Escherichia coli, particularly multidrug-resistant (MDR) strains, is a serious cause of healthcare-associated infections. Development of novel antimicrobial agents or restoration of drug efficiency is required to treat MDR bacteria, and the use of natural products to solve this problem is promising. We investigated the antimicrobial activity of dried green coffee (DGC) beans, coffee pulp (CP), and arabica leaf (AL) crude extracts against 28 isolated MDR E. coli strains and restoration of ampicillin (AMP) efficiency with a combination test. DGC, CP, and AL extracts were effective against all 28 strains, with a minimum inhibitory concentration (MIC) of 12.5-50 mg/ml and minimum bactericidal concentration of 25-100 mg/ml. The CP-AMP combination was more effective than CP or AMP alone, with a fractional inhibitory concentration index value of 0.01. In the combination, the MIC of CP was 0.2 mg/ml (compared to 25 mg/ml of CP alone) and that of AMP was 0.1 mg/ml (compared to 50 mg/ml of AMP alone), or a 125-fold and 500-fold reduction, respectively, against 13-drug resistant MDR E. coli strains. Time-kill kinetics showed that the bactericidal effect of the CP-AMP combination occurred within 3 h through disruption of membrane permeability and biofilm eradication, as verified by scanning electron microscopy. This is the first report indicating that CP-AMP combination therapy could be employed to treat MDR E. coli by repurposing AMP.
목 적 : 최근 소아 요로감염의 가장 흔한 원인균인 E. coli에 대한 항생제 내성 문제가 점차 대두되고 있다. 본 연구에서는 소아 원외 요로감염 환아에서 분리된 E. coli에 대한 cefixime을 포함하여 흔히 사용되고 있는 경구용 항생제의 시험관 내 감수성 연구를 시행하여 적합한 치료 항생제 선택의 기초 자료를 얻고자 하였다. 방 법 : 2004년 10월부터 2005년 9월까지 연구 참여 병원 소아과 외래에서 요로감염으로 진단된 206명 환아의 요 배양검사에서 동정된 211개 균주 중 188개 E. coli를 대상으로 경구용 항생제(ampicillin, amoxillin, ampicillin-sulbactam, cefaclor, TMP-SMX, cefixime)에 대한 시험관 내 감수성 검사를 실시하였다. 결 과 : 분리된 E. coli 균주에 대한 항생제별 감수성 결과에서 내성률은 각각 ampicillin 81.4%, amoxicillin 85.6%, ampicillin-Sulbactam 77.2%, cefaclor 93.6%, TMP-SMX 50.5%, cefixime 13.3%이었다. ESBL 생성 E. coli는 7.0%이었다. 결 론 : Aminopenicillins계, cefaclor, sulfa약제들은 E. coli에 대한 내성률이 매우 높아 소아 요로감염의 일차 선택 항생제로 유용하지 못한 것으로 추정할 수 있었다. 그러나 cefixime과 같은 3세대 cephalosporin은 일차 치료 실패할 경우 이차 선택항생제로 유용할 수 있으며, 일차 선택 항생제로도 사용될 수 있을 것으로 추정되었다. E. coli의 항생제 내성 양상에 대한 광범위한 연구와 지속적 감시를 통하여 소아 원외 요로감염 치료에서 1차적으로 선택될 수 있는 경구용 항생제에 대한 지침 자료가 요구된다.
