팔만대장경판과 이를 보존하고 있는 건물인 장경판전으로부터 미생물조사를 실시하였고 조사를 통해 분리된 미생물들이 생산하는 xylanase의 특성을 조사하였다. 조사 당시에 장경판전의 내부 온도는 $20^{\circ}C$ 안팎으로 적절하게 유지되고 있었지만 상대습도는 최대 80%에 이르는 곳도 있어 미생물과 같은 생물적 열화원의 발생으로 문화재의 손상 가능성이 있을 것으로 생각된다. 분리된 5종류의 미생물인 Cladosporium cladosporioides H1, Penicillium citreonigrum H3, Penicillium toxicarium H4, Aspergillus versicolor H6, Acremonium alternatum H7은 모두 재질의 표면을 오염시키고 유기질 (cellulose, xylan, lignin)을 분해시킬 수 있는 곰팡이였다. 이들은 $20^{\circ}C$의 저온에서도 성장이 활발하여 xylanase의 생산도 활발히 이루어졌다. 이들에 의해 생산되는 xylanase는 균주의 종류에 따라 생산 속도의 차이가 있었으며 대부분 산성인 조건에서 xylan을 효과적으로 분해하는 것으로 조사되었다. 또한, Cladosporium cladosporioides H1와 Penicillium toxicarium H4의 xylanase는 산성 조건에서 열에 안정한 것으로 나타났지만 그 외 균주들이 생산한 xylanase는 열에 대한 안정성은 높지 않은 것으로 조사되었다. 이러한 조사 결과는 문화재의 보존 환경의 조절이나 보존제 개발을 하는데 기초자료로 활용될 수 있을 것으로 보이며 생물학적 열화를 일으키는 미생물을 제어할 수 있는 대안을 마련하는데 도움을 줄 것으로 기대된다.
사료곡물의 효율적 이용을 목적으로 cellulase 및 xylanase를 분비하는 미생물을 분리한 후 가장 생산성이 높은 균주를 선발하였다. 선발된 DK42 균주의 형태, 당 이용성 및 16S rRNA 유전자 서열분석 등을 통해 동정한 결과, Bacillus licheniformis에 속하는 것으로 나타났으므로 선발한 균주를 B. licheniformis DK42로 명명하였다. B. licheniformis DK42가 분비하는 cellulase 효소 활성은 대수생장기 중반부터 급격히 증가하였고, 균의 생장이 정체기에 이르면 효소의 활성도 더 이상 증가하지 않는 것으로 나타났다. 한편, xylanase 효소 활성은 세포 생장과 더불어 대수생장기 초기부터 지속적으로 증가하였으며, 대수생장기 후반에 최대 활성을 나타내고 효소 활성이 더 이상 증가하지 않는 것으로 나타났다. Cellulase 활성의 경우에는 최적 온도가 45℃이었고 10℃의 저온에서도 최대 활성의 50% 정도의 활성을 나타내었으며, xylanase는 cellulase 보다 약간 높은 55℃에서 최고 활성을 나타내었다. 한편, 두 효소의 열안정성을 조사한 결과, cellulase는 45℃에서는 2시간 후에도 효소의 활성이 안정하게 유지되었으나, xylanase는 45℃에서도 약간 이상의 온도에 방치한 경우에는 시간의 경과에 따라 효소의 활성이 점진적으로 감소하였다. 두 효소의 최적 pH를 조사한 결과, 두 효소 모두 pH 6.0에서 최대의 효소 활성을 나타내었으며, cellulase 활성은 pH 5.0부터 pH 8.0까지 상대적으로 넓은 범위에서 활성을 유지한 반면, xylanase 활성의 경우에는 pH 5.0 이하 또는 pH 8.0 이상에서는 활성이 급격히 저하되었다. Ⅴ. 사 사이 연구는 2006년도 단국대학교 대학연구비의 지원으로 연구된 것으로 이에 감사드립니다
Xylanase(1, 4-beta-D-xylan xylanohydrolase` EC 3.2.1.8) II was purified from Penicillium verruculosum by using the techniques of two anion exchange chromatographies, and gel filtration. The molecular weight of this enzyme was about 22, 000 as determined by SDS-electrophoresis. The enzyme showed hydropytic activity toward xylan but did not catalyze hydrolysis of Rho-nitrophenyl-beta-D-xylopyranoside, Rho-nitrophenyl-beta-D-glucopyranoside, Rho-nitrophenyl-beta-D-cellobiopyranoside, and celluloses such as Avicel, cotton, filter paper, carboxymethylcellulose.
