느타리버섯을 사용하여, 빛이 버섯의 체내 대사에 영향을 미치는지, 영향을 미친다면 어떤 영역의 빛이 작용하는 지를 연구하였다. 이들 결과를 비교 검토하기 위해 재배 지역이 다른 느타리버섯 중의 mitochondria를 설탕 밀도 단계 기울기 원심분리법에 의하여 설탕 농도 44%층에서 분리 정제하여 실험한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 파장 변화에 따른 mitochondrial ATP synthase의 활성도는 490nm에서 가장 크게 활성화되었다. 2. 최적 파장 490nm에서 빛 조사 시간 변화에 따른 ATP synthase의 활성도는 15초 동안 조사하였을 때 가장 활성화 되었다. 3. 최적 조건에서 ATP synthase는 phenazine methosulfate(PMS)에 의해 224% 활성화 되었으며, 2,6-dichlorophenol indophenol(DCPIP)에 의하여 168% 활성화 되었다. 한편, oligomycin에 의해서는 90% 효소 활성이 억제 되었으며, 2,4-dinitrophenol(DNP)에 의해서 75%, 2-heptyl-4-hydroxyquinoline-N-oxide(HQNO)에 의해 15% 효소활성이 억제되었다. 4. 최적 조건에서 ATP synthase는 $Mn^{2+}$에 의해 73%의 효소 활성 억제를 보였고, $Ca^{2+}$에 의해 35%, $Co^{2+}$에 의해 14%의 효소 활성 억제를 보였다. 5. 최적조건에서 ATP synthase는 $CN^{-}$과 $SO_{4}\;^{2-}$에 의하여 각각 80%, 46% 효소활성이 억제되었고, $NO_{3}\;^{-}$과 $CO_{3}\;^{2-}$에 의해서는 28%의 효소 활성 억제를 보였다. 이상과 같은 결과를 통해 버섯의 종류에 관계없이 청색광 영역의 빛에 의해 활성화 된다는 것과 그 광수용체도 유사한 형태일 것이라 예측할 수 있다.
한국 근해에서 양식되고 있는 김류의 함질소엑스성분조성 및 월별변동현상을 구명하기 위하여 1998년 1월부터 4월까지 전남 장흥군에서 양식된 방사무늬김 Porphyra yezoensis을 매월 1회씩 채취하여 건제품으로 가공한 다음 맛과 밀접한 관계가 있는 함질 소엑스성분 즉, 엑스분질소, 유리아미노산, 결합아미노산, ATP관련화합물, 4급암모늄염기 등을 분석하였다. 엑스분질소함량은 $976\~1,196\;mg/100\;g$ (건물)이었다. 유리 아미노산은 $28\~31$종이 검출되었으며, 그 총량은 $5,648\~6,845mg/100g$ (건물)이었다. 함량이 많은 유리아미노산으로서는 alanine, glutamic acid, taurine, phosphoserine. aspartic acid 등이었다. 결합아미노산은 가수분해후 $18\~22$종에서 증가되었으며, 그 총량은 $1,194\~1,406mg/100g$ (건물)이었으며, 유리아미노산총량의 $19.6\sim22.9\%$ 수준으로서 중요한 함질소 엑스성분이었다 ATP관련화합물총량은 $111.6\~195.5mg/100g\;(3.30\~6.00{\mu}mol/g$, 건물)수준이었다. Betaine류는 마른 김에서 homarine이 모든 시료에서 검출되었고, trigonelline은 1월 시료에서만 확인되었다. Glycinebetaine, $\beta$-alaninebetaine 및 $\gamma$-butyrobetaine은 가공과정 중 소실되었다. TMA는 모든 시료에서 검출되었고, TMA는 일부시료에서만 확인되었다. 방사무늬김은 생야을 건제품으로 가공함으로서 유리아미노산은 증가하고 결합 아미노산 함량은 감소되었다. 또한 ATP관련화합물은 증가한 반면 TMAO와 TMA, betaine류는 전반적으로 감소되었다.
한국 민속주의 품질평가를 위해 민속주 31종을 대상으로 에탄을 함량, pH, 산도, 총당 및 환원당의 함량과 같은 특성을 조사하였다. 또한 민속주의 ATP함량은 lumitester로 측정하여 생균수와 비전하였다. 민속주의 물리.화학적 특성은 아래와 같이 확인되었다.; pH는 3.59~4.79 였고 총 산도는 4.23~16.21이였으며 총당과 환원당의 함량은 각각 0.04 ~1.13, 0.006 ~ 0.999 g/100 mL로 나타났고 ATP함량은 $10^1$~$10^{6}$ RLU범위에서 관찰되었다.
