• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권2호
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• pp.160-164
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• 1989

알카리성 Bacillus sp. AL-8의 알카리성 amylase 유전자를 포함하는 5.7Kb의 EcoRI 단편을 pUB 110을 vector로 하여 amylase를 생산하지 못하는 B. subtilis sta-1에서 발현시켰다. 재조합 plasmid pMB802와 pMB809는 숙주세포인 B. subtilis에서 매우 안정하게 유지되었으며 amylase 생산이 공여균 주에서 보다 1.8배 증가하였다. 형질전환주에서 생산된 amylase는 공여균주와 같은 효소적 성질을 나타내었다. 5.7Kb 단편을 E. coli에 subcloning한 결과 3.7Kb의 EcoRI 단편에 알카리성 amylase 유전자가 존재하였다.

• 미생물학회지
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• 제31권2호
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• pp.175-178
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• 1993

Alkaline .alpha.-amylase expressed in the transformant, Baciollus subtills MB809, containing alkaline amylase gene cloned from alkalophilic Bacillus sp. AL-8, was purified through for step separation processes. The purified alkaline .alpha.-amylase had molecular weight of app[roximately 59, 000 daltons on SDS-PAGE and Sephaex G-100 gel filtration. Amino acid sequence of terminal portion of the enzyme was analyzed with pure amylase eluted form the SDS-PAGE gel. N-terminal amino acid sequence of .alpha.-amylase was determined by the Edman degradation method and resulted in $NH_{2}$-ser-thr-ala-pro-ser-(ile)-lys-ala-gly-thr-(ile)-leu. For C-terminal amino acid sequencing, purified .alpha.-amylase was digested with carboxypuptidase A and B, and reverse-phase HPLC gradient elution system resulted in -thr-trp-pro-lys-COOH.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제15권6호
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• pp.441-445
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• 1987

알카리성 amylase를 내는 Bacillus sp. AL-8의 알카리성 amylase 유전자를 amylase를 생성하지 않는 Escherichia coli HB101에 pBR322를 vector로 하여 형질전환하였다. E. coli도 알카리성 amylase를 생성하여 5$0^{\circ}C$에서 최적 활성온도를 가지며 5$0^{\circ}C$까지 열안정성을 갖고, pH10에서 최적 활성 pH를 나타내는 동시에 pH8-10에서 안정하였다. 알카리성 amylase 유전자가 E. coli에 형질전환되어 donor 세포와 같은 효소 성질을 갖고 있으며 pBR322로 삽입된 유전자는 pJW8에서 5.8kb이며 pJW200에서는 3.0kb로 E. coli에서 안정하게 발현되었다.

• 한국양식학회지
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• 제18권4호
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• pp.245-251
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• 2005

본 연구는 rotifer, B. rotundiformis를 대상으로 소화효소 실험을 하기 위해 이들이 가지고 있는 소화효소의 최고 활성 조건을 확인하기 위해 수행하였다. rotifer, B. rotundiformis의 $\alpha$-amylase, total alkaline Protease, trypsin 및 TG-lipase는 Tris-HCl buffer 보다 phosphate-NaOH buffer 안정적인 효소활성을 보였다. $\alpha$-amylase, trypsin 및 TG-lipase는 pH 8.0에서, total alkaline proteaset pH 7.0에서 높은 효소 활성을 나타내었다. $\alpha$-amylase 활성은 $40^{\circ}C$에서 가장 높은 활성을 보였으며, total alkaline pretense와 trypsin은 $55{\~}60^{\circ}C$의 온도에서 높은 활성을 나타내었다. 반면 TG-lipase 활성은 $25{\~}30^{\circ}C$의 낮은 온도에서 활성이 높았다. $\alpha$-amylase, total alkaline pretense, trypsin 및 TG-lipase의 활성의 적정 기질 농도는 $3.5\%$ starch, $\0.6%$ azo-casein, $87.5{\mu}M$ BApNA and 81.2 mM olive oil이었다. $\alpha$-amylase, total alkaline protease, trypsin 및 TG-lipase의 활성의 적정 반응시간은 40, 60, 30 and 25 min으로 나타났다. 본 연구 결과에서 얻어진 자료는 rotifer, B. rotundiformis의 소화효소 연구를 위한 기초 자료로 이용될 것이다.