Some properties of xylanase produced by Pleurotus ostreatus during its gorwth in a rice straw medium were investigated. The results are summarized as follows : 1) The optimum pH of xylanase was 5.0 and the stable pH ranged from 4.5 to 6.0. 2) The optimum temperature for the xylanse was around $50^{\circ}C$ and the xylanse activity was completely lost in 10 minutes at $70^{\circ}C$ 3) The activity of xylanse was inhibited by managanous ion, but was increased by other metalic ions. Especially K, Mg and Ca ions considerably increased the activity.
Some properties of xylanase produced by Pleurotus ostreatus during its gorwth in a rice straw medium were investigated. The results are summarized as follows : 1) The optimum pH of xylanase was 5.0 and the stable pH ranged from 4.5 to 6.0. 2) The optimum temperature for the xylanse was around $50^{\circ}C$ and the xylanse activity was completely lost in 10 minutes at $70^{\circ}C$ 3) The activity of xylanse was inhibited by managanous ion, but was increased by other metalic ions. Especially K, Mg and Ca ions considerably increased the activity.
회분배양과 유가배양을 이용하여 호알칼리성 Cephalosporium sp. RYM-202로부터 alkaline carboxymethyl cellulase (CMCase)와 Xylanase의 생산을 위한 배양조건에 대하여 조사하였다. 조사한 탄소기질 중에서 밀기울이 두 효소의 생산에 가장 효율적이었다. 또한 CMCase는 carboxymethyl cellulose (CMC)를 탄소기질로 첨가한 배양액에서, 반면에 xylanase의 경우에는 xylan을 기질로 하였을 때 높은 생산량을 나타냄으로서 유도기질 특이성을 보였는 바, 이 결과는 Cephalosporium sp. RYM-202에서의 CMCaee와 xylanase의 생합성이 효소 유도 수준에서 독립적으로 조절됨을 시사해 준다. 조사된 질소원 중에서는 무기질소원인 $NaNO_3$가 효소생산에 효과적이었으며, 이들 효소의 최대 생산을 위한 배양온도와 pH는 각각 $20^{\circ}C$와 9.0인 것으로 나타났다. 한편, 발효조에서의 회분배양을 통한 효소생산의 경우, 밀기울의 농도를 5%까지 증가시킴에 따라 효소생산량은 증가되었으나 catabolite repression에 의해 효소생산의 지연과 생산력의 감소를 초래하였다. 이러한 문제점은 탄소원의 간헐적 공급에 의한 유가배양을 통해서 어느 정도 해결될 수 있는 것으로 나타났으며, 밀기울의 최종농도가 5% 되게 공급된 유가배양 시 CMCase와 xylanase의 최대 효소생산량은 각각 0.39 및 9.2 units/ml 이었으며, 이는 같은 농도의 밀기울을 함유하는 회분배양 시 획득된 효소활성에 비해 각각 1.22배와 1.36배 증가된 것이다.