This study was carried out to diagnostic test for bovine mastitis by the determination of adenosine triphosphate (ATP) based on firefly bioluminescence. The results obtained are follow; 1. The infection rate of bovine mastitis investigated with 521 cows in 47 dairy farms were found to be 3.6% of clinical form and 44.1% of subclinical form according to the degree of infection. 2. The light yield produced in firefly bioluminescence system was proportional to the concentration of ATP giving stright line within the range of 100PM~1uM. 3. When the number of somatic cell in milk was determined by the ATP assay and compared with three conventional methods such Fossomatic, California mastatic test (CMT), and rolling ball viscometer (RBV), it was shown that r=0.92 for Fossomatic, 0.63 for CMT and 0.7 for RBV. 4. The microorganisms causing mastitis were isolated Staphylococcus sp. (53.3%), Streptococcus sp. (17.9%), Micrococcus sp. (13.5%), Gram negative bacilli (6.3%), Gram positive bacilli (5.5%) and Yeast-like fungi (5.4%). 5. The endogeneous ATP levels of bacteria in a raw milk determined by the firefly bioluminescence system and compared with the results of the conventional methods. The correlation was 0.88 for raw milk.
To elucidate the effects of purinergic nerve on relaxation of pig coronary artery, the effects of ATP, 2-methylthio ATP and electrical perivascular nerve stimulation were investigated from physiograph on the isolated coronary artery of pig. The results btained were as follows; 1. The relaxative responses induced by perivascular nerve stimulation(20V, 0.5msec, 10sec) were the frequency(1~8Hz) dependent manner with phentolamine($10^{-5}M$) and atropine($10^{-6}M$) on isolated coronary artery of pig. 2. The relaxative responses induced. by adenosine($10^{-7}{\sim}5{\times}10^{-3}M$) or ATP($10^{-7}{\sim}5{\times}10^{-5}M$) on precontraction with histamine($10^{-5}M$) were the dose-dependent manner, but the contractile responses were often induced by ATP($10^{-4}M$ and $10^{-3}M$). 3. The relaxative responses induced by 2-methylthio ATP($2.5{\times}10^{-8}{\sim}2.5{\times}10^{-6}M$) on precontraction with histamine($10^{-5}M$) were the dose-dependent manner. 4. The relaxative response induced by 2-methylthio ATP($10^{-7}M$) on precontraction with histamine($10^{-5}M$) was completely blocked by the pretreatment with $P_{2Y}$-purinoceptor blocker, reactive blue 2($10^{-4}M$). 5. The neurogenic relaxative response induced by perivascular nerve stimulation(20V, 8Hz, 0.5msec, 10sec) was weakly inhibited by the pretreatment with ${\beta}$-adrenoceptor blocker, propranolol($10^{-5}M$) and blocked by the addition with $P_{2Y}$-purinoceptor blocker, reactive blue 2($10^{-4}M$). The results suggest that the purinergic nerve is innervated, and its relaxative response was mediated by $P_{2Y}$-purinoceptor on isolated coronary artery in pig.
무세포 단백질 합성 시스템은 세포를 파쇄한 후 파쇄액 내의 단백질 합성기구들을 이용하여 단백질을 발현하는 시스템으로 기존의 세포 기반 재조합 단백질 발현 기법들과 달리 세포의 생장조건에 영향을 받지 않으면서 발현 조절에 관한 다양한 인자들을 인위적으로 조절 할 수 있는 장점이 있다. 그러나, 단백질 합성 과정 중 소모되는 ATP의 연속적 재생을 위해 사용되는 에너지원의 높은 비용과 낮은 안정성은 재조합 단백질 대량생산에의 적용을 제약하는 요인으로 작용하여 왔다. 이러한 문제를 해결하기 위한 대안들 중의 하나로 포도당을 에너지원으로 사용하여 세포 파쇄액내 대사과정을 통해 ATP를 재생하는 방법이 있다. 본 연구에서는 포도당을 에너지원으로 이용한 무세포 합성 시스템에서의 단백질 합성 효율 향상을 위하여 대장균 파쇄액으로부터 회수된 지질을 추가적으로 첨가함으로써 산화적 인산화 과정에서의 ATP재생을 증진시키고자 하였다. 그 결과, 지질이 추가된 무세포 단백질 합성 시스템은 지질이 추가되지 않은 대조군에 비하여 6배 이상 향상된 단백질 생산성을 나타내었다.
