• 대한수의학회지
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• 제36권1호
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• pp.109-118
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• 1996

The Salmonella rfb gene encoding for the biosynthesis of the oligosaccharide-repeating units of the O-antigenic determinants was cloned and sequenced. A set of nucleotide primers(a forward and reverse) was selected to target a defined region of the guanosine diphospho-mannose(GDP-Man) pyrophosphorylase synthase gene : rfbM of Salmonella C serogroup. The primer set was used to develop a PCR-based rapid and specific detection system for Salmonella C1 serogroup. Amplification bands of predicted size(1,422bp) were generated from 11 different Salmonella C1 isolates. The bands were verified to be specific for the C1 serogroup by Southern blot analysis using reference homologous DNA specificity was further confirmed by the lack of reactivity with heterologous DNA derived from non-salmonella members of the family enterobacteriaeceae. A specificity of 100% was deduced along with a very high sensitivity shown by a detection limit of 1fg of a purified DNA template. The isolated DNA sequence was found to be 99.8% homologous to S montevideo but the related primers amplified with the predicted band sizes with all the Salmonella C1 serogroups tested. It is concluded that the PCR protocol based on the rfbM gene from S cholerasuis is optimal fast and specific for the detection of Salmonella C1 serogroup and also the corresponding probe is suitable for rapid detection of all Salmonella C1 serogroup DNA tested. This technology should facilitate the identification of contaminated pig products and for any other products contaminated with the Salmonalla C1 serogroup. The immediate impact of this developed method will be in the area of food safety of pig products with the potential prospect for adaptation to other food inspection technologies.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제34권1호
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• pp.35-48
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• 1996

국내 우점종인 노랑털깔따구(Chironomus flaviplumus) 성충의 조항원을 제조하여 IgE 항체에 관여하는 주 항원 단백질을 찾아내고자 본 연구를 수행하였다 노랑털깔따구 성충의 조항원을 마우스에 $1{\;}\mu\textrm{g}$과 $10{\;}\mu\textrm{g}$으로 각각 3회씩 면역시킨 결과 ELISA와 PCA 반응시험에서 모두 $1{\;}\mu\textrm{g}$ 면 역군 중 9주째 얻은 혈청에서 가장 높은 깔따구-특이-IgE 항체를 얻을 수 있었다. 노랑털깔따구 성충의 조항원을 SDS-PAGE로 전기영동하여 16-18개의 단백질 구획을 얻었고 이를 chemiluminescent substrate를 이용하여 면역이적법을 시행한 결과 65 kDa에서 강한 단백질 구획이 52 35 및 25 kDa에서 약한 단백질 구획이 관찰되었다. 깔따구 조항원을 전기영동한 겔을 30개 절편으로 절단하여 추출한 각각의 단백질 분획을 P-K 피부반응검사한 결과, 65, 52 및 35 kDa 부위에서 강한 양성반응을 보여 항원성이 확인되었고, 25 kDa 부위에서는 약한 반응을 보였다. 면역이적법에서 관찰하지 못한 15 kDa 부위의 단백질에서도 높은 P-Ktiter값을 보여 15 kDa 단백질도 항원성이 있음을 알 수 있었다. 이상의 결과에서 국내 우점종인 노랑털깔따구 성충이 알레르기 질환의 원인 항원으로 작용하며 주항원 단백질은 15, 35, 52 및 65 kDa의 4개이고 이중 65 kDa 단백질이 가장 강한 allergen으로 관찰되었다.

• 대한의생명과학회지
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• 제1권1호
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• pp.55-72
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• 1995