An in vitro and a feeding trial were conducted to investigate the effect of xylanase supplementation on the feeding value of growing pig diets containing high proportions of Chinese double-low rapeseed meals (DLRM). Seven diets were formulated to meet NRC (1998) nutrient requirements. Diet 1 based on corn-soybean meal was used as positive control 1, and diet 2, a practical diet which incorporated a conventional level of Chinese DLRM (60 g/kg diet), as positive control 2. Diet 3 contained a higher level of DLRM (100 g/kg diet) as the negative control. Diet 3 plus xylanase at 0.10, 0.25, 0.50 and 0.70 g/kg diet created diets 4, 5, 6 and 7, respectively. The seven diets were incubated in triplicate with the in vitro two-stage enzyme incubation method to predict responses of diets to xylanase in terms of digestibility of dry matter (DM), crude protein (CP) and neutral detergent fibre (NDF). In vitro, the negative control had the lowest CP and NDF digestibility. Both DM and CP digestibility were increased (p<0.05) owing to xylanase supplementation either at 0.50 or 0.70 g/kg diet, and NDF digestibility was improved following xylanase addition at all of the test levels. There was a high linear correlation ($r^2>90$, p<0.05) between the activity concentration of the enzyme when transformed into its logarithmic value and in vitro digestibility coefficients of DM, CP or NDF. In the feeding trial, 112 crossbred pigs were randomly assigned to seven dietary treatments with 16 replicate pens of one pig each. An obvious dose effect on growth rate was observed ($r^2=0.79$, p<0.05) within the inclusion levels of xylanase. Compared with the negative control, xylanase addition at 0.70 g/kg diet resulted in significantly increased ADG (878 g/d vs. 828 g/d, p<0.05), and a tendency towards improved growth rate (868 g/d vs. 828 g/d, p = 0.10) was also observed following the inclusion of xylanase at 0.50 g/kg diet. It would appear that the nutrient utilization of corn and Chinese DLRM diets by pigs could be enhanced by an appropriate amount of xylanase addition. The in vitro and in vivo results suggested that the in vitro incubation method is feasible for predicting responses of pigs to exogenous enzymes and identifying those preparations that possess potential for improvement of the nutritive values of feedstuffs.
Xylanase have been used to convert the polymetric xylan into fermentable sugars from the production of ethanol and xylitol from plant biomass. The aim of this study was to isolate and identify xylanolytic bacterium from herbivore feces and was to used the xylanase for enzymatic hydrolysis of biomass. Xylanolytic strains were isolated from 59 different feces of herbivores from Seoul Grand Park located in Gwacheon Gyeonggi-do. The xylanolytic strains were selected by congo red staining and DNS method. Total 67 strains isolated from the herbivores feces were tested for xylanase activity. Among the strains, H10-1, which has the highest xylanase activity, was isolated from feces of Ceratotherium simum. The H10-1 strain was identified as Bacillus pumilus based on its morphological/biochemical characteristics and partial 16S rDNA gene sequences. Culture conditions of B. pumilus H10-1 such as initial medium pH, incubation temperature and incubation time were optimized for maximum xylanase production. And also xylanase produced by B. pumilus H10-1 was applied for the saccharification of Miscanthus sacchariflorus cv. 'Geodae 1', which was pretreated with 1.5M NaOH. The optimized culture conditions of B. pumilus H10-1 were pH 9, $30^{\circ}C$ incubation temperature, and 7 day incubation time, respectively. This xylanase activity under the optimized conditions was $20.4{\pm}3.3IU$. The crude xylanase produced by B. pumilus H10-1 was used for the saccharification of xylan derived from pretreated 'Geodae 1'. The saccharification conditions were $50^{\circ}C$, 200 rpm, and 5 days. Saccharification efficiency of pretreated 'Geodae 1' by B. pumilus H10-1 was 8.2%.
농산폐기물을 이용할 목적으로 8점의 시료에서 xylanase생산성이 우수한 두개의 균주를 선발하여 동정하였다 선정된 두 균주에 대해 xylanase의 생산 최적조건효소의 제 특성을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. Xylanase생산에 우수한 균주로 Aspergillus niger-1701과 Aspergillus niger-430 두 균주를 선발하였다. 2. 두 균주 모두 배양시 pH $5.0{\sim}6.0$에서 배양 2일째에 최고의 효소역가를 나타내었다. 3. Aspergillus niger-1701균주에 대해서는 배양시 첨가한 C.M.C.가 21%, $NH_4H_2PO_4$가 19%, C.S.L.이 20%의 효소생산 증가를 나타냈으며 기타 탄소원, 질소원, 인산염, 생장요소, 무기염류 등은 큰 영향을 미치지 않았다. 4. Aspergillus niger-430균주에 대해서는 배양시 첨가한 탄소원, 질소원, 인산염, 생장요소, 무기염류 등이 효소생산에 큰 영향을 미치지 않았다. 5. 선정된 두 균주가 생산한 xylanase의 효소작용 최적 조건은 다음과 같다. pH:5.0 온도 : $60^{\circ}C$, 효소농도 : 33.3%(전용액중), 기질농도 : 2%, 효소작용시간 : 3 hrs. 6. 효소작응 최적조건에서 xylan최고 분해율은 95%였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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