• Applied Biological Chemistry
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• 제15권2호
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• pp.93-109
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• 1972

우리나라 고유식품(固有食品)의 일종(一種)인 청국장(淸國醬)의 질소화합물의 변화를 연구하기 위하여 필자(筆者)가 분리동정한 2가지 청국장(淸國醬)메주발효균(醱酵菌)(K-27, S-16)과 보존 납두균(納頭菌)으로 청국장(淸國醬)메주를 발효(醱酵)시키면서 경시적(經時的)으로 채취(採取)한 시료(試料)에 대(對)하여 총질소(總窒素), pH, 단백질(蛋白質) 분리효소역가(分解酵素力價), 불용성단백태질소(不溶性蛋白態窒素), 수용성단백태질소(水溶性蛋白態窒素), 펩타이드태질소(態窒素), 아미노태질소(態窒素), 암모니아태질소(態窒素), 및 각종유리(各種遊離)아미노산(酸) 등을 조사분석(調査分析)하는 동시에 cross linkage가 각각 다른 Dowex-50을 사용하여 분자식별(分子篩別)한 각(各) fraction에 대하여 total-N, amino-N을 측정하고 average peptide length를 계산하여 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1. 총질소(總窒素): 발효가 진행함에 따라 세가지의 시험구의 총질소가 다같이 약간(若干) 증가(增加)되었다. 2. 불용성단백태질소(不溶性蛋白態窒素): 불용성단백태질소(不溶性蛋白態窒素)는 증숙공정(蒸熟工程)에서 일단현저(一旦顯著)하게 증가(增加)되었다가 3종시료(三種試料)가 다 같이 경시적(經時的)으로 감소(減少)되는 경향(傾向)이였으나 보존균주구에 비(比)하여 분리균주구(分離菌株區)의 감소(減少)가 더욱 심(甚)하며, 그중에서도 K-27 균주접종구(菌株接種區)가 특(特)히 현저(顯著)한 감소경향(減少傾向)을 보였다. 3. 가용성단백태질소(可溶性蛋白態窒素): 가용성단백태질소(可溶性蛋白態窒素)는 증숙공정(蒸熟工程)에서 일단(一但) 대폭(大幅) 감소(減少)되었다가 기후(其後)부터는 세가지 청국장(淸國醬)메주가 다 같이 약간(若干)씩 감소(減少)되는 경향(傾向)이었으나 그 중에시 K-27 균주구(菌株區讀)의 감소율(減少率)이 컸다. 4. Peptide 태(態), 아미노태(態) 및 암모니아태질소(態窒素)는 증가(增加)되고 아미노태질소(態窒素)는 약간(若干)씩 감소(減少)되었다가 발효과정(醱酵過程)에서 세가지구(區)가 모두 계속(繼續)하여 현저하게 증가하였다. 기중(其中) 펩타이드태질소(態窒素)만은 각구(各區)에 따라 각각 다른 일정시간(一定時間)에 최고치(最高値)를 이루었다가 그후 점차 감소되었다. 그리고 세가지 시험구중 특히 K-27 균주접종구의 질소화합물변화가 다른 것에 비하여 현저하게 컸다. 5. pH와 Protease activity: 세가지 시험구(試驗區)의 PH 변화(變化)는 증숙대두(蒸熟大豆)의 6.65에서 계속상승(繼續上昇)하여 73시간(時間) 발효시(醱酵時)에는 $7.5{\sim}7.85$까지 이르렸으며 Protease activity는 발효(醱酵)가 진행(進行)됨에 따라 현저(顯著)하게 높아졌다가 pH가 7.3 내외(內外)가 되는 $48{\sim}60$ 시간발효(時間醱酵)를 한계점(限界點)으로 하여 점차감소(漸次減少)되었다. 6. 유리(遊離)아미노산(酸): 유리(遊離)아미노산(酸)은 발효(醱酵)가 진행(進行)됨에 따라 세가지 시험구(試驗區)가 다같이 수십배(數拾倍) 내지 수백배(數百倍)로 현저(顯著)하게 증가(增加)되었으며 그후 K-27균주구(菌株區)의 유리(遊離)아미노산(酸)의 증가(增加)가 훨씬 높았다. 7. 분자사별(分子篩別) fraction의 총질소(總窒素), 아미노태질소(態窒素) 및 APL: K-27 균주구(菌株區)의 시료(試料)를 분자사별(分子篩別)하여 얻은 각(各) fraction의 총질소(總窒素)와 아미노태질소(態窒素)는 발효(醱酵)가 진행(進行)함에 따라 X-16, X-12 및 X-8 fraction은 대체적(大體的)으로 증가(增加)되었으나 X-4, X-2 및 effluent fraction은 일정(一定)한 발효시간(醱騎時間)까지 증가(增加)되었다가 그후(後) 감소(減少)되었다. effluent를 제외(除外)한 전(全) fraction의 APL은 증숙대두(蒸熟大豆)에서 가장 크고 발효시간(醱騎時間)이 경과(經過)함에 따라 점차감소(漸次減少)되었다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제52권3호
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• pp.109-115
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• 2009

