Bifidobacteria are a prototype probiotic, which normally inhabit the intestinal tract of humans. In the present study, four species of Bifidobacterium isolated from the feces of infants were characterized. The tolerance for acid or bile salt, autoaggregation, and antibiotic resistance of the bacteria were examined. The four species were resistant to low pH, bile salts, and up to 3% bile acid. Autoaggregation rates were as high as 90%. The bacteria were consistently resistant to gentamicin, kanamycin, streptomycin, ciprofloxacin, and nalidixic acid. Due to their tolerance to environmental factors like acid and bile salts, B. longum MG723, B. breve MG729, B. bifidum MG731, and B. animalis subsp. lactis MG741 are potentially valuable as probiotics and may be useful for industrial application.
프로바이오틱스에 대한 연구는 주로 생균의 효과가 많이 알려져 있지만 가열 처리된 유산균인 사균체의 기능에 대한 연구도 활발히 이루어지고 있다. 본 연구에서는 락토바실러스 아시도필러스 CBT LA1의 사균체의 장관장벽 기능에 대하여 in vitro, in vivo에서 실험하였다. 이를 위하여, 세포표면 소수성 상호작용력(cell surface hydrophobicity), 자가응집력(autoaggregation), 세포에 부착하는 능력(cell adhesion)과 자가응집력(autoaggregation), LPS와의 결합력을 조사하였다. 또한 HT-29 장상피세포에서 LPS로 유도되는 IL-8의 발현을 억제하는 효과를 조사하였다. CBT LA1을 80도에서 121도까지 10분 동안 열을 처리하였을 때, 80도에서 열을 처리한 CBT LA1 사균체가 가장 높은 세포에 부착하는 능력을 보여 주었다. CBT LA1 생균과 비교했을 때, 80도에서 열을 처리한 CBT LA1 사균체는 높은 LPS와의 결합력, 소수성 상호작용력, 자가응집력, HT-29 세포에 부착하는 능력과 IL-8의 발현을 억제하는 능력을 보여주었다. In vivo 실험에서 FITC로 label된 LPS를 투여하였을 때 16시간 후, CBT LA1 사균체를 섭취한 동물의 장관 내 LPS가 가장 많이 제거되었다. 이러한 연구 결과들은 CBT LA1 생균처럼 CBT LA1 사균체도 장관장벽 기능을 가지며 이는, 파마바이오틱스로서 그 가능성을 시사한다.
This study was performed to screen probiotic bifidobacteria for their ability to bind and neutralize lipopolysaccharides (LPS) from Escherichia coli and to verify the relationship between LPS-binding ability, cell surface hydrophobicity (CSH), and inhibition of LPS-induced interleukin-8 (IL-8) secretion by HT-29 cells of the various bifidobacterial strains. Ninety bifidobacteria isolates from human feces were assessed for their ability to bind fluorescein isothiocyanate (FITC)-labeled LPS from E. coli. Isolates showing 30-60% binding were designated LPS-high binding (LPS-H) and those with less than 15% binding were designated LPS-low binding (LPS-L). The CSH, autoaggregation (AA), and inhibition of LPS-induced IL-8 release from HT-29 cells of the LPS-H and LPS-L groups were evaluated. Five bifidobacteria strains showed high levels of LPS binding, CSH, AA, and inhibition of IL-8 release. However, statistically significant correlations between LPS binding, CSH, AA, and reduction of IL-8 release were not found. Although we could isolate bifidobacteria with high LPS-binding ability, CSH, AA, and inhibition of IL-8 release, each characteristic should be considered as strain dependent. Bifidobacteria with high LPS binding and inhibition of IL-8 release may be good agents for preventing inflammation by neutralizing Gram-negative endotoxins and improving intestinal health.
