Sex-sorting of sperm is an assisted reproductive technology (ART) used by the livestock industry for the mass production of animals of a desired sex. The standard method for sorting sperm is the detection of DNA content differences between X and Y chromosome-bearing sperm by flow cytometry. However, this method has variable efficiency and therefore requires verification by a second method. We have developed a sex determination method based on quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) of the porcine amelogenin (AMEL) gene. The AMEL gene is present on both the X and the Y chromosome, but the length and sequence of its noncoding regions differ between the X and Y chromosomes. By measuring the threshold cycle (Ct) of qPCR, we were able to calculate the relative frequency of X chromosome. Two sets of AMEL primers were used in these studies. One set (AME) targeted AMEL gene sequences present in both X and Y chromosome, but produced PCR products of different lengths for each chromosome. The other set (AXR) bound to AMEL gene sequences present on the X chromosome but absent esholthe Y-chromosome. Relative product levels were calculated by normalizing the AXR fluorescence to the AME fluorescence. The AMEL method accurately predicted the sex ratios of boar sperm, demonstrating that it has potential value as a sex determination method.
치아의 자가이식 시 실패의 가장 큰 요인으로는 치주인대의 괴사를 유발하는 외상을 들 수 있으며, 이러한 외상은 치근흡수와 유착을 일으킬 수 있다. 따라서 자가이식의 성공을 위해서는 이식치아를 외상없이 제거하는 것이 중요하고, 매복치아의 자가이식 시에 발생되는 광범위한 조직 결손에서 치주조직의 재생과 주위조직의 재건 또한 필요하다. 치주조직 재생을 도울 수 있는 재료 중 최근에 소개된 Enamel matrix derivative (EMD)는 amelogenin계열의 법랑기질단백을 포함하고 있으며 여러 연구에서 치주질환 치료에 매우 효과적이라고 보고되었고 치주인대 세포의 분화를 증진시키므로, 치아자가이식에 유용하게 사용될 수 있음이 제시되어왔다. 본 증례에서는 상악 우측 제 2소구치의 미맹출을 주소로 내원한 14세의 여환아에서 역위 매복된 미성숙 치아에 EMD를 적용하여 자가이식을 시행하고 관찰한 결과 치근 흡수나 유착의 소견이 관찰되지 않았고 향상된 조직재생의 소견을 보였다.
The deoxyribonucleic acid(DNA) was isolated from the pulp, dentin and enamel of the 4 fresh teeth and the 7 teeth left in room temperature for 10 years. Then it was examed to find out the usefulness for forensic dental medicine. Samples of the tooth-derived DNA amplified by polymerase chain reaction(PCR), electrophosed for sex determination by detection of X-Y homologous amelogenin gene and D1S80 locus detection. The following results have been achieved. DNA extraction was possible in pulp and dentin of the fresh teeth, so it could be applicatable to detection of X-Y homologous amelogenin gene for sex determination, amplification of D1S80 locus by PCR. Sex determination was possible in pulp and dentin of the teeth left at room temperature for 10 years. Also, possible the detection fo AMP-FLPs to increase PCR cycling up to 40. DNA was isolated from all pulp of the fresh teeth and the teeth left in room temperature for 10 years, and also isolated from the dentin of the fresh teeth, partially isolated(3/7) from the dentin of the teeth left in room temperature for 10 years, but DNA was not isolated from enamel. From the above investigation, DNA extraction, sex determination, amplification of D1S80 locus were successfully accomplished even though the teeth were left for 10 years at room temperature. Therefore, teeth, especially pulp, are highly reliable and applicable as molecular biological samples for individual identification.
본 연구는 충청남도 아산시 탕정면 명암리 유적 9지점에서 발굴조사 된 고려 말에서 조선시대 초기 분묘 출토 인골 27개체를 대상으로 고유전학적 연구를 수행한 결과를 보고한 것이다. 실리카 추출 방법에 의하여 출토 인골로 부터 DNA를 추출한 후, 미토콘드리아 DNA(mtDNA)의 과변이지역을 9지역으로 나누어 PCR법에 의해 부분 증폭을 실시하였다. 증폭산물에 대한 염기서열 분석을 통하여 과변이지역의 변이형을 동정하였다. 그 결과 18개체의 mtDNA 분석이 가능하였으며, 아멜로제닌 유전자 분석에 의한 성결정은 M-26, M-29, M-37(L), M-49(R)의 4개체만이 분석되었고 모두 여성인 것으로 확인되었다.