1996년부터 2001년까지 서울시내 환자에서 분리된 718주의 살모넬라속균의 균종별 분포 및 항생제 감수성을 조사한 결과 균종별 분포는 Sal. Enteritidis 가 298주(41.5%)로 가장 많이 분리되었으며, Sal. Typhi 218주(30.4%), Sal. Typhimurium 81주(12.1%)이었으며, 총 48종의 살모넬라균종이 분리되었다 살모넬라속균 718주의 16종 항생제에 대한 내성은 tetracycline (Te)에 대한 내성이 32.7%로 가장 높았으며, streptomycin(5) 28.0%, ticarcillin(TIC) 18.1%, ampicillin(AM) 12.4%순이었다. Sal. Enteritidis의 내성은 Te 34.7%, 5 32.3%, TIC 23.2%, AM 13.5%이었으며, Sal. Typhi는 S 13.8%, Te 10.6%이었으며, Sal. Typhimurium은 Te 66.7%, 5 42.5%, TIC 28.7%, AM 26.4%, C 17.2%이었다. 살모넬라속균 718주 중 324주(45.1%)가 1종 이상의 항생제에 내성을 나타내었으며, 단일항생제에 내성을 나타낸 균주가 64주(19.8%), 2제 내성균이 132주(40.7%), 3제 내성균이 50주(15.4%), 4제 내성균이 27주 (8.3%), 5제 내성균 27주(8.35), 6제 내성균 22주(6.8%), 7제 및 8제 내성균이 각각 1주이었다. 다제 내성 양상은 Te-K내성균이 115주(35.5%)로 가장 많았으며, Te-K-TIC내성균 27주(8.3%), Te-K-TIC-AM내성균 24주(7.4%)이었다 항생제 내성율은 Sal. Typhimurium이 73.6V로 가장 높았으며, Sal. Enteritidis 53.7%, Sal. Typhi 19.3%이었으며, Sal. Enteritidis는 단제 및 2제 내성율이 높은 반면, Sal. Typhi과 Sal. Typhimurium은 5제 이상 내성율이 각각 16.7%, 26.6%이었다.
넙치 병원성 세균에 대한 항균제 내성율과 다제내성을 조사하고자 연구를 수행하였다. 우리나라의 양식 넙치 (Paralichthys olivaceus)에서 161균주가 분리되었고 분리균주에는 Edwardsiella tarda (n=32), Vibrio ichthyoenteri (n=37), Vibrio spp. (n=54), Streptococcus parauberis (n=28) 그리고 Streptococcus spp. (n=10)가 포함되었다. E. tarda 분리균주는 tetracycline (84.4%)과 oxolinic acid (71.9%)에 높은 내성율을 나타내었고 V. ichthyoenteri와 Vibrio spp.는 ampicillin (94.6%, 81.5%)과 tetracycline (56.8%, 42.6%) 순서로 높은 내성율을 나타내었다. S. parauberis 분리균주는 ampicillin (57.1%), tetracycline (57.1%), erythromycin (35.7%) 순서로 높은 내성율을 보였다. E. tarda의 84.4%, V. ichthyoenteri의 73.0%, Vibrio spp.의 57.4%, S. parauberis의 42.8% 그리고 Streptococcus spp.의 70.0%가 2종류 이상의 항균제에 다제내성을 나타내었다.
국내 유통식품에서 verotoxin(VT)을 생성하는 대장균의 오염도를 조사하고 이로 인한 식중독의 발생을 사전에 예방하기 위하여 1997년부터 1999년 사이 햄버거. 식육 및 채소류에서 VT생성 대장균의 분포조사를 실시하였으며, 이 결과 분리된 대장균에 대한 분자생물학적 특성을 조사하였다 식육, 햄버거 및 채소류 총 1,700건의 식품 중에서 VT를 생성하는 대장균이 검출된 것은 3건으로 매우 낮은 검출율을 보였는데, 분리주의 혈청형은 각각 026 : H4, 0157 : H7 및 055 : Hl2였다. 혈청형 026 : H4 분리주는 VT I과 VT II를 생성하였고,055 : Hl2주는 VT I을 각각 생성하였으며, 두 분리주에서 eae유전자와 60 MDa plasmid DNA는 검출되지 않았다. 혈청형 0157 : H7주는 VT II를 생성하였고 60 MDa plasmid DNA는 검출되었으나 eae유전자는 확인되지 않았다. 따라서 분리된 VT생성 대장균들은 eae 유전자가 검출되지 않아 질병유발 가능성은 낮은 것으로 추정되었다. 항생제 내성능에서 혈청형 0157 : H7 분리주는 ampicillin과 streptomycin에 내성을 나타낸 반면, 혈청형 026 : H4주와 혈청형 055 : Hl2주는 ampicillin, carbenicillin, cephalothin, trimethoprim/sulfamethoxazole과 tetracycline에 내성을 보여 분리주의 다재내성능을 확인하였다 세포배양액으로 실시한 vero cell과 HeLa cell에 대한 세포독성능은 3주의 분리주에서 확인되었다.