임상 검체에서 분리 동정한 E.faecalis 균주에 대하여 gentamicin및 타 항균제에 대한 감수성을 조사했고, R-플라스미드 DNA패턴 및 제한효소에 의한 DNA단편분석,filter-mating에 의한 gentamicin 플라스미드 DNA 전이, R-플라스미드 DNA 제거, tetracycline 내성 유전자확인, 항원분석을 실시하였다. 분리된 40주 E. faecalis 모두가 gentamicin에는 내성이었고, 25주는 요 검체에서 분리되었으며, 이 40균주들 중 95%가 입원환자에서 분리되어 중요한 원내감염균임을 알 수 있었다. Gentamicin 고도내성 E. faecalis는 24주(60%)이었고, 최소억제농도의 범위는 ampicillin이 1~64$\mu$g/ml, Chroramphenicol 이 8~128$\mu$g/ml 과 erythromycin 128 $\mu$g/ml, vancomycinol 1~2 $\mu$g이었다. 분리한 Gentamicin 고도내성 E. faecalis HL-1은 4가지 항균제에 모두 내성이었고, 7종류의 플라스미드가 있었다. HL-2와 HL-3은 모두 6종류, HL-4는 7종류, HL-5는 4종류 그리고 HL-6은 5종류의 플라스미드가 있었다. E. faecalis HL-1 과 HL-6의 내성전달 빈도는 6.3$\times10^{-4}$ 과 3.7$\times10^{-5}$이 었으며, E faecalis HL-1의 내성전달 빈도가 높았다 접합에 의해 E.faecalir HL-1과 HL-6의 플라스미드 중 51.7 Kb크기의 전이된 DNA가 확인되어 gentamicin 내성이 플라스미드 전이에 의한 것임을 알 수 있었다. Tetracycline 유전자는 E.faecalis transconjugants R-1의 2.15 Kb 플라스미드에 있었다. 공여균주 및 transconjugants균주의 항원성을 Immunoblotting으로 분석한 결과 E. faecalis HL-1과 E. faecalis transconjugants R-1균주는 97.8, 46.8 Kd의 분자량을 갖는 단백질과 공통적으로 반응하였고, E. faecalis HL-6와 E. faecalis transconjugants R-6균주는 46.8 Kd의 분자량을 갖는 단백질과 공통적으로 반응하였다. 그 반응의 강도는 85.8, 97.8, 46.8, 33.7, 63.5 와 74.8 Kd 순이었다. 공여균주 E. faecalis HL-6에서는 반응하지 않았던 97.8, 95.8, 74.8와 63.5 Kd의 단백질이 E. faecalis transconjugants R-6균 주에서 반응하였다. 이들 종 특이성 단백질을 Invitro에서는 배양되지 않는 E. faecalis에 대한 혈청학적 진단의 항원으로 이용한다면 유용할 것이다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제30권2호
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• pp.91-100
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• 1992

폐홉충의 생리식염수 추출액 내에 있는 여러 가지 성분 단백질의 생화학적 성상, 면역학적 특징 그리고 충체 내에서의 생성위치 등의 단세포군 항체나 전기영동을 이용한 연구에서 일부 밝혀졌다. 이 실험은 폐흡충 성충의 생리식염수 추출액 내에 있는 각 성분단백질이 폐흡충의 어느 부위에서 유래한 것인지를 알기 위하여 실시하였다. 먼저 생리식염수 추출액을 8% disc-PAGE로 전기영동하여 성분단백질을 분리하고 각 단백질 대(대)를 포함하는 젤을 잘라 내었다. 이어 전기영동으로 젤에서 성분단백질을 용출(용출)하였다. 각각의 단백질을 토끼에 면역시켜 성분 단백질별 항폐흡충 면역혈청을 만들고 이 항혈청으로 폐흡충 및 감염 고양이 폐의 절편에 면역효소 염색법을 시행하였다. 그 결과 성충추출액으로 면역한 항폐흡충 면역혈청은 폐흡충 성충의 충란, 장관상피세포, 장관 내용물에 강한 반응을 보였고 실질조직에도 염색이 되었다. 그러나 표피, 표피하세포, 고환, 흡판등은 반응이 없었다. 1번 Band 단백질의 항혈청은 충란내 세포에 염색이 되었고 충체에서 배출되어 폐실질 조직에 들어있는 충란에 더욱 강하게 반응하였다. 2번 Band 단백질의 항혈청은 폐홉충의 실질조직에 반응하였다. 3번 Band 단백질의 항혈청은 2번 Band 단백질과 교차반응을 일으켜 염색 반응을 관찰하지 않았다. 4번 Band 단백질의 항혈청은 폐흡충의 장관 내용물과 강한 반응을 보였고 5번 Band 단백질의 항혈청은 장관상피세포에 반응하였다. 6/7번 Band 단백질과 8번 나and 단백질의 항혈청은 각각 실질조직에 반응하였다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제28권3호
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• pp.135-142
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• 1990