Xoo로 부터 aspartate aminotransferase로 추정되는 유전자를 분리한 다음 발현시켜 생화학 특성을 조사하였다. 분리된 유전자는 His6 pET-21(a) 운반체에 삽입시켰으며 E. coli BL21(DE3)에서 발현시켰다. 재조합된 Asp-AT는 affinity chromatography를 이용하여 분리하였으며 SDS-PAGE분석에서 43kDa의 단일 밴드를 나타내었다. 분리된 효소는 amino donor 로서 L-aspartate에 대하여 효소활성도가 가장 높았고, L-leucine 및 L-cysteine에 대하여서도 상당한 활성도를 나타내었다. 효소의 최적 pH는 약 7.5 근처에서 나타났고 효소의 안정성은 산성조건 보다는 알칼리 조건에서 훨씬 높았다. 최적 온도는 약 $35-40^{\circ}C$로 나타났고 $55^{\circ}C$에서 20분간 열처리한 이후의 잔여 활성도는 약 78%로 나타났다. 여러 중금속 중에서 망간 이온에 의해 효소활성이 촉진되었다.

• 대한바이러스학회지
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• 제28권3호
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• pp.215-224
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• 1998

Cloning, sequencing and expressing in E. coli of the thymidine kinase (TK) gene of Herpes simplex virus type-1 (HSV-1) strain F was investigated. The TK gene, located in the BamHI 3.74 kb DNA fragment of the plasmid pHLA-12, was amplified by polymerase chain reaction (PCR). The 1,131 kb PCR product was cloned into the BamHI and EcoRI sites of pBacPAK9 plasmid and then named pBac-TK recombinant. The TK gene was subcloned into the BamHI and BglII sites of pQE-30, and named pQE-TK recombinant. The nucleotide sequence of the 1,131 kb TK gene was determined, and the GC content was 65.13%. There were deduced 367 amino acid residues with a total molecular weight of 43 kDa. The weight was confirmed by the protein produced by E. coli M15/pQE-TK on the SDS-PAGE and Western blot. The production of the TK protein in the IPTG induced cells was measured over 4 h. At the end of 1, 2 and 3 h the level increased by 146, 204 and 242%, respectively. The amount of the protein at the highest fraction purified with Ni-NTA resin chromatography was $0.68\;{\mu}g$ per ml. The soluble state TK protein was present in the cytoplasm. In these results the F strain was different in base sequence and amino acid sequence from that of the CL101 strain, which caused difference in their strains.