Aminophylline, ceftriaxone 및 ampicillin/sulbactam (Unasyn)을 미숙아용 고영양수액제에 직접 첨가하거나 Y-site로 투여하는 경우의 안정성에 관해 조사하였다. Aminophylline 주사액 (25mg/mL) $300{\mu}l$와 ceftriaxone sodium (37.5 mg/mL) 2mL를 각각 고영양수액제 직접 첨가하였다. 또한 Y-site에서의 안정성 조사를 위해 ceftriaxone sodium (37.5 mg/mL)을 고영양수액제에 각각 1:1 및 1:2 부피비가 되도록 혼합하였고 Unasyn (25mg/mL)은 고영양수액제와 1:1의 부피비로 혼합하였다. 이상과 같이 조제한 혼합액을 $25^{\circ}C$와 $4^{\circ}C$에 보관하여 aminophylline은 48시간 동안 그리고 항생제들은 24시간 동안의 경시변화를 HPLC를 이용하여 분석하였다. Aminophylline은 위 보존조건에서 48시간동안 안정하였다(변화율 <$10{\%}$). Ceftriaxone sodium을 고영양수액제에 직접 첨가한 경우 ceftriaxone의 잔존률은 $25^{\circ}C$에서 4시간째에 $90.5{\pm}1.8{\%}$이었고 $4^{\circ}C$에는 $95.1{\pm}1.4{\%}$로 측정되었다. Y-site에서의 안정성과 관련하여 ceftriaxone sodium을 고영양수액제와 1:1로 혼합한 경우 양 보존조건에서 ceftriaxone은 24시간 동안 안정하였으나 1:2로 혼합한 경우에는 $4^{\circ}C$ 보관 시에만 안정하였고 $25^{\circ}C$에서는 24시간째에 약 $14{\%}$ 정도 분해되는 것으로 나타났다. 한편, Unasyn의 경우 ampicillin은 24시간째에 $4^{\circ}C$ 보관 시에만 안정하였고 $25^{\circ}C$에서는 24시간째에 약 $14{\%}$정도 분해되는 것으로 나타났다. 한편, Unasyn의 경우 ampicillin은 24시간째에 $4^{\circ}C$에서는 안정하였으나 $25^{\circ}C$에서는 $30{\%}$까지 감소되는 것으로 분석되었고 sulbactam은 24시간째에 온도와 관계없이 안정한 것으로 나타났다. Ceftriaxone sodium을 TPN과 Y-site 혼합 후 1-2시간 이내에 침천이 형성되었고 Unasyn의 경우에는 12시간째에 침천이 형성되었다. 혼합액의 pH나 색상은 연구기간 동안 일정하였다. 이러한 연구결과에 기초할 때, aminophylline은 고영양수액제와 혼합가능하고 ceftriaxone과 Unasyn은 고양양수액제와 혼합시 최소 1시간 동안은 안정한 것으로 평가되었다.
본 연구는 들깻잎과 들깻잎 생산환경을 대상으로 31개의 시료를 채취하여 S. aureus 를 분리 하였다. 분리된 S. aureus 31주의 toxicity를 평가하고자 독소유전자와 항생제 내성을 검색하였다. 그 결과 분리된 균주에서 4개의 서로 다른 독소유전자 패턴은 확인하였으며 sea와 sed유전자를 동시에 보유하는 균주는 4균주 (12.9%)였고, sed 유전자를 보유하는 균주는 9균주 (29.0%)였으며 see 유전자를 보유하는 균주는 1균주 (3.2%)였다. 한편 seb와 sec 유전자를 보유하는 균주는 없었다. 항생제 내성평가결과, 12제의 항생제(penicillin, ampicillin, oxacillin, amoxicillin-clavulanic acid, cefazolin, cephalothin, imipenem, gentamicin, tetracycline, ofloxacin, norfloxacin, and erythromycin)에 내성을 보인 균주는 7균주 (22.6%)였다. 또한 분리된 균주의 2균주 (2.6%)는 5제의 항생제(penicillin, ampicillin, amoxicillin-clavulanic acid, gentamycin, and telithromycin)에 내성을 보였고 MRSA (Methicilline Resistant Staphylococcus aureus)는 포장지, 장갑, 들깻잎에서 발견되었다. 따라서 본 연구결과는 들깻잎에 오염된 S. aureus에 의하여 독소형 식중독이 발생할 가능성을 시사하며 들깻잎과 생산 환경에서 항생제 저항성 S. aureus가 검출되어 의약계뿐만 아니라 농업현장에서도 항생제내성균주 출현을 예방하는 대책이 요구된다.