조직기생충증인 스파르가눔증은 우리 나라를 비롯하여 동양 여러 나라에서 드물지 않게 발생하고 있으므로 보조진단법으로서 쳔청학적 진단이 필요하다. 그러나, 현재 진단에 사용하는 항원인 스파르가눔의 생리식염수 추출액은 그 단백질 구성이 복잡하고, 낭미충중, 포충증, 폐흡충증 등과 혈청학적 교차반응을 일으키는 경우가 있어 개선의 여지가 많다. 이 실험은 스파르가눔 생리 식염수 추출액의 구성단백질 중 항원성이 높고, 교차반응이 적은 구성단백질 분회만을 단세포군항체를 이용하여 친화성 크로마토그래피로 분리하고 그 항원성을 평가하고자 하였다. 먼저 Sephacryl S-300 Superane을 통과시켜 스파르가눔 생리 식염수 추출액을 5 분획으로 나눈 결과, 분자량이 90kDa 이상으로 구성된 제1, 2 분획은 항원성은 높았으나 교차반응을 많이 일으키고 있었다. 제 3분획 의 주요 구성성분은 스파르가눔증 환자 혈청과의 SDS-PAGE/EITB를 통해 가장 민감한 반응을 보였던 36, 29 kDa 단백질이었다. 이어 스파르가눔 추출액으로 면역시킨 BALB/C mice 비장세포에서 기린한 단세포군항체 중 36,29 kDa에 반응하는 단세포군항체를 리간드로 친화성 크로마토그래피를 실시하여 36, 29 kDa 단백질을 순수하게 분리하였다. 이 두 단백질은 같은 항원결정 기를 지니고 있는 것으로 판단하였다. 순수분리한 항원의 항원성을 스 파르가눔 감염자 28명과 기타 질환자 및 건강 대조군 99명의 혈청으로 평가한 결과, 이 항원은 조항원(스파르가눔 추출액)에 비해 민감도는 같았으나(96.4%) 특이도는 86.8%에서 96.9%로 개선되었다.

• 대한바이러스학회지
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• 제28권2호
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• pp.175-182
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• 1998

We investigated the rate of hepatitis G virus infection among 50 patients who were not infected with the hepatitis C virus but showed symptoms of hepatitis. Viral RNA was extracted from the patients' sera and cDNA was synthesized and amplified by RT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction) using random hexamer and 5 primers (470-20-1-77F, 470-20-1-211R, 470-20-1-211R-biotin, GV57-4512MF, GV57-4657MR). The amplified PCR products were confirmed by electrochemiluminescence (ECL), liquid hybridization (LH) and Southern blotting (SB). Among the 50 PCR products, by means of ECL, we found 4 samples to be positive and 5 samples to be indeterminate. The GV45-89M probe (5'-CYCGCTGRTITGGGGTGTACfGGAAGGC-3') was end-labelled with gamma-$^{32}P$ ATP and used for liquid hybridization with the PCR products. By using liquid hybridization, we detected specific bands from 4 positive sera and also from one indeterminate serum as determined by ECL. An 1.5% agarose gel electrophoresis of the 9 PCR products which were HGV positive or indeterminate as determined by ECL showed a 160bp band from 4 positive and one indeterminate serum. The 5 PCR products proved to be positive when SB was applied with the GV45-89M probe as well as when LH was applied. LH and SB were shown to have higher sensitivity and specificity than ECL. Two cases among 5 positive cases had relatively high SGOT, SGPT, ALP values when compared with other 48 cases. In summary, we confirmed hepatitis G virus infection in 5 cases among 50 Korean patients showing symptoms of viral hepatitis.