The purpose of this study was to investigate the probiotic properties of lactic acid bacterial strains isolated from human feces. The properties were tested on the basis of guideline for probiotic selection protocol such as tolerance for acid or bile salt, autoaggregation, antibiotic resistance, and antimicrobial activity. Total 25 lactic acid bacteria were isolated from human feces, and their antibacterial activity was tested against Staphylococcus aureus, Escherichia coli, E. coli O157:H7, Vibrio parahaemolyticus, V. alginolyticus using an agar diffusion assay. Among them, 4 selected strains were identified by analysis of their 16S rRNA, as Lactobacillus rhamnosus MG316, L. acidophilus MG501, L. reuteri MG505, and L. gasseri MG570. Results show that resistance to low pH and bile salts. Also, the selected strains were resistant to bile acid up to 3% and their autoaggregation rates were as high as 60%. All strains tested were resistance to nalidixic acid and kanamycin.
가자미식해에서 분리된 유산균 40종은 Lactobacillus plantarum spp., Leuconostoc mesenteroides spp., Lactobacillus brevis spp., and Weisella paramenteroides spp.로 확인됐으며, 40종 중 10종을 선별해 검사에 사용했다. 본 연구에서는 가자미식해에서 분리된 유산균을 프로바이오틱스로 활용하기 위해 산 및 인공위액 저항성, 담즙산 저항성, 자가 응집성, 공동 응집성, 세포 표면 소수성 등의 프로바이오틱 연구를 수행하였다. 분리한 유산균주는 산성 및 인공 위액에 대해 저항성을 보여 높은 생존율을 나타내었으며, L. plantarum GS11이 가장 뛰어난 저항성을 보였다. 또한 담즙산 저항성 측정 결과 모든 유산균주가 108~109 log CFU/ml의 생균수로, 100% 이상의 생존력을 보여주었다. 그리고 세포 표면 부착능을 간접적으로 측정하기 위해 응집력 평가를 한 결과, autoaggregation 능력을 46% 이상 나타내었다. 세포 표면 소수성 평가를 위해 Xylene 부착능을 측정한 결과 분리된 유산균주에서 32.2%의 소수성을 가지는 B. subtilis 보다 더 뛰어난 세포 부착률을 보여주었다. 이와같이 유산균은 프로바이오틱스로 활용될 만한 유의미한 결과를 보였으며, L. plantarum GS12와 L. plantarum GS13을 제외한 유산균에서 항균 활성이 나타났다. 따라서 가자미 식해에서 분리된 유산균은 다양한 프로바이오틱스 특성을 가진 프로바이오틱스로 활용할 수 있을 것으로 판단되어진다.
Previous studies have suggested a possible correlation between cell surface hydrophobicity (CSH) and stress tolerance in Bifidobacterium. In this study, the relationship was examined between CSH and environmental stress tolerance in Lactobacillus spp. By measuring the adhesion to hexadecane, 2 Lactobacillus fermentum strains- KLB 261 and KLB 231 were found to have high and low CSH, respectively. To measure their tolerance to various stresses, cells were subjected to salt (2 M NaCl), acid (pH 2), $H_2O_2$ (0.01 %, v/v), ethanol (20%, v/v), heat ($60^{\circ}C$), and cold ($-20^{\circ}C$). Compared with KLB 231, the hydrophobic KLB 261 was found to be much more resistant to the various stresses examined. After being subjected to different stresses for a period of time, KLB 261 and KLB 231 showed 50 and 0% survivability in 2 M NaCl, 108.2 and 0.6% in 0.01 %(v/v) $H_2O_2$, 40.2%(v/v), and 3.7% at $60^{\circ}C$ incubation, 4 and 0.6% at $-20^{\circ}C$, 12.9 and 0.1 % in pH 2, 33.8 and 0.2% in 20%(v/v) ethanol, respectively. Autoaggregation test and morphological observation were also conducted in an attempt to explain these differences. These results suggested that high CSH could strengthen the stress tolerance of lactobacilli.
