A total of 455 food samples representing 22 different food types were collected from several localities at Alexandria province in Egypt. Aflatoxin B1 and aflatoxin M1 were detected in 5 out of 455 (1.1%) of these food samples. From the same samples 206 fungal isolates were obtained. Thirty two of these isolates (15.5%) were found to be aflatoxin producers. Aspergillus flavus was the dominant isolate, while Aspergillus parasaticus was also isolated from a few other food samples. Among locally consumed foodstuffs. Peanut (7.5%) and Milk powder (6.6%) were found to be a suitable substrates for aflatoxin production. The hygienic and public health significance of the isolated aflatoxigenic strains were discussed.
In this study, the levels of aflatoxin $M_1$ ($AFM_1$) in milk were determined by HPLC with derivatization method. Milk samples were purified using $C_{18}$ disposable cartridge followed by derivatization with trifluoroacetic acid and analysed using HPLC with fluorescence detection. The recoveries of AFM1 from milk samples added $AFM_1$ at a level of 0.025~0.1 ng/ml were 94.7~98.0% with detection limit of 0.009 ng/ml. The amounts of $AFM_1$ were determined below 0.05 ng/ml for all tested samples of commercial milk collected in 1999 and 2000.
자외부흡광 스펙트럼의 변화와 티 비 에이(TBA) 반응으로 살필 때, 수용액의 송에서의 말론알데하이드(malonaldehyde)는 과장 $260m/{\mu}$ 부근의 자외선조명에 의하여 광화학적 변화를 받는다. 이 용액에 아프라톡신(aflatoxin) 을 가하면 파장 $360m/{\mu}$ 부근의 광선에 의해서 이와 같은 변화가 재빨리 일어나며, 또 보통 형광등을 이용한 실험실의 조명에 의해서도 비록 그 변화는 느려지지만 마찬가지로 일어난다. 이과 같은 변화는 비가역적이며, 이 반응에서 아프라톡신은 다만 감광제로서의 역할을 한다. 또 이 반응의 기작은 말론알데하이드 분자의 평행적 이중결합체 형성에 의한 것 같다.
Aflatoxin B1 (AFB1) has been reported to directly suppress the immune responses. In the present study, the effect of AFB1 on immune functions was investigated. Splenic lymphocytes were treated with various doses of the mitogens (lipopolysaccharide, concanavalin A) in the presence of AFB1. AFB1 pretretment decreased the number of plaque forming cells (PFC) in a dose-dependent manner. Antibody production of IgM and IgG class was significantly decreased in AFB1-treated splenic cells. In addition, when animals were exposed to AFB1, the susceptibility of bacterial infection as well as the growth of tumor cells was increased. These data suggest that AFB1 affected the immune function and humoral immunity impaired by AFB1 treatment contributed to pathological process.
우유 중에 존재할 수 있는 발암성 진균독소의 하나인 $aflatoxin{\;}M_1{\;}(AFM_1)$을 신속, 간편하게 분석할 수 있는 효소면역측정법(ELISA)을 개발하고자 하였다. 소혈청알부민에 공유결합한 $AFM_1\;(AFM_1-BSA)$을 토끼에 면역하여 항체를 생산하고 정제하였다. 이 항체의 유사독소와의 교차반응율은 29.9%이하의 비교적 낮은 교차율을 나타냈다. $AFM_1$의 검출을 위하여 확립한 직접경합ELISA (cdELISA)로 우유에 인위적으로 오염시킨 $AFM_1$을 정제과정없이 ELISA로 분석하는 경우, 우유를 PBS로 40%되게(2:3) 희석하였을 때 양호한 회수율을 보였다. 이 조건하에서 행한 ELISA의 $AFM_1$분석 회수율은 0.3-3.0 ng/ml의 오염농도 범위에서 농도별 회수율로 평균 113%, 그 분산은 8.2%였다. 본 연구에서 개발한 ELISA system은 우유 중의 0.5 ppb이상의 $AFM_1$을 정제과정없이 손쉽게 분석하는데 유용할 것으로 판단된다.