• 대한바이러스학회지
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• 제27권2호
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• pp.161-168
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• 1997

The present study was designed to estimate the seroprevalence of NLVs among diarrheagenic children and in healthy adults in Seoul and its vicinity with the use of an EIA and an Western blot (WB) based on recombinant Norwalk virus capsid protein (rNV) and crude virus preparations as antigen. Seroconversion was observed in 34 (83%) of 41 tested using the EIA and in 21 (54%) of 39 using the WB, suggesting that the NLVs with epitopes common to rNV are prevalent in Seoul area. Diarrheal children who were known to have been infected with several other strains of the NLVs showed no significant antibody response to the rNV. Infection with rNV occurred earlier in life: primary infections with rNV were common before the age of 6 months and over 91 % of children had evidence of infection by that age by the EIA. Since the amount of the NLV antigens available for seroepidemiologic surveys is limited, we tried to detect NLV antibody by using crude virus preparations as antigen. One crude virus preparation of a child whose stool yielded genetically distinct NLV revealed the presence of the plural number of bands upon SDS-PAGE, but precipitated only one band (62 kDa) after the WB with a serum (collected 10 days after the onset of symptoms) of another diarrheal child. The WB assay we present in this report revealed that the NLVs are prevalent among Korean population and that the sera contained antibody to a single major structural protein, with molecular sizes of 58 to 62 kDa, compatible with the sizes reported for the Norwalk virus and Snow Mountain agent proteins, respectively. When the results of the WB were compared with those obtained by the EIA, the EIA antibody assay was sensitive enough to detect an antibody rise of as much as 4096-fold but not as specific as the WB. The WB assay presented in this paper will provide a powerful tool to elucidate not only antigenic structures of the NL Vs but also seroepidemiology of the NLV infection. The availability of an unlimited source of antigen will enable a large scale serologic studies that will greatly increase our understanding of the role of NLVs in human enteric illness.

• 농촌의학ㆍ지역보건
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• 제13권1호
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• pp.41-59
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• 1988

우리나라에서 문제가 되고 있는 몇몇 기생충질환을 대상으로 각종의 혈청학적 진단법을 적용시켜 진단적 가치 및 의의에 대하여 검토하였다. 연구대상 기생충은 간흡충, 낭미충, Capillaria hepatica이었으며, 주로 간접 형광항체반응, ELISA, western blot등의 기법을 적용시켜 보았다. 결과를 요약하면 다음과 같다. 1) 간흡충증에 있어서 ELISA는 83.3%의 민감도를 나타낸 반면 폐흡층 및 조충과의 교차반응이 인정되었다. ELISA는 간접혈구응집반응, 간접형광항체 반응에 비해 우수한 성적을 보이고 있었다. 앞서 기술한 교차반응을 구별하고 항원-항체반응의 특이항원대를 알아보기 위해 실시한 western blot의 결과 59Kd band와 21K의 band는 간흡충감염자 혈청이외에는 반응하지 않아 종특이성이 있는 것으로 판단되었다. Praziquantel로 치료한 다음 18개월 후에 혈청 및 뇨를 이용하여 ELISA로 검사한 결과 OD치는 치료전의 약 1/2수준으로 감소하였고, 음전률은 60%에 이르렀다. 간접혈구응집반응을 이용할 경우 치료 18개월 후 80%가 음전되었다. 2) 낭미충증 진단에 있어서 간접형광항체반응은 95.8%(23/24) 민감도를 나타내었으며 내막에서 가장 강한 반응을 나타내었다. ELISA 역시 90.0%(36/40)의 높은 민감도를 나타내었으나 두 방법 모두에서 다른 기생충감염자 혈청과의 교차반응이 인정되었다. Western blot 에서 볼때 91, 63, 21Kd의 band가 종특이한 것으로 나타났으며, 이중 63Kd의 항원대가 일관성 있게 낭미충 감염 혈청과 반응하였다. 3) Capillaria hepatica 충란을 이용한 난주위침강반응 및 간접형광항체법에서 85.0%의 민감도를 나타내었으며, 초록색의 특이한 형광이 점막전주위 및 충란절단면의 내막에서 관찰되었다. 수용성충란항원을 이용한 ELISA에 있어서도 85.0%의 민감도를 나타내었다. 항체가 감염후 3~5주부터 급격히 상승하기 시작하여 9주부터 점차 감소되어 감염후 13주에는 음성으로 전환되었다.