Molecular markers developed from the flanking sequences of two cytoplasmic male sterility (CMS)-associated genes, orf456 and ${\Psi}atp6-2$, have been used for marker-assisted selection of CMS in pepper. However, in practice, the presence of orf456 and ${\Psi}atp6-2$ at substoichiometric levels even in maintainer lines hampers reliable selection of plants containing the CMS gene. In this study, we developed a novel CMS-specific molecular marker, accD-U, for reliable determination of CMS lines in pepper, and used the newly and previously developed markers to determine the cytoplasm types of pepper breeding lines and germplasms. This marker was developed from a deletion in a chloroplast-derived sequence in the mitochondrial genome of a CMS pepper line. CMS pepper lines could be unambiguously determined by presence or absence of the accD-U marker band. Application of orf456, ${\Psi}atp6-2$and accD-U to various pepper breeding lines and germplasms revealed that accD-U is the most reliable CMS selection marker. A wide distribution of orf456, but not ${\Psi}atp6-2$, in germplasms suggests that the pepper cytoplasm containing both orf456 and ${\Psi}atp6-2$ has been selected as CMS cytoplasm from cytoplasm containing only orf456. Furthermore, factors other than orf456 may be required for the regulation of male sterility in pepper.
We previously used Southern blot analysis to detect restriction-length polymorphisms between male fertile and cytoplasmic male sterile (CMS) cytoplasms at the coxII and atp6 loci of the mtDNA of Capsicum annuum L. Two copies of atp6 were found in each male fertile and CMS pepper lines. Interestingly, one of the copies of atp6 in CMS pepper was a 3'-truncated pseudogene. The open reading frame of the coxII gene was the same in the fertile (N-) and CMS (S-) lines. However, the nucleotide sequence in the S-cytoplasm diverged from that in the N-cytoplasm 41 bp downstream of the stop codon. To develop CMS-specific sequence-characterized amplified region (SCAR) markers, inverse PCR was performed to characterize the nucleotide sequences of the 5' and 3' flanking regions of mitochondrial atp6 and coxII from the cytoplasms of male fertile (N-) and CMS (S-) pepper plants. Based on these data, two CMS-specific SCAR markers, 607 and 708 bp long, were developed to distinguish N-cytoplasm from S-cytoplasm by PCR. The CMS-specific PCR bands were verified for 20 cultivars containing either N- or S-cytoplasm. PCR amplification of CMS-specific mitochondrial nucleotide sequences will allow quick and reliable identification of the cytoplasmic types of individual plants at the seedling stage, and assessment of the purity of $F_1$ seed lots. The strategy used in this report for identifying CMS-specific markers could be adopted for many other crops where CMS is used for F1 seed production.
정어리 액젓을 재래식 방법으로 18개월 동안 숙성시키면서 2$\~$3개월 간격으로 성분변화에 대하여 조사하였다. 정어리 육의 가수분해도는 숙성 5개월까지는 $44\%$로 큰 폭으로 증가하였으나, 그 이후에는 분해속도가 둔화되어 숙성 18개월 후에는 약 $64\%$의 질소화합물이 육으로부터 액으로 이행되었다. 액젓 중의 총 질소 및 아미노태 질소함량, 그리고 ATP 관련물질 총량은 숙성기간에 비례하여 증가하였으며, 숙성 6개월 이후 ATP 관련물질은 거의 대부분 ($75\~87\%$)이 Hx와 요산이었다. HXR+HX 함량과 요산량이 교차하는 숙성 13.9개월 부근은 $61\%$의 높은 분해율을 보여 경제적인 출하시점으로 판단된다. 18개월간 숙성시킨 정어리 액젓의 유리아미노산 총량은 6,870.7mg/100mL로 원료 육 총 아미노산 함량 (23,249mg1100g)의 약 $30\%$ 정도였으며, 주요 아미노산은 glutamic acid ($18.2\%$), aspartic acid ($10.4\%$), lysine ($8.7\%$), alanine ($8.5\%$), threonine ($6.1\%$) 등의 순이었다.
E. coli K-12 pgln 6가 지니는 glutamine synthetase와 반응계에 ATP 공급을 위하여 빵효모를 동시에 이용하여 glutamate로부터 glutamine의 생산이 수행되었다. Glutamine synthetase의 효소원으로서 E. coli K-12 pgln 6 생균체를 사용하였을 때, 18시간 배양 후에 11.8g/ι의 glutamine이 생산되었다(기질인 glutamate 기준으로 60%의 수율). 부분정제된 glutamine synthetase를 이용하여, 5시간 후에 19.8g/ι의 glutamine이 생산되었다. 이 양은 glutamate 기준으로 90% 수율에 해당되는 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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