Cytochrome P450 (CYP) 3A4 metabolizes aflatoxin B1 (AFB1) to AFB1-exo-8,9-epoxide (8,9-epoxidation) and aflatoxin Q1 (AFQ1; 3$\alpha$-hydroxylation) simultaneously. We investigated whether each metabolite was formed via its own binding site of CAP3A4 active site. Kinetics of the formation of the two metabolites were sigmoidal and consistent with the kinetics of substrate activation. The HIll model predicted that two substrate binding wites are involved in the oxidationof AFB1 by CYP3A4. Dehydronifedipine, a metabolite of nifedipine generated by CYP3A4, inhibited the formation of AFQ1 without any inhibition in the formation of AFB1-exo-8,9-epoxidation. Dehydronifedipine was found to act as a reversible competitive inhibitor against 3$\alpha$-hydroxylation of AFB1. Vmax and S0.5 of the 8,9-epoxidation were not changed in the presence of 0, 50, or 100 $\mu\textrm{M}$ dehydronifedipine. S0.5 of 3$\alpha$-hydroxylation was increased from 58$\pm$4 $\mu\textrm{M}$ to 111$\pm$8 $\mu\textrm{M}$ in the presence of 100 $\mu\textrm{M}$ nifedipine whereas Vmax was not changed. These results suggest that there exist two independent binding sites in the active site of CAP3A4 . One binding site is responsible for AFB1-exo-8,9-epoxidation and the other is involved in 3$\alpha$-hydroxylation of AFB1. Dehydronifedipine might selectively bind to the site which is responsible for the formation of AFQ1 in the active site of CYP3A4.
Aflatoxin의 각종 액성에 대한 변화와 위액, 담즙산, 각종 산과 알칼리 및 식염 농도에 따른 열처리시의 그 안정성 및 변화 양상을 관찰하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1) Aflatoxin은 액성의 pH가 산성에서보다 알칼리성에서 더욱 감소하였다. 한편 $100^{\circ}C$에서 30분 열처리한 것은 $37^{\circ}C$에서 30분 처리한 것보다 더욱 aflatoxin이 감소하였다. 2) Aflatoxin에 대한 초산(醋酸), 염산, 황산을 각기 1%, 5% 및 10% 액으로 $20^{\circ}C$ 30분 처리할 때에, 초산은 $40{\sim}50%$, 염산은 $48{\sim}73%$ 및 황산은 $68{\sim}84%$의 감소율을 나타내었다. 한편, 수산화나트륨 및 암모니아의 1%, 5% 및 10%액으로 처리하면 완전히 aflatoxin이 파괴되었다. 3) 인공위액에 대한 aflatoxin은 $37^{\circ}C$ 60분에 약 75%의 감소를 나타내었으며 담즙산에 대하여는 대부분 파괴되었다. 이때 파괴된 물질은 TLC 상에서 Rf치가 0.96이었으며 $220{\sim}420m{\mu}$ 까지의 UV spectrum에서 최대 흡수 파장대는 관찰할 수 없었다. 4) Aflatoxin에 식염을 가하여 $100^{\circ}C$ 30분 열처리하면 그 $39{\sim}55%$의 aflatoxin이 감소되는 것을 관찰할 수 있었고, 식염의 농도에 따라 그 변성도의 차는 발견할 수 없었다.
본 연구는 aflatoxin $B_1(AFB_1)$에 의하여 유발된 마우스 간세포에서의 $AFB_1-DNA$ 부가체 형성과 세포의 산화적 손상에 대한 항산화 비타민의 효과를 조사하기 위하여 수행되었다. 먼저, 비타민 C와 비타민 E를 6 주령 수컷 ICR 마우스에 10mg/kg, 63.8mg/kg의 농도로 복강내에 각각 주사(i.p.; intraperitoneal injection) 하였고, $AFB_1$과 비타민 혼합 투여군은 비타민을 주사한 후 1시간이 경과한 다음 0.4mg/kg의 $AFB_1$을 투여하였다. 투여 횟수는 2일 간격으로 동일한 방법에 의해 4회 반복 투여하였다. 반면, $AFB_1$ 단독 투여군은 위와 같은 방법으로 비타민 없이 $AFB_1$만 투여하였다. ELISA에 의한 마우스 혈청내 $AFB_1$의 잔여 농도는 $AFB_1$ 단독 투여군에서 12.28, 18.78 ng/mL이 검출되었다. 그러나 항산화비타민 C 혼합 투여군에서는 7.60 ng/mL, 항산화 비타민 E 혼합 투여군에서는 4.85 ng/mL이 각각 검출되었다. 마우스의간에서 분석된 $AFB_1-DNA$ 부가체 농도에 의하면, $AFB_1$ 단독 투여군에서는 23.78, 25.48 ng/mL이었으며, 항산화 비타민 C 혼합 투여된 군에서는 5.26 ng/mL, 항산화 비타민 E 혼합투여군에서 7.81 ng/mL로 각각 조사되었다. 이들 결과에 대한 통계적 유의성은 p<0.01이었다. 또한 면역조직화학적 관찰에서 $AFB_1$ 단독 투여군에서는 중심정맥과 동양혈관 주변에 갈색의 침전이 두드러지게 나타났으며 이러한 현상은 항산화비타민 혼합 투여군에서 유의하게 감소한 것으로 나타났다.