치아 발생 동안 법랑질모세포에서의 Dynamin II 단백질 발현 강도는 출생 후 1일째 생쥐에 비해 출생 후 3일째와 출생 후 5일째 생쥐에서 각각 48%와 50%로 유의성 있게 증가하였으나, 출생 후 7일째와 출생 후 10일째 생쥐에서는 출생후 1일째의 생쥐에 비해 각각 16%와 12%로 유의성 있게 감소하였다. 이 결과로부터 Dynamin II가 분비법랑질모세포에서 형성되는 법랑기질 단백질인 amelogenin, ameloblastin, enamelin과 MMP-20 등과의 분비과립 수송에 연관됨이 보여졌다. Dynamin II는 치아 발생과정 중 발현되는 다양한 법랑기질을 구성하는 단백질을 포함하는 분비소포 형성을 촉진함으로써 과립의 수송에 관여할 것이라 생각되며 법랑질모세포에서의 법랑기질 단백질의 분비조절 가능성이 있음이 보여졌다. 따라서 Dynamin II를 통한 치주질환을 위한 유전자 치료와 법랑질 혹은 상아질의 유실 부분의 재생산의 자극과 촉진에도 임상적으로 사용될 수 있는 가능성이 있음이 보여졌다.
We performed nuclear DNA typing and mitochondrial DNA sequencing analysis based on PCR from an ancient Korean remainsexcavated from Siheung in Korea. 7 bones were collected and partially STR(short tandem repeat) systems, Sex determination Amelogenin kit(Promega co, USA), were used in this study. Mitochondrial DNAs were also amplified and sequenced by ABI 310 DNA sequencer. We know that sample no. 2 and no. 3 were females and also sample no. 2 and no.7 possessed the same maternal inheritance by mitochondrial DNA sequencing results. Throughout this research, the mitochondrial DNA sequencing of human in the middle of Joseon Dynasty in Korea is obtained. In addition, this finding will be an important foundation for the future research.
The ancient biomolecular remains are the potential source for paleobiology and paleoanthropology. Especially, ancient human specimens such as bone, teeth, and hair are powerful materials to identify historical origin and migration of ancestor population from the past. However, most excavated human specimens in archaeological sites have commonly problems as natural damage and exogenous contamination. We carried out histological and molecular analyses of excavated bone from the historic sites in South Korea from the recently discovered in tumulus of Seochun and Naju. Biological deterioration of bone was observed anatomically by optical and scanning electron microscope (SEM). We extracted degraded DNA, and amplified hyper variable region (HVR) of mitochondrial DNA (mtDNA) and amelogenin of nucleus DNA. This study applied and examined the relationships between histological preservation and DNA survival in excavated bone.
본 연구는 충청남도 서천군 옥남리 일대(갓재골, 우아실) 조선시대 회곽묘에서 출토된 4개체의 인골을 대상으로 조직학, 분자유전학, 골화학 분석 등 종합적인 생화학적 연구를 수행한 결과이다. 실체현미경과 주사전자현미경 분석에 의한 대퇴골의 조직학적 보존 상태는 매우 양호 하였으며, 생화학적 분석이 가능한 것으로 평가되었다. 아밀로제닌 유전자 분석과 미토콘드리아 DNA에 대한 피장자들의 모계 계통형 분석 결과 여성 1명은 B4a에 속하는 것으로 밝혀졌으며, 다른 여성 1명과 남성 2명의 피장자는 하플로그룹 D4b1으로 나타났는데 이들 3명은 가까운 모계 혈연관계 가능성이 있는 것으로 추정되었다. 갓재골에 합장된 두 피장자는 전통적인 매장방식으로 볼 때 부부합장묘인 것으로 추정되었다. 콜라겐의 탄소-질소 안정동위원소 분석 결과 피장자들은 주식으로 쌀, 보리, 콩 등의 $C_3$ 식물을 섭취했던 것으로 나타났다. 본 연구를 통하여 조선시대 회곽묘를 조성할 수 있었던 경제적 계층의 유전학적 특징, 관습적인 매장방식, 식생활 정보를 규명하였다. 이러한 결과는 조선시대 출토 인골에 대한 생화학적 연구의 잠재적인 가치와 중요성에 대해 시사하고 있다.
DNA typing is often used to determine identity from human remains. Recently, the molecular biological analysis of ancient deposits has become possible since methods for the recovery of DNA conserved in bones or teeth from archaeological remains have been developed. In the field of archaeology, one of the most promising approaches is to identify the individuals present in a mass burial site. We performed nuclear DNA typing and mitochondrial DNA sequencing analysis based on PCR from a Korea ancient human remain excavated from Sa-chon Nuk-island and civilian access controlline(CACL). A femur bone were collected and successfully subjected to DNA extraction, quantification, PCR amplification, and subsequently typed for several shot tandem repeat(STR)loci. 4 types of STR systems used in this study were CTT multiplex(CSF1PO, TPOX, TH01), FFv multiplex(F13A01, FESFPS, vWA), Silver STRⅢ multiplex(D16S539, D7S820, D13S317), and amelogenin for sex determination. This studies are primarily concerned with the extraction, amplification, and DNA typing of ancient human bone DNA samples. Also, it is suggestive of importance about closely relationship between both fields of archaeology and molecular biology.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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