• 한국식품영양과학회지
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• 제34권5호
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• pp.619-625
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• 2005

본 연구는 위염, 위궤양, 위림프종 및 위암과 같은 소화기 질환의 원인균으로 알려진 H. pylori균을 항원으로 하여 젖소에 면역시킨 후 생산된 우유의 항원 항체의 특이성, H. pylori균 응집력, 항체의 산과 알칼리 및 열에 대한 안정성에 대해 조사하였다. Anti-H, pylori항체의 SDS-PAGE에 의한 분자량측정 결과 heavy chain은 50 kDa 정도, light chain은 24 kDa 정도로 확인되었다. H. pylori 항원 단백질의 분자량을 측정 한 결과 12개의 band가 확인되었고, anti-H, pylori의 항원 특이성을 알아보기 위해 western blotting을 한 결과 혈청, 혈청정제, 유청, 유청정제 모두 7개의 항원성 물질을 확인할 수 있었다. 그리고 주 항원성 물질은 분자량이 97, 66, 34 kDa이었다. 유청내 anti-H. pylori 특이 항체의 항균작용에 대해 알아보기 위해 실시한 균응집 반응결과 H. pylori 균에 대해 1/10의 높은 응집가를 나타내었다. 우유 및 유제품 생산시 발생할 수 있는 산${\cdot}$알칼리 및 열에 대한 anti-H, pylori항체의 안정성 실험결과 $pH5\~10$범위에서 안정한 상태로 $100\%$의 활성을 나타내었다. Anti-H, pylori 항체의 열에 대한 안정성 실험에서는 $60^{\circ}C$에서 60분간 안정한 상태를 보였고, $70^{\circ}C$에서도 비교적 안정한 상태였으나 60분 경과 후 $40\%$정도 활성이 감소하였다. $80^{\circ}C$에서는 4분간 처리 했을 때 $77\%$의 활성을 유지하였고, $100^{\circ}C$에서도 1분간은 비교적 안정한 상태였다.

• 생명과학회지
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• 제18권2호
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• pp.241-248
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• 2008

축산물을 이용하여 생산된 특이항체는 세균성감염에 의한 설사병 치료와 충치예방에 효과가 있고, 특히 계란을 이용한 IgY (Immunoglobulin Yolk)는 비교적 산과 열에 안정하다는 실험결과가 보고되어[22] 있다. 식품분야에 특이항체를 식품소재로 산업화에 활용한 빈도는 아직 미미한 상태에 있으나, 최근 면역학, 단백질공학, 생명공학 등의 발전과 기술 향상으로 식품 소제로써의 활용성이 점차 높아질 것으로 기대된다. 본 연구에서는 H. pylori의 감염을 예방하고 치료보조제로 사용할 목적으로 포유동물을 통한 피동면역용 항체를 생산하고자 하였다. H. pylori로부터 항원을 분리하고, 분리된 항원에 대한 항체생산 및 H. pylori의 응집정도를 알아보았다. H. pylori로부터 분리된 주요 항원 단백질은 WC, OMP, crude urease, LPS 각각 12개, 7개, 3개, 1개 종류의 band를 확인할 수 있었다. 분리된 항원의 IgG 항체 생성은 동일한 항원농도인 $20{\mu}g/100{\mu}l$에서 각각 WC (L) $77.9{\pm}6.4{\mu}g/ml$, OMP $84.9{\pm}6.4{\mu}g/ml$, crude urease $123.8{\pm}2.9{\mu}g/ml$로 crude urease 항원이 가장 많은 것으로 나타났다. 그리고 IgA 항체 생성은 WC (L) $2.5{\pm}0.32{\mu}g/ml$, OMP $2.0{\pm}0.43{\mu}g/ml$, crude urease $1.3{\pm}0.25{\mu}g/ml$로 IgA 항체 생성은 WC (L) 항원이 가장 많은 것으로 나타났다 Western blotting을 통하여 항원 단백질의 면역원성 알아본 결과 WC 10종류, OMP 6종류, crude urease 3종류의 주요 항원성 물질을 확인할 수 있었다. 항체의 H. pylori에 대한 응집정도를 나타내는 응집가는 anti-WC (H), anti-WC (L), anti-OMP, anti-crude urease 항혈청에서 각각 $2^5,\;2^5,\;2^6\;and\;2^7$으로 나타났으며, 상대적으로 anti-crude urease 항혈청이 가장 높은 응집가를 나타내었다. 각 항원에 의해 생성된 항혈청의 urease활성 억제에 대한 흡광도(OD=550 nm)는 WC (H) $0.14{\pm}0.01$, WC (L) $0.16{\pm}0.01$, OMP $0.18{\pm}0.03$, Urease $0.18{\pm}0.04$로 대조구 $0.26{\pm}0.02$와 비교할 때 유의적인 억제효과가 있는 것으로 나타났다. 이상의 결과를 종합해 볼 때 H. pylori 항원의 분리와 분리된 항원의 항체 생성능, H. pylori의 응집가, urease 활성억제측면에서 WC 및 crude urease항원 모두 높은 항체 역가를 나타내었다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제34권4호
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• pp.484-488
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• 2005