A procedure for the determination of Aflatoxins in food and grains which utilizes reversed phased liquid chromatographic (LC) analysis with postcolumn derivatization by an electrochemical cell and determination with a fluorescence detector has been evaluated. The LC mobile phase was water-acetonitrile-methanol (6+2+2) with 1mM KBr and 1 mM HNO3 which gave baseline separation for the four Aflatoxins (AfB1, AfB2, AfG1, AfG2). The electrochemical cell set at 7V, generated bromine and derivatized aflatoxins B1 and G1, The derivatives were detected by the fluorescence detector. The aflatoxins in naturally contaminated corn samples were isolated by three different cleanup procedures: the AOAC method I column(CB method), a rapid filtrate column (Romer's column), and an immunoaffinity column. The final extract were quantitated with fluordensitometric TLC and the LC postcolumn derivatization techniques. The results were quite similar, however the LC technique showed less interferences and could be automated. Samples of corn, raw peanuts, peanut butter and dried dates were also analyzed successfully with this procedure.
본 연구는 흰쥐에게 $AFB_1$을 투여하거나 방사선과 $AFB_1$을 병합처리함으로 유발된 흰쥐의 간세포에서의 $AFB_1$-DNA 부가체의 형성과 세포의 산화적 손상에 대한 vitamin C의 효과를 조사하기 위하여 수행되었다. X-ray 조사는 실험기간 내 단 1회로 실험사육기간 1일에 조사 하였고 X-ray 조사 후 vitamin C를 투여하였으며 vitamin C 투여 1시간 후 $AFB_1$을 투여하였다. Vitamin C와 $AFB_1$은 모두 복강투여로 실험 사육 첫 일부터 1회 시작하여 3일에 한번씩, 5회 반복 투였으며 실험동물 사육기간은 총 15일로 하였다. ELISA에 의한 흰쥐의 혈청 내 $AFB_1$ 잔여 농도는 $AFB_1$ 단독 투여군에서 $5.17{\pm}0.34ng/mL$이었으나 여기에 vitamin C 혼합 투여군에서는 $3.23{\pm}0.76ng/ml$가 검출되었다. 간세포의 $AFB_1$-DNA adduct 농도는 $AFB_1$ 단독 투여군에서는 $9.38{\pm}0.41ng/mL$이었으며 2군에 vitamin C를 함께 투여한 3군에서는 $5.28{\pm}0.32ng/ml$로 나타나 2군에 비해 유의적으로(p<0.001) 44% 감소한 양상을 나타내었다. 한편 X선 조사와 $AFB_1$ 병합처리한 4군에 비해 4군에 vitamin C를 투여한 5군에서 혈청 내 $AFB_1$ 함량과 간세포의 $AFB_1$-DNA adduct 함량이 다소 감소하였으나 유의적인 차이는 없었다. 또한 면역조직화학적 관찰에서 $AFB_1$ 단독 투여군에서는 중심정맥과 혈관주변에서 $AFB_1$ 축적이 관찰되었는데 이러한 현상은 vitamin C를 혼합 투여함으로써 중심정맥과 혈관 주변의 갈색 침전이 현저하게 감소한 것으로 나타났다. 그러나 X선 조사와 $AFB_1$ 병합 처리한 군에서는 그 정도가 약했다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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