• 한국균학회지
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• 제16권3호
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• pp.121-127
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• 1988

흰느타리버섯(Pleurotus cornucopiae(Per.) Rolland)중의 단백질을 선택적으로 분리정제하기 위하여 AH-Sepharose 4B를 출발 물질로 하여 benzoyl-AH-Sepharose 4B를 합성하여 친화성 크로마토그래피하였다. 1) AH-Sepharose 4B 중의 amino기의 capacity는 겔 Iml 당 $9.5{\mu}mol$ 이었으며 합성겔의 리간드인 benzoyl기의 capacity는 겔 1ml당 $9.3{\mu}mol4이었다. 2) 친화성이 있는 단백질의 총 겉보기 분자량은 255,000 돌톤 이었으며, 이는 29,500, 31,500, 34,000, 71,000 및 89,000돌톤 단백질의 복합체였다. 3) 친화성 단백질 중의 아미노산 함량은 비극성 아미노산이 45.68%, 극성 아미노산이 26.93%, 양성 아미노산이 11.81%, 그리고 음성 아미노산이15.58%였다. 4) 소수성 benzoyl기에 친화성이 있는 단백질은 비극성인 것이 선택적으로 분리되었다.

• 미생물학회지
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• 제33권1호
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• pp.1-6
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• 1997

5-Enolpyruvylshikimate 3-phosphate(EPSP) synthase는 방향족 아미노산을 생합성하는 shikimate phathway의 6번째 효소로 광범위 제초제인 glyphosate의 target enzyme이다. 본 연구에서는, glyphosate에 저해를 받지 않는 EPSP synthase를 개발하고자 하는 연구의 한 단계로서, 우선, EPSP synthase를 대량 발현시킬수 있는 expression vector인 pET-25b를 사용하여 발현시킨 다음, 발현된 효소가 periplasmic space로 transport되는지 또 발현된 단백질이 효소 활성을 가지고 있는지 확인하고자 하였다. 그 결과, pelB leader를 앞에 붙여 발현시킨 EPSP synthase는 periplasmic space로 제대로 transport되며, 단백질 생산 및 periplasmic space로의 수송은 induction 온도에 의해 크게 좌우된다는 것을 관찰하였다. Periplasmic space로 수송되는 EPSP synthase의 양은 $34^{\circ}C$에서 induction시켰을 때 가장 많은 것으로 나타났다. 한편, pET-25b를 이용하여 발현시킨 EPSP synthase는 C-terminal 부위에 HSV-tag, His-tag등 26개 아미노산이 더 있는 상태로 만들어지는데, His-tag은 $Ni^{2+}$-affinity chromatography를 통한 정제에, HSV-tag은 Western blotting을 통한 detection에 각각 이용할 수 있다. 또한, 이와 같이 발현된 recombinant EPSP synthase는 phosphocellulose resin에 결합하였다가 기질인 shikimate 3-phosphate와 phosphoenolpyruvate에 의해 elution되며, glyphosate에 의해 저해되는등 wildtype효소와 같은 효소 특성을 보였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제22권9호
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• pp.1218-1223
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• 2012

${\varepsilon}$-Poly-$_L$-lysine (${\varepsilon}$-PL), produced by Streptomyces or Kitasatospora strains, is a homo-poly-amino acid of $_L$-lysine, which is used as a safe food preservative. The present study investigates the combined use of cell immobilization and in situ adsorption (ISA) to produce ${\varepsilon}$-PL in shaken flasks. Loofah sponge-immobilized Streptomyces ahygroscopicus GIM8 produced slightly more ${\varepsilon}$-PL than those immobilized on synthetic sponge, and sugarcane bagasse. Moreover, loofah sponge supported the maximum biomass. Hence, loofah sponge was chosen for cell immobilization. Meanwhile, the ion-exchange resin D152 was employed for ISA. The loofah sponge-immobilized cells produced $0.54{\pm}0.1g/l$ ${\varepsilon}$-PL, which significantly increased to $3.64{\pm}0.32g/l$ after combining with ISA through the addition of resin bags. The free cells with ISA using the dispersed resin yielded $2.73{\pm}0.26g/l$ of ${\varepsilon}$-PL, an increase from $0.82{\pm}0.08g/l$. These data illustrate that the proposed combination method improved production most significantly compared with either immobilization or ISA only. Moreover, the immobilized cells could be repeatedly used and an ${\varepsilon}$-PL total amount of $8.05{\pm}0.84g/l$ was obtained. The proposed combination method offers promising perspectives for ${\varepsilon}$-PL production.

