In the present study, we investigated the anticariogenic compounds from Aralia continertalis (A. continnentalis) has been isolated and identified by MS, $^1H-NMR$ and $^{13}C-NMR$. The MeOH extract was suspended in $H_2O$ and sequentially Partitioned with $CHCl_3$, EtOAc, and n-BuOH. The $CHCl_3$ fraction showed remarkable antibacterial activity against S. mutans. The antibacterial activity compounds against 5. mutans by MIC was isolated successively through the screening system and various chromatography methods. From this active chloroform subfraction, isolation and identification finally gave continentalic acid by spectroscopic methods (MS, $^1H-NMR$ and $^{13}C-NMR$) as an active principle. The compound, continentalic acid, showed significant growth, acid production, adhesion and water-insoluble glucan synthesis inhibitory effect against 5. mutars. These results suggest that continentalic acid from A. continentalis may inhibit cariogenic properties of S. mutans and these properties may provide some scientific rationales that the local inhabitants used the extracts for treatment of dental diseases.
Numerous chemical agents have been developed to reduce the activity of cariogenic bacteria. Of these, chlorhexidine is acknowledged as the most effective. Gel and mouthrinse have been the traditional method of its application in the mouth. It has been reported that chlorhexidine varnish has prolonged inhibitory effect on the number of streptococcus mutans in saliva and plaque. Recently, chlorhexidine varnish and polyurethane sealant have been developed to promote prolonged anticariogenic effect of chlorhexidine. Products containing 10% chlorhexidine varnish and polyurethane sealant have been developed to prevent caries by reducing the number of streptococcus mutans in the oral cavity. The purpose of this study is to investigate the inhibitory effect of chlorhexidine varnish and polyurethane sealant on streptococcus mutans in the primary dentition. Children with primary dentition containing no active carious lesion were divided into two groups. To the experimental group (n=11), chlorhexidine varnish and polyurethane sealant ($Chlorzoin^{(R)}$, Knowell Therapeutic Technologies, Inc. Canada.) was applied once a week for four weeks according to the manufacturer's instruction. Only oral prophylaxis was performed on the control group(n=7). Caries activity was measured after using $Cariescreen^{(R)}$SM (Knowell Therapeutic Technologies, Inc. Canada,) to incubate streptococcus mutans before and 5, 12, 24 weeks after initial varnish application. The following results were observed.; 1. There was statistically significant decrease in the number of streptococcus mutans in the experimental group for 5 weeks(P<0.01), 12 weeks(P<0.05) after the initial application. but, by 24 weeks significant difference had disappeared. 2. As the inhibitory effect of chlorhexidine varnish and polyurethane sealant application is not everlasting, reapplication at 12-24 weeks should be needed.
It has been well established that S. mutans is the major etiological agent in dental caries, one of the most common oral diseases worldwide. The present study was designed to investigate the effect of Saururus chinensis (S. chinensis) ethanol extracts on the growth, acid production, biofilm formation, adhesion, and insoluble glucan synthesis of S. mutans. The ethanol extracts of S. chinensis showed concentration dependent inhibitory activity against the growth and acid production of S. mutans, and produced significant inhibition at the concentration of 0.025, 0.05, 0.1, 0.2 and 0.4 mg/ml compared to the control group. The extracts markedly inhibited S. mutans adherence to HA treated with saliva, and cell adherence was repressed by more than 80% at the concentration of 0.05 mg/ml and complete inhibition was observed at the concentration of 0.4 mg/ml. On the activity of glucosyltransferase which synthesizes water insoluble glucan form sucrose, ethanol extract of S. chinensis showed more than 10% inhibition over the concentration of 0.025 mg/ml. The synthesis of insoluble glucan was decreased in the presence of 0.025 ${\sim}$ 0.4 mg/ml of the ethanol extract of S. chinensis. Our research strongly suggested S. chinensis was a promising natural product for the prevention of dental caries.