Piliated Lactobacillus rhamnosus (pLR) strains possess higher adherent capacity than non-piliated strains. The objective of this study was to isolate and characterize probiotic pLR strains in human fecal samples. To this end, mouse polyclonal antiserum (anti-SpaA) against the recombinant pilus protein (SpaA) of L. rhamnosus strain GG (LGG) was prepared and tested for its reactivity and specificity. With the anti-SpaA, a method combining the de Man, Rogosa, and Sharpe (MRS) agar plating separation and colony immunoblotting (CIB) was developed to isolate pLR from 124 human fecal samples. The genetic and phenotypic characteristics of the resultant pLR isolates were compared by randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) fingerprinting, and examination of adhesion to Caco-2 cells, hydrophobicity, autoaggregation, and in vitro gastrointestinal tolerance. Anti-SpaA specifically reacted with three pLR strains of 25 test strains, as assessed by western blotting, immunofluorescence flow cytometry, and immunoelectron microscopy (IEM) assays. The optimized MRS agar separation plus anti-SpaA-based CIB procedure could quantitatively detect $2.5{\times}10^3CFU/ml$ of pLR colonies spiked in $10^6CFU/ml$ of background bacteria. Eight pLR strains were identified in 124 human fecal samples, and were confirmed by 16S RNA gene sequencing and IEM identification. RAPD fingerprinting of the pLR strains revealed seven different patterns, of which only two isolates from infants showed the same RAPD profiles with LGG. Strain PLR06 was obtained with high adhesion and autoaggregation activities, hydrophobicity, and gastrointestinal tolerance. Anti-SpaA-based CIB is a rapid and inexpensive method for the preliminary screening of novel adherent L. rhamnosus strains for commercial purposes.
Alias, M. Anwar;Muda, Khalida;Affam, Augustine Chioma;Aris, Azmi;Hashim, Normala
Environmental Engineering Research
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제22권1호
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pp.61-74
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2017
This study investigated the effect of various cations ($Ca^{2+}$, $Mg^{2+}$, $Al^{3+}$, $Mn^{2+}$, $Zn^{2+}$) on the autoaggregation (AAg) and surface hydrophobicity (SHb) of three different bacteria (Brevibacillus panacihumi strain (ZB1), Lysinibacillus fusiformis strain (ZB2) and Enterococcus faecalis strain (ZL)) using a 2-level factorial design. The AAg ratio was measured from the changes in the absorbance of the media. Results show that ZB2 had maximum AAg for the three bacteria investigated. A microscopic clustering of cells was observed when $Ca^{2+}$ was added to ZB2. The AAg was in the range of 62%, 58% and 34% for ZB2, ZB1 and ZL, respectively and correlated to the SHb. The aggregation and SHb of the microbial cells increased with increasing ionic strength due to the repulsive steric or overlap forces between the polymer covered surfaces. $Ca^{2+}$ demonstrated a more significant effect on aggregation and SHb of microbial cells due to an attractive binding force.
The aim of this study was to investigate probiotic characteristics and fermentation profile of selected lactic acid bacteria (LAB) isolated from traditional fermented foods. Antibacterial activity against various pathogens, acid and bile salt tolerance, cell hydrophobicity, and antibiotic resistance were examined. 16S rRNA sequencing was carried out to identify eight presumptive LAB isolates. In general, all identified LAB (Enterococcus faecium MG89-2, Lactobacillus plantarum MG207, L. paracasei MG310, L. casei MG311, Streptococcus thermophilus MG510, L. bulgaricus MG515, L. helveticus MG585, and L. fermentum MG590) showed strong antimicrobial activity. Also, the selected strains were resistant to bile acid up to 3% and their autoaggregation rates were as high as 60%. All selected strains tested were sensitive to chloramphenicol, tetracycline, and ampicillin, whereas resistant to nalidixic acid and kanamycin.
Vaginitis, also known as vaginal infection and vulvovaginitis, is an inflammation of the vagina and possibly vulva. The three main kinds of vaginitis are bacterial vaginosis, vaginal candidiasis, and trichomoniasis. The purpose of this study was to characterize Lactobacillus plantarum MG989 and L. fermentum MG901 isolated from the vaginas of healthy Korean women in terms of their inhibitory activity against the vaginitis associated pathogens such as Gardnerella vaginalis and Candida albicans. Co-culture experiments showed that the two Lactobacillus strains MG989 and MG901 significantly reduced the viability of G. vaginalis and C. albicans. Also, the two strains were resistant to bile acid up to 1% and their autoaggregation rates were as high as 83.33%. Further studies are underway to demonstrate that the two strains can be applied as pharmaceutical agents for recovering healthy vaginal ecosystem.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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