본 연구는 위염, 위궤양, 위림프종 및 위암과 같은 소화기 질환의 원인균으로 알려진 Helicobacter pylori균을 항원으로 하여 젖소에 면역시킨 후 생산된 우유의 anti-H. pylori 항체 생성능을 검토하고, 백신 투여량과 항체 생성과의 관계, 비유시기에 따른 항체생성과의 관계 그리고 백신투여가 젖소에 미치는 영향을 알아보았다. 백신 투여량에 따른 혈청과 유청내의 anti-H. pylori항체의 함량은 10 mL, 20 mL, 30 mL 백신투여 모든 군에서 대조구에 비해서 높은 항체 생성량을 확인하였으며, 그 중 20 mL 투여가 항체 생성에 가장 큰 영향을 미친 것으로 조사되었다. 백신 투여량에 따른 유청내의 antl-H. pylori항체 생성량은 혈청에서 나타난 결과와 유사한 결과를 나타내었다. 백신투여에 따른 비유시기별 항체함량은 혈액내에서는 $2\~4$주까지 증가하는 경향을 보이다가 $6\~12$주 사이에는 대조구와 유의성 있는 차이를 보였고, 처리구간 항체생성량은 비유초기>비유중기>비유 후기 순으로 유의성있는 차이를 나타내었다(p<0.05). 그리고 유청내 항체 함량은 혈액과 유사한 경향을 나타내며 항체함량이 증가하였으나, 처리구간의 유의적인 차이는 나타나지 않았다. 백신투여로 인하여 백신투여 1일째의 산유량은 $12\%$ 감소하는 경향을 나타냈고, 최장 1주일 정도 지나면서 회복되었다. 백신투여 후 젖소의 체온을 측정한 결과 정상적인 범위 내에서 체온이 상승하여 백신투여가 젖소의 생리적 변화에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.

• 대한임상검사과학회지
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• 제37권1호
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• pp.41-46
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• 2005

It is known that mast cells (MCs) are increased in H. pylori-infected gastritis and its increase is mediated by stem cell factor (c-kit ligand). To determine the mechanism of mast cell recruitment and activation by stem cell factor, weinvestigated the expression of stem cell factor receptor (c-kit) in H. pylori-positive and -negative gastric mucosa. Biopsy specimens from 16 H. pylori-negative and 20 positive subjects were examined. H. pylori infection in gastric mucosa was examined by the Warthin-Starry method. MC and c-kit were identified by immunohistochemisty, using a monoclonal antihuman MC tryptase antibody and a polyclonal anti-human c-kit antibody. Densities of MC and c-kit positive cell were measured by a computerized image analysis system. MCs were detected in the lamina propria of both H. pylori-positive and -negative gastric mucosa. Densities of MC and c-kit positive cell were significantly greater in H. pylori-positive than -negative subjects. c-kit was located on the surface of MCs. These results indicate that stem cell factors may be one of the factors involved in mast cell increase and that they activate mast cells by binding with c-kit.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제16권2호
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• pp.318-324
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• 2006