The use of fluoride is one of the most effective methods for caries prevention. Fluoridation of public water supply has been recognized, for many years, as an effective way to reduce dental caries. The fluoride supplement has been recommended when the natural fluoride was unavailable or below the optimal range. However the mechanism of caries prevention by fluoride has not yet been clarified and it is well known that an overdose of fluoride results inacute and chronic toxicity, especially dental fluorosis. Fluoride mouthrinsing solution is widely used in dentistry due to its effectiveness in carrying anticariogenic action. Understanding the effects of fluoride mouthrinsing solution on human gingival fibroblasts will provide the safety rationale for its use during the caries preventive therapy. The purpose of this study was to evaluate the cytotoxic effect of fluoride mouthrinsing solution on the human gingival fibroblast in vitro. The human gingival fibroblasts were cultured from healthy gingiva on the extracted deciduous teeth of children. Cells were inoculated into a 24-well plate with $1{\times}10^4cells/well$ of medium at $37^{\circ}C$, 100% humidity, 5% $CO_2$ incubator for 24 hours. And the cells were counted by using the hemocytometer at each designed study. Human gingival fibroblasts were cultured in growth medium after one minute application range of 0.02%-0.2% NaF solution and 0.1% $SnF_2$ solution. The cells used in this study were between fifth to eighth passage number. The cell morphology was examined by inverted microscope and cell proliferation was measured by incorporating $[^3H]$-thymidine into DNA. DNA synthesis by human gingival fibroblasts was assessed by $[^3H]$-thymidine uptake assays while the cell activity was measured by MTT assay. Each concentrated fluoride mouthrinsing solution was estimated for its biocompatability with fibroblasts by the tissue culture technique. The results of this study were as follows : 1. It was observed that at 0.05%, 0.2% NaF mouthrinsing solution the cytoplasmic processes became globular. When 0.1% $SnF_2$ mouthrinsing solution was applied, the cytoplasmic process and cell morphology were disappeared. 2. DNA synthetic activity was reduced regardless of the concentration of the fluoride mouthrinsing solution. However, the result is statistically insignificant except 0.1% $SnF_2$ mouthrinsing solution(p<0.05). 3. Our results indicate that 0.02%, 0.05% concentrations of NaF mouthrinsing solution caused minimal cytotoxicity. But 0.2% NaF and 0.1% $SnF_2$ concentration were a significant difference between the cell activity in the experimental group and control group (p<0.05). 4. After appling 0.05% & 0.02% NaF fluoride mouthrinsing solution, cell activity was restored to the control groups level according to incubating time. The results suggest that direct exposure to fluoride solution inhibits gingival fibroblast activity. Therefore, for the most effective use of fluoride use, lowering the concentration of fluoride mouthrinsing is advisable because it maintains biocompatability and free ion in the oral fluid.
본 연구는 생약의 추출분획 용매 중 헥산추출에 따른 우식원인균의 억제효과와 배양시간 경과에 따른 항균력을 시간별로 비교 검토함으로써 치아우식예방제재로서의 가능성을 살펴보고자 헥산 분획에 의한 생약추출물 11종을 대상으로 우식원인균인 S. sobrinus B13를 사용하여 항균활성을 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 생약 추출물에 S. sobrinus를 접종한 직후, 6, 12, 24시간 후의 항균효과를 측정해 보았을 때, 단삼이 가장 좋은 항균효과를 나타냈고, 그 다음으로 향부자와 목향, 백출 순으로 나타났다.
우리 나라 연안에서 채취한 해조류 27종의 $80\%$ ethanol 추출물이 Streptococcus mutans KCTC 3300의 증식에 미치는 영향을 검색하고, 다시마의 추출용매별 항균성과, $80\%$ ethanol 추출물을 용매분획하였을 때 획분별 MIC를 측정하였다. S. mutans KCTC 3300에 대한 해조류 추출물의 항균활성은 다시마가 가장 강하였고, 갈파래, 청각, 감태, 곰피 및 미역도 비교적 높은 활성을 나타내었으며 홍조류보다 갈조류와 녹조류에 속하는 종이 대체적으로 강하였다 다시마의 항균활성은 추출용매에 따라 차이가 있었으나 용매별 가용성 획분의 량과 항균성간에는 뚜렷한 관련이 나타나지 않았다. 5. mutans KCTC 3300과 S. sobrinus KCTC 3307에 대한 해조류의 $80\%$ ethanol 추출물의 MIC는 해조류의 종뿐만 아니라 동일한 해조류 추출물의 경우에도 균종에 따라 차이가 있었다. 다시마의 $80\%$ ethanol 추출물을 유기용매를 사용하여 순차 분획하였을 때 항균활성 물질의 대부분은 ether 획 분에 이행하여 이 획분의 MIC는 105$\mu$g/mL이었고, 수용성 획분은 약 5,500$\mu$g/mL의 농도에서도 균의 증식을 저지하지 못하였다.
Xylitol is a sugar alcohol with a variety of functions including bactericidal and anticariogenic effects. However, the cellular mechanisms underlying the role of xylitol in bone metabolism are not yet clarified. In our present study, we exploited the physiological role of xylitol on osteoclast differentiation in a co-culture system of osteoblastic and RAW 264.7 cells. Xylitol treatment of these co-cultures reduced the number of tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP)-positive multinucleated cells induced by 10 nM $1{\alpha},25(OH)_2D_3$ in a dose-dependent manner. A cell viability test revealed no marked cellular damage by up to 100 mM of xylitol. Exposure of osteoblastic cells to xylitol decreased RANKL, but not OPG, mRNA expression in the presence of $10^{-8}M$$1{\alpha},25(OH)_2D_3$ in a dose-dependent manner. Furthermore, bone resorption activity, assessed on bone slices in the coculture system, was found to be dramatically decreased with increasing xylitol concentrations. RANKL and OPG proteins were assayed by ELISA and the soluble RANKL (sRANKL) concentration was decreased with an increased xylitol concentration. In contrast, OPG was unaltered by any xylitol concentration in this assay. These results indicate that xylitol inhibits $1{\alpha},25(OH)_2D_3$-induced osteoclastogenesis by reducing the sRANKL/OPG expression ratio in osteoblastic cells.