• 생약학회지
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• 제21권2호
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• pp.130-136
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• 1990

Four known cardiotonic steroids were isolated from roots of Adonis amurensis Regel et Radde and identified as digitoxigenin, cymarin, K-strophanthin and convallatoxin by chromatography on Amberlite XAD-2 resin and silica gel, high performance liquid chromatography and gel chromatography on Sephadex LH-20. In order to clarify the structure-activity relationship, thirteen related compounds of digitoxigenin were tested for the inhibitory activities for $Na^+,\;K^+$-adenosine triphosphatase from guinea pig heart. The inhibitory activities of related compounds of digitoxigenin were dependent upon the dicarboxylic acid and amino acid components. The compound having both the arginine and suberic acid moiety showed the higher inhibitory activity. The sulfate and glucuronide of digitoxigenin exhibited much less potency than the parent genin.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제17권1호
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• pp.137-141
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• 2008

We previously isolated and cloned a cDNA of abaecin from the Bombus ignitus. In an effort to produce a large amount of soluble abaecin at low cost, we successfully expressed the peptide in Escherichia coli that are highly sensitive to its mature form. For this, we fused the peptide encoding 39 amino acids of mature B. ignitus abaecin to the thioredoxin gene together with a C-terminal 6xHis tag. An enterokinase cleavage site was introduced between the 6xHis tag and mature abaecin to allow final release of the recombinant peptide. A high yield of 9.6 mg soluble fusion protein from 200 ml of bacterial culture was purified by $Ni^{2+}$-charged His-Bind resin affinity column, and 1.4 mg of pure active recombinant abaecin was readily obtained by enterokinase cleavage, followed by affinity chromatograph. The molecular mass of recombinant abaecin peptide was determined by Tricin-SDS-PAGE analysis. The recombinant abaecin exhibited antibacterial activity against Gram-negative bacteria.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제24권5호
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• pp.719-723
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• 2014

Caspases are a family of cysteine proteases that play an important role in the apoptotic pathway. Caspase-6 is an apoptosis effector that cleaves a variety of cellular substrates. The active form of the enzyme is required for use in research. However, it has been difficult to obtain sufficient quantities of active caspase-6 from Escherichia coli. In the present study, we constructed a caspase-6 with a 23-amino-acid deletion in the pro-domain. This engineered enzyme was expressed as a soluble protein in E. coli and was purified using affinity resin. In vitro enzyme assay and cleavage analysis revealed that the engineered active caspase-6 protein had characteristics similar to those of wild-type caspase-6. This novel method can be a valuable tool for obtaining active caspase-6 that can be used for screening caspase-6-specific substrates, which in turn can be used to elucidate the function of caspase-6 in apoptosis.

• 자원리싸이클링
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• 제2권4호
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• pp.27-32
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• 1993

제강더스트 중에 미량으로 함유되어 있는 갈륨을 분리 회수하는 프로세스를 연구하였다. 2.25mol/l-$H_2SO_4$ 침출에의하여 38mg/l의 갈륨을 함유하는 수용액을 얻었다. 이 침출액 중에서 1000배 량의 철과 아연이 함유되어 있다. 침출액 중의 갈륨은 철(III)이온을 철(II)이온으로 환원하고, pH 조정한 후, 아미노카르본산형 관능기를 가진 킬레이트 수지를 이용하여 흡착 농축하였다. 1.5mol/l-$H_2SO_4$에 의한 용리액을 칼럼에 재공급하고 재농축하여, 3.0mol/l-HCl을 이용하여 용리하였다. 용리액 중의 갈륨은 13g/l의 농도를 나타내었다. 갈륨의 정제는 용매추출법에 의하여 정제하였다. 추출제로는 TOMAC(tri-n-octhylmethylammonium chloride)을 사용하여 순수한 갈륨 정제액을 얻었다.