In order to develop an oral vaccine to prevent H. pylori infection, we have expressed the hpaA gene of H. pylori K51 isolated from Korean patients, encoding 29-kDa HpaA that is known to be localized on the cell surface and flagella sheath, in a live delivery vector system, Lactococcus lactis. The hpaA gene, amplified by PCR using the genomic DNA of H. pylori K51, was cloned in the pGEX-2T vector, and the DNA sequence analysis revealed that the hpaA gene of H. pylori K51 had 99.7% and 94.8% identity with individual hpaA genes of the H. pylori 26695 strain (U.K) and the J99 strain (U.S.A). A polyclonal anti-HpaA antibody was raised in rats using GST-HpaA fusion protein as the antigen. The hpaA gene was inserted in an E. coli-L. lactis-shuttle vector (pMG36e) to express in L. lactis. Western blot analysis showed that the expression level of HpaA in the L. lactis transformant remained constant from the exponential phase to the stationary phase, without extracelluar secretion. These results indicate that the HpaA of H. pylori K51 was successfully expressed in L. lactis, and suggest that the recombinant L. lactis expressing HpaA may be applicable as an oral vaccine to induce a protective immune response against H. pylori.

• Pediatric Gastroenterology, Hepatology & Nutrition
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• 제6권2호
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• pp.103-111
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• 2003

목 적: 만성 반복성 복통, 식사 후 상복부 불쾌감, 잦은 구토나 구역질이 있는 소아를 대상으로 위내시경을 시행하여 위십이지장 병변을 확인하고, 생검체를 이용한 위십이지장 조직학적 검사와 H. pylori 검출 그리고 면역블롯팅을 통해 혈청 내에 H. pylori 특이 항체 존재를 확인하여 한국에서 관찰되는 소아의 위장관 증세와 위십이지장병변 및 H. pylori 감염과의 관계를 조사하고자 하였다. 방 법: 1990년 6월부터 1991년 4월까지 경상대학교병원 소아과에서 상부 위장관 증상으로 위내시경을 시행 받은 184명 중 위 전정부에서 생검이되었고, 요소분해효소 검사, Warthin-Starry 은염색 혹은 Hematoxylin-Eosin 염색으로 조직학적에서 H. pylori의 존재유무를 확인할 수 있었던 107명을 대상으로 위십이지장 조직학적 검사와 IgG 면역블롯팅에 의한 항-H. pylori 항체 보유 유무를 확인하였다. 결 과: 1) 대상 환아 107명 중 남아가 61명(57%), 여아가 46명(43%)이었으며, 연령은 2세부터 15세까지 분포하였고 평균연령은 10.7세로서 10세에서 15세 사이가 가장 많았다. 2) 내시경상 15%에서 위출혈 반점, 위궤양, 십이지장궤양, 십이지장 미란, 출혈성 십이지장염 등이 관찰되었고 대부분은 다양한 정도의 위점막 발적이 관찰되었다. 3) 107명 중 94명(88%)에서 경도 이상의 조직학적 만성위염이 있었으며, 십이지장 조직이 검사 가능하였던 99명 전원에서 만성십이지장염이 있었다. 4) 요소분해효소 검사는 위에서는 45%, 십이지장에서는 25.6%에서 양성으로 판정되었다. H&E 염색 검사에서 38.7%, Warthin-Starry 은염색 검사에서는 40%에서 HPLO 양성이었다. 이 세가지 검사 중 1개 검사에서 양성인 경우인 조직학적 H. pylori 양성은 57%이었다. 5) IgG 면역블롯팅 양성은 96%이었다. 6) 연령군별 조직학적 H. pylori 양성은 0∼4세 군에서는 29%, 5∼9세 군에서는 41%, 10∼15세 군에서는 68%로 연령이 증가할수록 양성률이 증가하였으나, 조직학적 만성위염 및 만성십이지장염 빈도와 면역블롯 양성 빈도는 연령군별 차이가 없이 높은 양성률을 유지하였다. 결 론: 상부 위장관 증세가 있는 소아의 대부분은 조직학적 만성위염 및 만성십이지장염과 동시에 H. pylori에 대한 특이 IgG 항체를 보유하고 있었다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제14권3호
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• pp.1635-1642
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• 2013