• 대한수의학회지
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• 제11권1호
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• pp.1-39
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• 1971

The purpose of present study was to investigate the possibility to immunize guineapigs and swine against Metastrongylus apri infection by the administration of irradiated infective larvae. Four main experiments were undertaken. Firstly, three groups of infective larvae irradiated at $3{\times}10^4r$, $4{\times}10^4r$, and $5{\times}10^4r$ respectively were inoculated to guineapigs and their immunogenic effects were examined from the clinical, anatomical, and serological viewpoints to decide the optimal dose of X-ray for the atenuation of them. Secondly, the migratory behavior of the larvae irradiated at the optimal dose was compared with that of normal infective larvae. Thirdly, pigs were inoculated with each 5,000 infective larvae irradiated at the optimal dose and the clinical, anatomical and serological responses of them before and after challenge were examined. Fourthly, the heated extract of adult M. apri which had been used as an antigen in the serological examinations was analyzed and compared with that of adult Ascaris suis and of adult Trichuris suis by immunoelectrophoretic method. The results obtained are summerized as follows: 1) The optimal dose of X-ray for the atenuation of the infective larvae which can minimize the pathogenecity but keep the antigenecity of the infective larvae was $5{\times}10^4r$. 2) Guineapigs could become completely resistant to subsequent challenge infection by the administration of 1,000 infective larvae irradiated at $5{\times}10^4r$, without showing any symptom of disease before and after the challenge. 3) There were some indication that guineapigs could acquire complete immunity after they overcome the infection with normal infective larvae. 4) It was shown that, in guineapigs, the $5{\times}10^4r$-irradiated larvae can migrate to the large intestine and mesenteric lymph node within a day, where they stay for as long as 16 days to stimulate the host's immunity. 5) It also was shown that, in guineapigs, the normal infective larvae challenged to resistant guineapigs can migrate to the large intestine and mesenteric lymph node, where they are affected by the immune mechanism of host within 10 days without further migration. 6) Pigs could become partially resistant to subsequant challenge by the administration of 5,000 infective larve irradiated at $5{\times}10^4r$; no clinical symptom occurred after the administration, but milder symptoms of parasitic bronchitis were observable after the challenge infection and fewer number of worms were detected from the lungs at autopsy compared with severe symptoms and much number of worms in control pigs. 7) It was shown that, in pigs, a few of the $5{\times}10^4r$-irradiated larvae can migrate to the lungs, where they stay for as long as 104 days in stunted and sterile states; their body-lengths were short and their uteri developted no eggs. 8) There was evidence that the male larvae were more susceptible to X-ray than the female larvae. 9) Antibodies relating to the administration with $5{\times}10^4r$-irradiated or normal larvae were detected from the sera of both guineapigs and pigs by means of indirect haemagglutination and agar diffusion precipitin tests. Relatively higher antibody titers were recorded by the former test, but precipitin bands were demonstrable only when the positive sera were concentrated in one tenth of original volume in the later one. 10) The antibody titers of pig sera began to rose on 14 days, kept their peak during the period from 14 th day to 21st day, and fell to a low level on 28 days after the administration of $5{\times}10^4r$ or normal infective larvae. 11) A slight increase in gamma globublin of the pig sera occurred following the administration. The gamma globulin level showed a tendency to fluctuate in acordance with the antibody level. 12) A marked eosionophilia occurred in pigs on 7 or 14 days following the administration. The eosinophil count showed the same tendency to fluctuate as the gamma globulin did. 13) It was shown that the serum antibodies detected by the heated extract of adult Metastrongylus apri react crossly with the heated extract of adult Ascaris suis but not with that of adult Trichuris suis in indirect haemagglutination and agar diffusion preciption reactions. 14) The heated extract of adult Metastrongylus apri could he divided into 9 antigenic components by immunoelectrophoresis, one (arc 4) of which was shown to be common to both extracts of adult Ascaris suis and adult Trichuris suis, and the other one (arc 9) to only the extract of adult Ascaris suis.