는 2차 효소분해엑스분이 89.9%로서 열수추출이나 자가소화엑스분에 비해 상당히 높아 ACE 저해능이 우수한 것으로 나타났다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제6권1호
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• pp.1-6
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• 1996

A bacterial strain NS70 producing an alkaline protease was isolated from soil samples taken near a hot spring and identified as Bacillus licheniformis by its morphological and physiological properties and cellular fatty acid analysis. The isolated alkaline protease was purified by ammonium sulfate fractionation, DEAE-, CM-, and Phenyl-Sepharose column chromatography. The molecular weight of the purified enzyme was estimated to be 32, 000 Da by sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis. Its optimal pH and temperature for proteolytic activity against Hammarsten casein were 12 and $65^{\circ}C$, respectively. The enzyme was stable at alkaline pH range from 6.0 to 12.0, and fairly stable up to $65^{\circ}C$. The enzyme was inhibited by phenylmethylsulfonyl fluoride but not by EDTA and N-ethylmaleimide indicating that the enzyme is serine protease. Enzyme activity was markedly inhibited by $Hg^{2+}$ and $Cu^{2+}$. Autolytic phenomena were observed on purified protease NS70 but autolysis was reduced by the addtion of $Ca^{2+}$ ion or bovine serum albumin.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제10권6호
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• pp.600-604
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• 1989

In order to find the rational methods for improving the thermal stability of subtilisin Carlsberg, the mechanisms of irreversible thermoinactivation of the enzyme were studied at $90^{\circ}C.$ At pH 4, the main process was hydrolysis of peptide bond. This process followed first order kinetics, yielding a rate constant of $1.26\;{\times}\;10^{-1}h^{-1}$. Hydrolysis of peptide bond of PMS-subtilisin occurred at various sites, which produced new distinct fragments of molecular weights of 27.2 KD, 25.9 KD, 25.0 KD, 22.3 KD, 19.0 KD, 17.6 KD, 16.5 KD, 15.7 KD, 15.0 KD, 13.7 KD, and 12.7 KD. Most of the new fragments originated from the acidic hydrolysis at the C-side of aspartic acid residues. However 25.0 KD, 15.7 KD, and 13.7 KD which could not be removed in purification steps stemmed from the autolytic cleavage of subtilisin. The minor process at pH 4 was deamidation at asparagine and/or glutamine residues and some extend of aggregation was also observed. However, the aggregation was main process at pH 7 with a first order kinetic constant of $16 h^{-1}.$ At pH 9, the main process seemed to be combination of deamidation and cleavage of peptide bond.

• 한국식품과학회지
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• 제24권6호
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• pp.519-523
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• 1992

공업용 protease를 이용하여 홍합을 원료로, 그 extract의 최적 제조조건과 효소의 가수분해 반응에 의한 홍합 단백질 분해물 특징을 조사하였다. 실험에 사용된 6종의 protease 중, Corolase PP가 가수분해도 78.7%로 최대 가수분해도를 나타내었다. 원료의 전처리 공정으로 사용되는 precooking이 홍합이 가지고 있는 자기소화효소를 불활성화시켜 전체 가수분해도를 저하시켰으며, 그 결과 precooking을 하지 않은 경우보다 가수분해도가 $5{\sim}8%$ 정도 낮았다. 효소반응에 따르는 홍합 단백질의 분해 pattern을 전기영동과 HPLC 분석에 의해 살펴본 결과, 반응이 경과함에 따라 분자량 100,000 dalton 이상의 고분자 홍합 단백질이 분해되어 분자량 66,000 dalton 이하의 새로운 분해산물이 나타났다. 분자량 30,000 dalton 이하의 단백질 분해 pattern에 있어서는 분자량이 서로 다른 8개의 주요 fraction이 나타났으며 분자량이 8,000 dalton인 fraction 6가 45.8%로 가장 높은 비율을 나타내었다. 한편, 반응시간이 경과함에 따라 홍합의 주요 아미노산인 glycine, alanine, glutamic acid, lysine은 점차 감소한 반면, 소수성 아미노산인 valine, methionine, isoleucine, leucine의 비율이 증가함을 알 수 있었다.

• 한국식품과학회지
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• 제30권6호
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• pp.1339-1344
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• 1998

소형 갈전갱이를 원료로 천연 조미소재를 가공하기 위한 최적 가공조건, 정미성 및 품질에 대하여 실험하였다. 열수추출법, 자가소화법 및 2단계 효소분해법으로 엑스분을 조제하고, 각 엑스분의 특성을 서로 비교 검토한 결과, 시료 엑스분의 관능적 특성은 열수추출 엑스분에서는 대체로 감칠맛과 단맛이 났으나 맛의 강도가 약하였고, 자가소화엑스분의 경우는 감칠맛 이외에 쓴맛과 부패취가 현저하였다. 2단계 효소분해 엑스분은 감칠맛과 단맛이 월등히 강하였고, 특히 엑스분의 투명도와 점도저하 등 엑스분의 품질이 현저히 개선되었다. 2단계 효소분해엑스분의 최적 가공공정은 다음과 같다. 시료를 chopper로써 세절한 다음 약 3배량의 물을 가하고, $98^{\circ}C$에서 5분간 자숙하여 자가소화효소를 불활성화시킨 후, 시료액의 pH를 8.0으로 조정하고 여기에 내알칼리성 단백분해효소(Yakurt Pharma., Aroase AP-10)를 0.3% 가하여 교반하면서 $50^{\circ}C$에서 3시간 동안 가수분해시켰다. 이어 자숙처리하여 효소를 불활성화시킨 후 다시 pH를 6.0으로 조정하고, 여기에 중성 단백분해효소(Yakurt Pharma., Pandidase NP-2)를 0.3% 가한 다음 $45^{\circ}C$에서 교반하면서 2시간 동안 가수분해시키고, 효소를 불활성화시킨 후 원심분리하여 상등액을 취함으로서 효소분해엑스분을 얻을 수 있었고, 농축 등의 일부 처리를 거친다면 수산가공용 풍미소재로서 충분히 이용가능하다는 결론을 얻었다.