Helicobacter pylori antigen was prepared from an isolate from a patient with a duodenal ulcer. Serum samples were obtained from culture-positive H. pylori infected patients with duodenal ulcers, gastric ulcers and gastritis (n=30). As controls, three kinds of sera without detectable H. pylori IgG antibodies were used: 30 from healthy individuals without history of gastric disorders, 30 from patients who were seen in the endoscopy clinic but were H. pylori culture negative and 30 from people with other diseases. OFF-GEL electrophoresis, SDS-PAGE and Western blots of individual serum samples were used to identify protein bands with good sensitivity and specificity when probed with the above sera and HRP-conjugated anti-human IgG. Four H. pylori protein bands showed good (${\geq}$ 70%) sensitivity and high specificity (98-100%) towards anti-Helicobacter IgG antibody in culture-positive patients sera and control sera, respectively. The identities of the antigenic proteins were elucidated by mass spectrometry. The relative molecular weights and the identities of the proteins, based on MALDI TOF/TOF, were as follows: CagI (25 kDa), urease G accessory protein (25 kDa), UreB (63 kDa) and proline/pyrroline-5-carboxylate dehydrogenase (118 KDa). These identified proteins, singly and/or in combinations, may be useful for diagnosis of H. pylori infection in patients.

• Journal of Gastric Cancer
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• 제3권2호
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• pp.97-103
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• 2003

Purpose: This study aims to determine the infection rate of Helicobacter pylori (H. pylori) in gastric cancer patients who received gastrectomies, and to compare the rates of H.pylori infection detected by serological test and that of histopathological test, and to evaluate its clinical meaning. Materials and Methods: Fifty two patients were selected from those who underwent gastrectomies at the Department of Surgery, Samsung Medical Center, from March 1997 to May 1997. The control group consisted of healthy 103 persons visited the center for health promotion in Samsung Medical Center. In both groups, we quantitatively checked serum level of IgG anti H. pylori antibody titer by ELISA using GAP IgG test kit (BioRad, USA) for the serological test, and we microscopically examined the surgical specimen stained by Warthin-Starry silver staining method for the histopathological test. Results: The seropositive rate of H. pylori in the patients' group was $71.2\%$ (37/52), and the control group was $65.0\%$ (67/103). The difference between two groups was statistically significant. However the histopathological study showed that the overall detection rate of H. pylori was $61.5\%$ (32/52) in the patients' group and $61.2\%$ (63/103) in the control group; nd this difference was not statistically significant Conclusion: We could confirm that H.pylori infection rate in the gastric cancer resected patients was statistically higher than in the normal healthy persons even in small population. And the detection method for the H. pylori infection by serological test was presumed to be better than that of histopathological test using surgical specimen. Further study for the larger population by well-organized multicenters will be needed.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제13권2호
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• pp.223-227
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• 2006