본 연구에서는 홍삼의 항충치 효과를 조사하기 위하여 홍삼박 n-hexane 추출물의 충치 원인균 Streptococcus mutans에 대한 항균 효과, 균체 부착과 생물막 생성 저해 효과를 측정하였다. 홍삼박 n-hexane 추출물의 농도에 비례하여 S. mutans의 생육이 저해되었으며, 125 ㎍/mL 이상의 농도에서는 거의 관찰되지 않았다(MIC=125 ㎍/mL). 홍삼박 n-hexane 추출물이 세포막에 작용하여 세포의 핵산 성분이 유출시키는 것으로 나타났다. 그리고, 홍삼박 n-hexane 추출물은 125 ㎍/mL 이상의 농도에서 S. mutans의 부착과 생물막 형성을 90% 이상 저해하였다. GTase 활성은 50 ㎍/mL 농도에서 완전히 저해되었다. 결론적으로 홍삼박 n-hexane 추출물은 S. mutans의 생육과 생물막 형성을 공통적으로 저해하는 것으로 나타났다.
충치 원인균인 S. mutans가 생산하는 불용성, 부착성 glucan 합성효소인 GTase의 활성을 저해하는 물질을 생약재로 부터 탐색, 개발하여 기능성 식품 또는 의약품의 소재로 응용하는 것을 목적으로 연구를 수행하였다. 32종의 생약재 추출물에 대하여 GTase 저해활성을 측정한 결과, 후박피에서 가장 높은 활성이 관찰되었다. 후박피 추출물에 대하여 용매분획을 행한 결과 ethylacetate층에 대부분의 활성이 존재하였으므로, 이 획분을 silicagel column chromatography, prep. HPLC 등을 이용하여 더욱 분리, 정제하여 순수한 GTase 저해물질을 분리하였다. 이 물질의 분리수율은 0.013% (w/w)였다. 이 화합물을 UV, FAB-MS 및 NMR spectrometry 등을 이용하여 화학구조의 해석을 실시한 결과 이 물질은 coniferyl alcohol의 중합체로 lignan계 화합물인 4,4'-dihydroxy-3,3'-dimethoxylignan (분자량 330)으로 확인되었다. 이 화합물은 후박피에서는 최초로 확인된 물질이다. 또한 충치 원인균인 S. mutans를 포함한 11종의 구강 미생물에 대한 항균성을 검토한 결과 비교 화합물에 비해 비교적 강력한 활성$(MIC;\;31.3\;{\mu}g/ml)$이 나타났다. 지금까지 후박피는 반하후박탕, 후박삼물탕 등 한방약재의 중요한 원료로 이용되어 왔으며, 복통의 치료효과 및 건위 작용 등이 알려져 있다. 또한 후박피 중에는 diphenyl계 화합물인 magnolol 및 honokiol등이 함유되어 있어 이들 물질이 건위작용을 돕는 것으로 알려져 있을 뿐이다. 따라서 이번에 새롭게 확인된 4,4'-dihydroxy-3,3'-dimethoxylignan이 충치 예방효과를 지니고 있다는 사실은 금후 산업적 응용면에서도 매우 중요한 결과로 여겨져 지속적인 연구가 기대된다.
치면세균막내의 미생물 중 Streptococcus mutans $N_{AKAI}$는 치면세균막형성에 가장 중요한 역할을 하는 원인균으로 알려져 있으며, Streptococcus mutans $N_{AKAI}$는 치아우식을 일으키는 주요 원인균으로 주목을 받고 있다. Streptococcus mutans $N_{AKAI}$균에 항균효과를 나타내는 화합물 acanthoic acid (AA, $C_{20}H_{30}O_2$)을 Acanthopanax koreanum $N_{AKAI}$의 클로로포롬 추출물에서 각종 컬럼크로마토그래피법으로 추출분리하여 ms, 1H-NMR 그리고 13C-NMR 등을 이용하여 구조를 동정하였다. AA의 Streptococcus mutans $N_{AKAI}$에 대한 최소억제농도(MIC)와 최소살균농도(MBC)를 조사하였으며, 이 때 각각 2와 $4\:{\mu}g/mL$을 나타냈었다. 또한 다른 천연물에서 분리된 화합물인 tanshinone IIA는 8/16\;${\mu}g/mL$, 녹차의 추출물과 eucalyptoi은 $250/500\;{\mu}g/mL$이었다. 그리고 또 다른 치주질환의 원균인 Streptococcus sobrinus $N_{AKAI}$, Streptococcus sanguis $N_{AKAI}$ 및 Streptococcus gordonii $N_{AKAI}$의 최소억제 농도의 범위는 $4{\sim}32\;{\mu}g/mL$이었다. 우리의 연구결과에서 Acanthopanax koreanum $N_{AKAI}$에서 분리한 acanthoic acid 치주질환 원인균들을 억제하는 항균제로의 가능성을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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