5'-XMP를 5'-GMP로 전환하는 효소인 XMP aminase[EC 6.3.4.1]의 활성을 증가시키기 위하여 XMP aminase의 유전자를 함유한 1.7kb gua A gene fragment를 pLC 34-10으로부터 분리하여 pBR 322에 subcloning 한 뒤 trp promoter를 가지고 있는 대장균 발현 벨터 pDR 720에 도입하였다. 재조합된 pXAR 64에 존재하는 gua A 유전자는 trp Promoter에 의하여 발현이 증대되었으며 $3-{\beta}-indoleacrylic$ acid에 의하여 XMP aminase의 생성이 유도되었다. XMP aminase의 비활성은 pLC 34-10을 함유한 균주에 비하여 약 17배 증가되었다.
에너지 요구 반응 인 5'-XMP 의 5'-GMP 보의 효소적 전환을 위해 Escherichia coli CH 41(guaB mutant)로부터 추출 정제한 XMP aminase에 Saccharomyces cerevisiae의 glycolysis를 통한 ATP 재생계를 도입하였다. 전환 반응의 ATP원으로는 동결 건조 효모가 가장 효율적이었으며, 전환 반응의 최적 온도 및 pH는 각각 $40{\circ]C$, pH 7.4였다. 또한 100 mM glucose, 100 mM inorganic phosphate 및 6mM AMP 에서 가상 높은 전환율을 보였다. 상기의 조건에서 36 unit/ml의 XMP aminase 가 이용될 경우 효모 농도는 60 mg/ml로 충분하였으며, 최적 조건에서 6시간 반응시 1.8 mM(65.6 mg/100 ml) 5'- XMP 의 약 71%가 5'-GMP로 전환되었다.
Brevibacterium ammoniagenes ATCC 6872를 변이하여 얻은 adenine-guanine 및 $\beta$-alanine 영양요구성(營養要求性)이고 5'-XMP를 다량 생산하는 변이주 D-1550-40을 사용하여 발효배지성분(醱酵培地成分)의 최고농도(最高濃度)와 각 성분간의 상호작용효과(相互作用效果)를 검토하였다. 5'-XMP 축적(蓄積)에 필요한 adenine 및 guanine의 최적(最適) 농도(濃度)는 각각 75mg/l이었으나 생육(生育)에 대한 최적농도(最適濃度)는 이 보다 높은 100mg/ml이었고 그 이상의-농도에서는 5'-XMP 축적에 심한 저해를 초래하였다. 이러한 현상은 biotin을 $100{\mu}g/l$ 이상 첨가하거나 casamino acid를 0.3% 이상 첨가함으로서 배제할 수 있었다. 5'-lMP 발효의 경우와 마찬가지로 무기인산염(無機燐酸鹽)과 마그네슘은 5'-XMP 축적에도 $1.0{\sim}1.5%$1.5%가 적당(適當)하였다. $MnSO_4$의 농도가 $0{\sim}5mg/l$의 범위안에서 증가함에 따라 균증식과 5'-XMP의 축적은 촉진되었으나 그 이상의 농도에서는 변화가 없었고 정상상태를 나타내었다. Adenine과 guanine 각 100 mg/l, $MnSO_4\{cdot}7H_2O5mg/l 및 biotin $100{\mu}g/lg$가 함유된 발효배지에서 배양한 결과 4일후 60.5mg/ml의 5'-XMP가 측적되었으며, 5'-XMP의 생성활성(生成活性)은 균체량(菌體量)에 비례하여 배양 2일 내지 3일에서 가장 높았다.
5'-GMP의 직접발효생산균주의 분리목적으로 Breuibacterium ammoniagenes ATCC 6871에 자외선조사 및 NTG, DES 등의 변이제처리를 한 결과 guanine계 핵산관련물질을 직접 배지중에 축적하는 변이주는 분리할 수 없었으며, adenine영양요구주로써 GMP-reductase가 결핍되고 adenosine 및 AMP에 의해 생육저해를 받지 않는 변이주가 XMP-aminase activity가 현저히 높았음을 알았다. 이러한 변이주중 BA-17-2가 XMP-aminase의 activity가 가장 높았으며 또한 전환된 5'-GMP를 GDP나 GTP로 거의 인산화하지 않았으며 그리고 guanosine이나 guanine으로 분해하지 않았다. 생성된 5'-GMP를 anion exchange resin Duolite 102 D를 사용하여 분리하고 ultraviolet 및 Infra-red spectrum을 조사한 결과 5'-GMP로 동정되었다.