• 환경위생공학
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• 제23권1호
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• pp.25-31
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• 2008

A bacterial strain, Bacillus megaterium L-49 has been isolated and identified that produces alkaline ${\alpha}$-amylase. The cell is ellipsoidal, about $1.0-1.2{\times}3.0-3.6{\mu}m$ in diameter, Gram-positive, motile, and central partial central. Growth occurs in media containing 7% of NaCl. This strain could utilize D-glucose, lactose, xylose, sucrose, mannose, and maltose, and but it does not utilize D-fructose, and glycogen. Among the various concentrations of saturated ammonium sulfate, the retractation ratio in range of 70 to 100% was about 93%. However, in the case of acetone, it was about 98.7%. EDTA has activating effect and Ca2+ has no effect on alkaline ${\alpha}$-amylase activity. The alkaline ${\alpha}$-amylase has low thermal stability. The optimal temperature for reaction is $50^{\circ}C$. The alkaline ${\alpha}$-amylase activity maintained stabilizing at pH 6-11 and the optimal pH for reaction was 9-10.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제6권1호
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• pp.9-16
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• 1978

인삼액기스의 첨가량을 달리한 배지에 시간별로 국균의 첨가력($\alpha$-amylase, $\beta$-amylase, protease)에 미치는 영향을 조사한 결과는 다음과 같다. 1) Asp. oryzae의 $\alpha$-amylase 활성도는 48시간 배양까지는 대조구보다 다소 높았으나 그 이후는 같은 경향을 나타내었고, Asp. oryzae의 $\beta$-amylase 활성도는 배양 24시간에서 인삼엑기스, 첨가량순으로 촉진되어 1%구까지 증가하고 3~5%구는 그 활성이 첨가량 순으로 감소되었다. Asp. oryzae의 protease 활성도에서 acid protease는 배양 72시간까지 대조구보다 활성이 높았고, 그중 3.0%구의 48시간때가 가장 역가가 높았으며 120시간 배양에서는 인삼엑기스 3.0% 이상이 효소활성의 감소가 컸다. Alkaline protease는 대조구보다 객처리구의 역가가 떨어졌다. 그러나 alkaline protease는 aeid protease보다 활성도가 높았다. 2)Asp. niger의 $\alpha$-amylase 활성도는 인삼엑기스 첨가량 순으로 높아지고 그 활성이 급증가하였다가 급감소되는 경향을 보였고, Asp. niger의 $\beta$-amylase 활성도는 인삼엑기스, 첨가량에 따라 활성이 높아졌으며 0.5~3.0% 첨가시에는 대조구 및 5.0%보다 활성이 빨고 높게 나타났으며 5.0구는 그 활성이 억제되었다. Asp. niger의 protease 활성도는 acid protease가 alkaline protease보다 효소역가가 현저하게 높았다. acid protease는 배양 48시간까지는 인삼엑기스의 첨가량에 따라 효소역가가 조해되었으나 72시간에서는 인삼엑기스 첨가량 순으로 역가가 높았고, 단 5.0%구만 현저하게 효소력이 감소되었다. Alkaline protease는 배양 24시간에서 48시간까지는 0.1%구와 0.5%구가 대조구보다 효소력이 높았고 그 이상의 인삼엑기스가 첨가된 처리구보다 효소력이 낮았다. 그러나 48시간 이후부터는 효소력은 인삼엑기스 첨가량 순으로 감소를 나타내었다.