온도감수성 대장균 M5248 균주에 있어서의 plasmid $pPL-\lambda$와 pAS1을 $30^{\circ}C$에서 형질전환 시킬 때의 조건을 조사한 바 배양시간에 있어서는 균주의 대수 증식기 중반인 2시간 30분 배양시, 즉 cell농도는 $4.5\times10^7\;cells/ml$이며 파장 590nm에서의 흡광도가 0.45 일 때 plasmid $pPL-\lambda$와 pAS1 모두 형질전환율은 $2.4\times10^6$과 $1.5\times10^{-6}$로서 가장 높았다. 그리 고 competent cell $200{\mu}l(9\times10^{-6}cell)$에 대하여 plasmid 농도가 $6.4{\mu}g/ml$ 형질전환율이 $4.4\times10^{-6}$로서 높게 나타났으며 이때 calcium chloride만으로 처리한 것 보다 calcium chloride와 thymidine을 혼합하여 처리했을 때 2배 정도 더 많은 transformant를 유도하였다. Ampicillin 내성유전자는 LB배지를 첨가하여 $30^{\circ}C$에서 2시간 동안 배양했을 때 그 형질이 표현되었다.
40 strains of E. coli isolated from residents of a doctorless area in Korea in 1976 and 40 strains of E. coli isolated from patients of Seoul National University Hospital from 1975 to 1976 were examined for susceptibilities to 14 antimicrobial agents by the agar dilution method. The susceptibilities of the two groups to each antimicrobial agent were compared and correlations in the antimicrobial susceptibility of the 80 strains of E. coli among the 14 antimicrobial agents were also analyzed. The results were obtained as follow: 1. With Tetracycline, Oxytetracycline, Doxycycline and Ampicillin, the mean MIC's of E. coli isolated from patients of Seoul National University Hospital were 8.6 to 14 times higher than. those of E. coli isolated from residents of a doctorless area. 2. With Streptomycin, Minocycline and Carbenicillin, the mean MIC's o{ E. coli isolated from patients of Seoul National University Hospital were 4.1 to 5.6 times higher than those of E. coil isolated from residents of a doctorless area. 3. With Kanamycin, Penicillin and Cotrimoxazole, the mean MIC's of E. coli isolated from patients of Seoul National University Hospital were 2.6 to 3.7 times higher than those of E. coli isolated from residents of a doctorless area. 4. There were no significant differences in susceptibility to Erythromycin respectively between E. coli isolated from patients of Seoul National University coli isolated from residents of a doctorless area. 5. E. coli isolated from patients of Seoul National University Hospital were resistant to Erythromycin(100%), Streptomycin(75%), Tetracycline(72.5%), Oxytetracycline(72.5%), Doxycycline(72.5%), Minocycline(67.5%), Penicillin(82.5%), Ampicillin(60%) and Carbenicillin(65%) respectively and were sensitive to Gentamicin(97.5%), Cephalexin(92.5%) and Kanamycin(72.5%) respectively. 6. E. coli isolated from residents of a doctorless, area were resistant to Erythromycin(100%), Streptomycin(40%) and Penicillin(50%) respectively and were sensitive to Gentamicin(100%), Kanamycin(92.5%), Tetracycline(87.5%), Oxytetracycline(87.5%), Doxycycline(87.5%), Minocycline(87.5%), Ampicillin(95%), Carbenicillin(92.5%) and Cephalexin(97.5%) respectively. 7. There were high correlations among the suscebtibilities of the 80 strains of E. coli to Tetracycline analogues(Tetracycline, Oxytetracycline, Doxycycline and Minocycline) and among susceptibilities of the 80 strains of E. coli to Penicillin analogues(Penicillin, Ampicillin and Carbenicillin). 8. There were relatively high correlations between the susceptibilities of the 80 strains of E. coli to Penicillin analogues and those to Tetracycline analogues, between the susceptibilities to Penicillin analogues and those to Streptomycin and between the susceptibilities to Tetracycline analogues and those to Streptomycin.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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