Ganoderma lucidum (Fr.) Karsten을 실험재료로 하여 자실체형성 전후의 RNA를 추출 정량하였다. 버섯의 자실체 형성 전후에 걸쳐 총 RNA함량에 차이가 있었으며 자실체 형성 전에 총 RNA함량이 두드러지게 많았다. 버섯의 추출물인 RNA를 알카리가수분해한 것을 P.E.I. cellulose TLC로 전개한 결과 GMP와 XMP가 확인되었으며 미확인물질로서 한개의 spot가 나타났다. 이것은 위치로 보아 CMP가 아닌가 생각된다. 영지의 RNA추출물을 HPLC로 분석한 결과는 XMP와 GMP가 확인되었으며 그 함량은 각각, 자실체 형성 전의 GMP는 7.l9mg%, XMP는 8.43mg%, 형성후의 GMP는 4.02mg%, XMP는 3.67mg%의 함량분포를 나타내었다.
사용자 참여, 개방, 공유를 기반으로 하는 웹2.0 환경 하에서 보다 효율적이고 합법적으로 UCC(User Created Contents)가 제작, 공유, 유통되기 위한 저작권 시스템으로서, CCL(Creative Commons License)이 빠르게 확산되고 있다. 그러나, UCC에 CCL메타데이터를 직접 첨부하지 않는 기존의 CCL어노테이션 방식은 의도적으로 또는 비의도적으로 UCC와 CCL메타데이터가 분리될 수 있는 문제점을 가지고 있다. 그 결과, UCC로부터 분리되어진 저작권관련정보는 변경 또는 분실되어 추후에 저작권분쟁의 원인이 될 수 있다. 본 연구에서는 RDF와 XMP를 기반으로 CCL메타데이터를 이미지 컨텐츠에 직접 부착하는 방법을 제안하고 이를 지원하기 위한 어노테이션 지원도구(CCL-MASTer)를 개발하였다. 본 연구결과는, 기존의 어노테이션 기법의 문제점을 해결하고 다양하고 풍부한 CCL메타데이터의 효율적인 어노테이션을 가능케 하여 UCC 저작권분쟁 해결방안 및 UCC와 UCC관련 CCL메타데이터의 생성과 검색 등의 토대가 된다.
전보(前報)에서 변이처리에 의해서 얻은 Brevibacterium ammoniagenes BA 17-2로부터 5'-XMP aminase를 생산(生産)하기 위하여 인산염, 마그네슘이온, 망간이온, thinamine의 예비적정농도를 정(定)하고자 생육도(生育度)를 조사했다. 본실험(本實驗)에서 배지중(培地中)의 인산염의 농도(濃度)가 균(菌)의 생육(生育)에 중요한 영향을 미치는 것을 보여주었다. $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, 0.2% $MnSO_4{\cdot}H_2O$ 3mg/l, $thiamine{\cdot}HCl$를 포함한 배지(培地)를 사용하면 최대 균체량은 $KH_2PO_4$, $K_2HPO_4$ 각각 0.4%의 농도에서 얻어졌다. 이러한 인산염 농도 이상에서 균생육(菌生育)은 인산염 농도가 1%까지 증가함에 따라 저해되었지만 저해작용은 1%의 $MgSO_4{\cdot}7H_2O$와 3mg/l의 $thiamine{\cdot}HCl$을 첨가하여 해소되었다. 5'-XMP aminase 역가도 역시 인산염, 마그네슘이온, 망간이온, thiamine의 농도에 영향을 받았다. 그밖에 효소역가에 대한 배양 최적 pH와 온도는 각각 6.8과 $32^{\circ}C$로 밝혀졌다.