Anti-H pylori 항체를 함유한 면역우유를 $60^{\circ}C$에서 30분 열처리한 것과 열처리하지 않은 Anti-H. pylori 항체를 함유한 원유의 면역활성 비교시 99.99(100)%의 면역 활성을 나타내었으며, $75^{\circ}C$ 이상의 열처리에 의해서는 면역 활성이 급격하게 감소하여 약 50%이하로 감소하였다. 열처리 온도가 높을수록, 열처리 시간이 증가할수록 총균수의 감소율이 증가하였다. Coliform bacteria의 경우는 원유에서 $10^2\;CFU/mL$이 관찰되었으나 모든 열처리 구에서는 관찰되지 않았다. 면역우유를 $2^{\circ}C,\;4^{\circ}C$ 그리고 $10^{\circ}C$에서 21일 동안 저장한 결과 면역우유의 저장 중pH의 변화는 저장 21일 동안 $2^{\circ}C$와 $4^{\circ}C$에 저장한 경우 저장온도에 따른 뚜렷한 변화는 관찰할 수 없었으며, $10^{\circ}C$에 저장한 경우 저장 7일 이후 급격히 감소하였다. 총균수의 변화는 저장 초기 $10^3\;CFU/mL$에서 $2^{\circ}C$와 $4^{\circ}C$에 저장한 열처리 면역우유의 총균수는 저장 21일 동안 뚜렷한 증가현상을 관찰할 수 없었으며, $10^{\circ}C$에 저장하였을 경우 7일 이후 급격히 증가하여 저장 14일째 $10^8\;CFU/mL$로 부패현상을 나타내었다. 면역우유의 저장 중 면역 활성의 변화는 저장 온도에 관계없이 저장 14일까지는 저장초기의 활성에 비해 뚜렷한 차이는 나타나지 않았으나 14일 이후 급격히 감소하는 경향을 나타내었다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제35권8호
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• pp.985-989
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• 2006

Anti-H. pylori 항체를 함유한 면역우유의 다양화와 기능성강화를 위해 면역요구르트 제조 가능성을 검토하였다. 발효 중 pH는 배양 6시간째 pH 6.4에서 4.5로 감소하였고 그 이후는 뚜렷한 변화는 관찰되지 않았다. 산도는 배양 6시간째 0.4%에서 1.27%까지 급격히 증가하였으며, 배양 24시간까지 1.34%를 유지하였다. 유산균의 변화는 배양 6시간째 $10^9\;CFU/mL$이었으며, 배양 24시간 동안 $10^9\;CFU/mL$이상을 유지하였다. 열처리 전후의 면역우유와 면역우유로 제조한 요구르트의 IgG 함량은 각각 $11.10\;{\mu}g/mL$, $10.76\;{\mu}g/mL$, $10.38\;{\mu}g/mL$이었으며, 열처리 후 면역우유의 면역 활성은 열처리 전에 비해 약 97%, 요구르트 제조 후는 93.5%를 유지하였다. 면역우유로 제조한 요구르트의 $2^{\circ}C$, $4^{\circ}C$, $10^{\circ}C$에서 저장 중 pH의 변화는 $2^{\circ}C$와 $4^{\circ}C$에서 저장한 경우 배양 전 기간에 걸쳐 저장초기 pH 4.2 범위를 유지하였다. 적정산도는 $2^{\circ}C$와 $4^{\circ}C$에서 저장한 경우 저장초기 1.42%에서 저장기간 동안 뚜렷한 변화가 관찰되지 않았다. $10^{\circ}C$에서 저장한 요구르트의 유산균수는 저장 7일째 $10^8\;CFU/mL$, 저장 14일째 $10^9\;CFU/mL$이었다. $2^{\circ}C$, $4^{\circ}C$에 저장한 경우 저장 전 기간 동안 저장초기의 $10^8\;CFU/mL$와 유사한 유산균수를 나타내었다. 면역우유로 제조한 요구르트의 저장 중 IgG 함량의 변화는 저장하기 전 $10.11\;{\mu}g/mL$이었으며, $2^{\circ}C$와 $4^{\circ}C$에서 저장한 경우 저장 7일째까지는 저장초기와 유사한 함량을 나타내었으며, 저장 14일 이후 급격히 감소하여 배양 21일째는 각각 $7.65\;{\mu}g/mL$, $5.75\;{\mu}g/mL$을 나타내었다. $10^{\circ}C$에서 저장한 경우도 이와 유사하였으며, 저장 21일째 $5.51\;{\mu}g/mL$로 급격하게 감소하였다.