• KSBB Journal
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• 제13권5호
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• pp.621-625
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• 1998

The raw starch hydrolysis by amylase prepared from alkaline-tolerant Bacillus sp. were investigated. Degree of hydrolysis(%) of 5%(w/v) raw rice, corn and potato starch by this enzyme were about 40, 25 and 20%, respectively. The hydrolysis action on raw starch by change of blue value was similar to the action pattern of exo ${\beta}$-amylase. The hydrolysis products of rice starch were mainly glucose and maltose. Oligosaccarides were also detected. From the above results, this enzyme was considered as exo type ${\alpha}$-amylase. This enzyme activity on the raw starch and the gelatinized starch were 28.40 and 86.60 IU/mg protein, respectively, and the ratio of raw starch-digesting activity to gelatinized starch-digesting activity (raw starch digestivity) was about 32%. The Km values for the raw and the gelatinized starch were 4.22 and 3.0mg/mL, respectively, and the VmaX values were 0.20 and 0.31mg/mL/min, respectively.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제13권4호
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• pp.403-408
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• 1985

Rhizopus oryzae를 액체배양하는 동안, $\alpha$-amylase, acid phosphatase 그리고 alkaline phosphatase와 같은 분비효소의 분비능에 대한 계면활성 제의 촉진효과를 조사하였다. 그 결과 집락의 형태적인 변화를 볼 수 있었는바, 0.18mM SDS 처리구에서는 작은 pelletal형, 0. 48mM DOC 처리구에서는 pulpy형, 계면활성제를 처리하지 않은 시험구에서는 사상형의 집 락을 나타내었다. SDS를 첨가함으로써 $\alpha$-amylase는 9배, acid phosphatase는 25배의 활성도 증가가 유도되었다. DOC첨가 시험구에서 alkaline phosphatase 활성도는 배양액에서 11배 증가가 나타났을 뿐 아니라 세포질에서도 역시 상승하였다.

• 한국균학회지
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• 제25권2호통권81호
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• pp.85-90
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• 1997

표고버섯(Lentinula edodes)의 동위효소 양상을 표고 연구의 기초 연구의 일환으로 실시하였다. 균사체의 Tris-HCl 완충액에 용해되는 세포내 효소를 nondenaturing polyacrylamide gel 전기영동 법으로 분리후, peroxidase, esterase, superoxide dismutase, acid phosphatase, alkaline phosphatase, alcohol dehydrogenase, ${\alpha}-amylase$ 효소 활성을 측정하였다. 표고는 peroxidase, esterase, superoxide dismutase, acid phosphatase 활성이 검출되었으며, 본 연구에서 사용한 방법으로 alkaline phosphatase, alcohol dehydrogenase, ${\alpha}-amylase$ 효소 활성은 검출되지 않았다. 표고버섯의 peroxidase, esterase band는 배양 기간에 따라 큰 차이가 없이 안정하였으며, 동위효소는 표고의 유전적 연구 및 원형질체 융합 후 융합체의 특성 연구에 중요하다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제2권3호
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• pp.166-173
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• 1992

The expression of Bacillus subtilis $\alpha$-amylase from the phoA-amyE fusion gene in recombinant E. coli was investigated under various environmental conditions. The overexpression of cloned $\alpha$-amylase caused retardations in cell growth and synthesis of alkaline phosphatase (AP) from the chromosomal phoA gene. The change of culture temperature from $37^\circ{C}$ to $30^\circ{C}$ increased the specific activities of both $\alpha$-amylase and $\beta$-lactamase by six and two times, respectively, whereas the AP activity remained unchanged. The experiments with chlorampenicol (a translation inhibitor) suggested the enhancement of $\alpha$-amylase activity at $30^\circ{C}$, and this was partly due to the stability of $\alpha$-amylase itself. The further decrease of the temperature to $25^\circ{C}$ slowed down both the cell growth and cloned-gene expression rate. The $\alpha$-amylase activity showed a maximum at pH of 7.4 while alkaline phosphatase was most effectively produced at pH of 8.3.