시맨틱 웹에서는 기계가 처리할 수 있는 의미 정보를 토대로 보다 효율적이고 효과적인 시맨틱 검색과 웹서비스를 제공하는 것을 목적으로 한다. 따라서, 다양한 웹 컨텐츠들에 대하여 컴퓨터가 이해 가능한 형식으로 메타데이터를 생성하고 추가하는 과정, 즉, 시맨틱 어노테이션이 시맨틱 웹의 중요한 기반기술 중의 하나이다. 최근에는 어노테이션 정보를 관리하기 위해서, 대상문서 내부에 메타데이터를 직접 내장시키는 기법이 주로 사용되고 있다. 그러나, 웹 문서의 시맨틱 어노테이션과 관련하여 기존의 지원도구들은, 주로 HTML 문서를 대상으로 하고 있고, 대부분의 도구들에서는 메타데이터를 활용한 시맨틱 검색기능을 제공하지 않고 있다. 본 연구에서는, 이와 같은 문제점들과 기존의 관련 연구결과들을 토대로, 웹 문서(HTML, PDF)들에 대한 시맨틱 어노테이션을 보다 효율적으로 지원하기 위한 온톨로지 기반의 시맨틱 어노테이션 지원도구(OSA)를 개발하였다. OSA에서는, RDFS(RDF Schema)로 시맨틱 어노테이션 모델을 정의하고, 이를 토대로 온톨로지 기반의 의미정보들을 표현하며, XMP(eXtensible Metadata Platform)표준에 맞추어서 해당 디지털 문서 내에 시맨틱 어노테이션 정보를 내장시킨다. 본 연구에서 개발한 어노테이션 도구를 활용함으로써, 웹 문서에 대한 효율적인 시맨틱 어노테이션이 가능하며, XMP를 기반으로 웹 문서 자체와 시맨틱 어노테이션 정보를 일체화시킴으로써 어노테이션 정보관리에 정합성을 유지할 수 있으므로, 향후 다양한 웹 컨텐츠에 대한 시맨틱 검색에 효과적으로 활용될 수 있다.
각종 업무처리시스템이 웹기반으로 구현되는 것이 보편화됨에 따라 전자소송분야에서도 이에 대한 적용이 활발하다. 소송기록을 중심으로 하는 전자소송에서는 웹상에서 전자문서를 안전하게 유통 활용하기 위해서 기록으로서의 원본성, 사건으로서의 특수성 및 위변조 방지 등의 보안성을 고려하여 전자문서 구조가 설계되어야 한다. 본 논문은 소송기록으로 적합한 전자문서 포맷과 특수한 사건정보를 관리하기 위한 XMP 및 전자문서 유통을 위한 보안요소의 연구를 통하여 헌법재판분야의 전자소송 구현시 적합한 전자문서 구조를 설계하고, 적용된 결과를 분석하였다. 본 연구는 웹상에서 전자문서 교환을 통해서 업무처리를 구현하고자 하는 경우에 유용한 참고 자료가 될 것이다.
본 연구에서는 이온쌍 역상 HPLC/UV를 이용하여 건강한 한국인에서 분리된 말초혈액단핵구(PBMCs)에서 이노신 5'-일인산 탈수소효소(IMPDH)의 활성을 측정하였다. IMPDH는 이노신 5'-일인산(IMP)을 잔토신 5'-일인산(XMP)로 전환시키는 베타-니코틴아마이드 아데닌 디뉴클로티드 수화물(${\beta}-NAD^+$) 의존성 탈수소효소이며, 이것의 활성은 기질인 IMP와 조효소인 $NAD^+$의 존재 하에서 분해한 PBMCs로 부터 생성된 XMP에 해당하는 HPLC 크로마토그램을 정량적으로 분석함으로써 측정하였다. 생성된 XMP는 260 nm에서 검출하였다. 이동상으로는 7 mM tetra-n-butylammonium hydrogen sulfate가 포함된 37 mM potassium dihydrogen phosphate (pH 5.5)와 methanol의 혼합용액(85:15, v/v)을 사용하였으며, 유속은1 mL/min이었다. 정량 범위는 $0.2-50.0\;{\mu}M$이었으며, 이 때 정량 한계(LOQ)는 $0.2\;{\mu}M$이었다. 또한, 본 연구에서 확립된 시험법은 일내 정밀성(0.88-1.47%), 정확성(98.74-99.99%)과 일간 정밀성(0.85-5.24%), 정확성(99.95-101.65%)을 측정하여 검증하였다. 11명의 건강한 한국인에 대한 IMPDH 활성 측정 결과, 18.29-36.60 nmol/h/mg protein(평균값 $27.70{\pm}6.28\;nmol/h/mg$ protein)이었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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